Бруцеллез. Лабораторная диагностика

Содержание

Слайд 2

Схема лабораторной диагностики бруцеллеза

Схема лабораторной диагностики бруцеллеза

Слайд 3

Схема лабораторной диагностики бруцеллеза

Схема лабораторной диагностики бруцеллеза

Слайд 4

Лабораторная диагностика бруцеллеза включает: - проведение диагностических исследований клинического материала от

Лабораторная диагностика бруцеллеза включает:

- проведение диагностических исследований клинического материала от людей

для установления диагноза у больных с подозрением на заболевание бруцеллезом. Клинический материал: кровь, сыворотка крови, спинномозговая жидкость, синовиальная жидкость (при артритах), моча, желчь, гной (при абсцессах), пунктаты костного мозга и лимфатических узлов;
- проведение по эпидпоказаниям лабораторных исследований материала из сырья животного происхождения (шерсть, кожа), продовольственного сырья (мясо и мясные продукты, молоко и молочные продукты) и из объектов окружающей среды (почва, трава, фураж, подстилка, вода, смывы и т.д.)
Забор материала и лабораторное исследование материала от больных животных производят ветеринарные службы
Слайд 5

При работе с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителем бруцеллеза,

При работе с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителем бруцеллеза,

соблюдают:

СП 3.1.085-96 Санитарные правила «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных»
ВП 13.3.1302-96 Ветеринарные правила
СП 1.3.3118-13 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)» Санитарно-эпидемиологические правила
МУ 3.1.7.1189-03 «Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей» (М.,2003)
МУК 4.2.3010-12 «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней» (М., 2012)

Слайд 6

Требования к лабораториям медицинских организаций, осуществляющим исследования на бруцеллез: Наличие разрешительных

Требования к лабораториям медицинских организаций, осуществляющим исследования на бруцеллез:

Наличие разрешительных и

регламентирующих работу документов
Требования к обеспечению безопасности работы персонала - инструкций, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ. Все сотрудники обязаны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III-IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами
Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на бруцеллез - Исследования на бруцеллез могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие соответствующие курсы профессиональной переподготовки с освоением методов безопасной работы с возбудителями инфекционных болезней I-IV групп патогенности (опасности), не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА III-IV групп на основании приказа руководителя учреждения
Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет и иметь сертификат специалиста
Слайд 7

Возбудителей бруцеллеза относят ко II группе патогенности: –

Возбудителей бруцеллеза относят ко II группе патогенности:
–

Слайд 8

Методы лабораторной диагностики бруцеллеза: Микроскопический Бактериологический Биологический Иммунологический Аллергический Молекулярно-генетический

Методы лабораторной диагностики бруцеллеза:

Микроскопический
Бактериологический
Биологический
Иммунологический
Аллергический
Молекулярно-генетический

Слайд 9

Микроскопический метод: Материал для микроскопияеского иссследования: органы абортированного плода, плацента и

Микроскопический метод:

Материал для микроскопияеского иссследования: органы абортированного плода, плацента и выделениях

из родовых путей больных животных, биологический материал от людей, а также выделенные культуры на этапах их идентификации
Окрашивание по Граму или по Козловскому - по Граму окрашиваются отрицательно, при окраске по методу Козловского бруцеллы приобретают розово-красный цвет сафранина (в то время как другие микроорганизмы – зеленые)
«Раздавленная капля» – неподвижны
Спорообразование - отсутствует
В мазке: полиморфизм, кокковидная или палочковидная формы клеток с закругленными концами размером 0,5-2 мкм в длину и 0,3-0,7 мкм в ширину. В одном препарате, особенно в молодых культурах, возможно беспорядочное присутствие всех морфологических форм
Бруцеллы вида B.melitensis чаще представлены кокковидными формами, а микроорганизмы B.abortus и B.suis – палочками с закругленными концами
Клетки B.suis несколько крупнее остальных видов бруцелл
Слайд 10

Бактериологический метод - «золотой стандарт микробиологии» Бактериологическое подтверждение инфицирования организма возбудителем

Бактериологический метод - «золотой стандарт микробиологии»

Бактериологическое подтверждение инфицирования организма возбудителем

бруцеллеза обеспечивается не всегда. Эффективность бактериологической диагностики бруцеллезной инфекции во многом зависит от качества используемых для выделения возбудителя питательных сред и используемых селективных добавок
Слайд 11

Материал для бактериологического исследования: от людей - кровь, костный мозг, спинномозговая

Материал для бактериологического исследования:

от людей - кровь, костный мозг, спинномозговая

жидкость, пунктат из лимфоузлов, моча, суставная жидкость, ликвор, гнойное отделяемое, мокрота и другой клинический материал - осуществляют при поступлении до начала антибиотикотерапии;
от животных - абортированные плоды, плодные оболочки, желудок плода с его содержимым, лимфатические узлы, влагалищные выделения, молоко;
пищевые продукты - сливки, сыры, творог, мясо;
объекты внешней среды - вода, почва, навоз, подстилки животных, кормушки и т.д.
Слайд 12

Бактериологическое исследование посевов от биопробных животных: Перед посевом органов на питательные

Бактериологическое исследование посевов от биопробных животных:

Перед посевом органов на питательные среды

их целесообразно раздавить (Таран И.Ф., Лямкин Г.Н., 1996)
Для этого кусочки органов берут в стерильную чашку или керамическую ступку, которые заворачивают в салфетку, смоченную дезраствором. В таком виде материал переносят из вскрывочной комнаты в лабораторный бокс, где раздавленную стерильной деревянной палочкой или пестиком ткань органа втирают в плотные питательные среды
Культуры выдерживают при 37 0С в течение 25-30 сут
Просмотр посевов производят каждые 3-4 сут
Выделенные микроорганизмы подвергают видовой идентификации и дифференциации
Слайд 13

Питательные среды для выделения и культивирования бруцелл: Мясо-пептонный, печеночный, глюкозо-глицериновый, сывороточно-декстрозный

Питательные среды для выделения и культивирования бруцелл:

Мясо-пептонный, печеночный, глюкозо-глицериновый,

сывороточно-декстрозный бульоны и агары
Агары Мартена и Альбими
Среды «Д», «4Д»
Среда Мюллер-Хинтона
Эритрит-агар с добавлением 1% глюкозы и 2% глицерина (г. Махачкала) - Среда особенно эффективна при выделении первой генерации возбудителя, однако при последующих пересевах на эритрит-агаре культура бруцелл нередко диссоциирует
Бруцеллагар, разработанный Государственным Научным Центром прикладной микробиологии (г. Оболенск Московской обл.), как и
FT(«туляремийный»)-агар, которые при добавлении глюкозы (до 1%) и глицерина (до конечной концентрации 2%) также на 3 сут обеспечивают рост колоний возбудителя бруцеллеза
Среда для культивирования B. ovis (печеночный или мясопептонный агар c добавлением 1% D-глюкозы и 2% глицерина, 20% нормальной сыворотки КРС или 10% аминопептида и 10% сыворотки
Среда для выделения и культивирования L-форм бруцелл и др.
Слайд 14

Рекомендуемые добавки: Декстроза (D-глюкоза) (до 1%) Глицерин (до 2%) Дефибринированная кровь

Рекомендуемые добавки:

Декстроза (D-глюкоза) (до 1%)
Глицерин (до 2%)
Дефибринированная кровь барана

или лошади (до 5%)
Липоевая кислота (5 мг/л)
Витамин К
Витамин В1 (тиамина гидрохлорид)
Слайд 15

Другие коммерческие сухие среды: Ингредиенты грамм/литр Настой говяжьего сердца 500,00 Триптоза

Другие коммерческие сухие среды:

Ингредиенты грамм/литр
Настой говяжьего сердца 500,00
Триптоза 10,00
Натрия хлорид 5,00
Желатин

1,00
Глюкоза 2,50
Агар-агар 15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2

Brucella Selective Medium Base агар рекомендуют для селективного выделения и культивирования бруцелл
Баранья кровь и настой говяжьего сердца облегчают культивирование различных прихотливых микроорганизмов
Триптоза, желатин, глюкоза - источники необходимых питательных веществ
Присутствие антибиотиков делает среду высоко селективной в отношение бруцелл

Инструкция по применению: Размешать 21,75 г порошка в 500 мл дистиллированной воды и прокипятить. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) 15 мин
Остудить до 50 °С и асептически добавить растворенное в 50 %-м метаноле содержимое 1 флакона со специальной добавкой (FD161). Тщательно перемешать и разлить в посуду

В настоящее время ряд зарубежных фирм (в частности, «Hi Media Laboratories Pvt.Ltd», Индия) для лабораторной диагностики бруцеллеза производят коммерческие сухие сертифицированные в соответствии с Европейским стандартом качества (СЕ) питательные основы сред и селективные добавки
Brucella Selective Medium Base (w/o Supplement) + Selective Supplement
Eugonic Agar/Broth
Tryptose Soya Agar

Слайд 16

Этапы бактериологичекого исследования при подозрении на бруцеллез (Ляпустина Л.В.,1998): Перевод исследуемого

Этапы бактериологичекого исследования при подозрении на бруцеллез (Ляпустина Л.В.,1998):

Перевод исследуемого материала

в жидкую фазу: эмульгация в 0,85% растворе NaCl или бульоне
Концентрирование возбудителя в исследуемом материале (центрифугирование пробы при 3000 g в течение 2 ч, фильтрация и добавление к осадку специфической бруцеллезной агглютинирующей сыворотки в соотношении 1:100
Посев на соответствующие питательные среды
Слайд 17

Транспортные среды для взятия материала в полевых условиях: Использование транспортных сред

Транспортные среды для взятия материала в полевых условиях:

Использование транспортных сред

позволило повысить эффективность бактериологической диагностики бруцеллеза до 70% (Богданов И.К., 1999, Ляпустина Л.В.,2005)
В состав транспортной среды входят: питательная основа (гидролизат говяжьего мяса), хлорид натрия, цитрат натрия, глицерин, глюкоза, липоевая кислота
Для транспортных целей возможно применение печеночного бульона с добавлением 1% пептона, а также
0,85% раствора NaCl, разлитого в пенициллиновые флаконы, куда стерильно через резиновую пробку шприцем вносят по 1 мл посевного материала (крови, спинномозговой жидкости, синовиального экссудата, биоптата из очагов)
Упаковка проб: принцип тройной упаковки (водонепроницаемый герметичный контейнер, адсорбирующий материал, вторичная упаковка и наружная упаковка не менее 10х10 см, опечатанная, маркированная, с надписью «верх, осторожно»). Транспорт – специально выделенный
Недопустимо помещение сопроводительных документов в тару с пробами
В условиях специализированной лаборатории из транспортной среды делают высев на соответствующие питательные агары
Слайд 18

Посев материала, загрязненного посторонней микрофлорой: Посев проб из объектов внешней среды

Посев материала, загрязненного посторонней микрофлорой:

Посев проб из объектов внешней среды или

трупного материала от животных осуществляют на питательные среды с ингибиторами роста микробов-контаминантов:
генцианвиолет 1:200.000 или
антибиотики (пенициллин 25 мкг/мл, полимиксин 3 мкг/мл, амфоглюкамин 3 мкг/мл, кефзол 3 мкг/мл, амфотерицин 1 мкг/мл), не препятствующие росту бруцелл
Слайд 19

Посев молока: Исследование молока из больших емкостей проводят путем забора 100

Посев молока:

Исследование молока из больших емкостей проводят путем забора 100 мл

пробы из верхнего слоя и последующего взятия после перемешивания еще 100 мл
Результативным бывает посев сливок, полученных центрифугированием молока при 2000g в течение 3-5 мин или после его отстаивания при 40 0С в течение 1 сут
Консервацию молока при проведении отсроченного анализа осуществляют добавлением в него сухой борной кислоты (на 10 мл пробы 0,1 г борной кислоты), генцианвиолета до конечной концентрации 1 : 250 000 или малахитгрюна 1 : 500 000
Слайд 20

Посев крови: Посев крови от больного наиболее целесообразно осуществлять во время

Посев крови:

Посев крови от больного наиболее целесообразно осуществлять во время лихорадочного

периода, хотя положительный результат возможен и вне его
Кровь (по 5 мл) засевают в 2 флакона с бифазной средой или в жидкие питательные среды для транспортировки
При исследовании крови в жидкие питательные среды перед посевом рекомендуют добавлять стерильный раствор цитрата натрия до конечной концентрации 0,2%
Кровь берут у постели больного и тут же засевают на питательные среды. Рекомендуется осуществлять эти процедуры вдвоем. Один медицинский работник проводит обработку кожи больного и венопункцию, второй в это время открывает над пламенем спиртовки пробки флаконов со средами, подставляет их под струю крови из шприца, обжигает и закрывает горлышки флаконов
Посевы крови инкубируют при 370С не менее 30 сут во флаконах в вертикальном положении
Слайд 21

Посев крови на плотные среды (или высев из бульонной культуры) Также

Посев крови на плотные среды (или высев из бульонной культуры)

Также осуществляют

во флаконы с широким горлом на скошенный агар
Инкубация 370С – 30 сут в обычных условиях и условиях 10% СО2
1 раз в 2-3 дня посевы осторожно перемешивают, смачивая поверхность питательной среды
При появлении типичных колоний проводят их идентификацию
Слайд 22

Культивирование бруцелл: Бруцеллы требовательны к условиям культивирования и обладают замедленным ростом

Культивирование бруцелл:

Бруцеллы требовательны к условиям культивирования и обладают замедленным ростом (от

3 до 14 сут и более)
Наиболее медленно растут культуры бруцелл, выделенные из организма в первых генерациях
Лабораторные штаммы появляются на агаре через 24-48 ч после посева
Оптимум температуры 370С
рН 7,2
Слайд 23

Потребность в СО2: С учетом потребностей B. abortus и B. suis

Потребность в СО2:

С учетом потребностей B. abortus и B. suis в

повышенном (5-10%) содержании СО2 в атмосфере посевы дублируют в СО2-инкубаторах (или эксикаторе) и в обычных условиях
Слайд 24

Автоматизированные системы учета посевов крови: В зарубежной практике исследование крови на

Автоматизированные системы учета посевов крови:

В зарубежной практике исследование крови на гемокультуру

является одним из наиболее массовых видов лабораторных исследований
Применение автоматизированных систем для индикации микробного роста в посевах крови позволяет ускорить получение результата
Приборы для этой цели выпускаются многими фирмами. Они отличаются друг от друга производительностью, уровнем автоматизации, но главное - способами детекции микробного роста
Одним из наиболее популярных в Европе анализаторов для детекции культур крови является прибор VITAL, предлагаемый фирмой bioMerieux. Этот прибор позволяет одновременно исследовать до 1200 образцов
Пробу крови объемом 5-10 мл засевают во флакон со специальной питательной средой. Флакон устанавливают в блок детекции прибора и инкубируют при осторожном встряхивании
Каждые 15 минут с помощью специальной флюоресцентной технологии прибор осуществляет детекцию микробного роста по продукции СО2, изменению рН и модификации окислительно-восстановительного потенциала среды
Информация о получении положительного сигнала отражается звуковым сигналом, выводится на монитор компъютера и дублируется внутри модуля детекции, рядом с нужным флаконом. Время детекции от 9 до 120 часов
Слайд 25

Широкое распространение за рубежом получила система для обнаружения микроорганизмов в крови

Широкое распространение за рубежом получила
система для обнаружения микроорганизмов в

крови фирмы Oxoid – «Signal blood system»
Система состоит из двух сосудов, соединенных между собой с помощью полой иглы. Нижний сосуд заполнен специальной питательной средой и укупорен резиновой пробкой
После посева в пробку вставляют полую иглу, канюля которой вмонтирована в дно верхнего сосуда, исполняющего роль индикатора
При росте микроорганизмов образуются газообразные продукты метаболизма. В нижнем флаконе повышается давление, и часть питательной среды с кровью через иглу выдавливается в верхний индикаторный сосуд. Открыв крышку индикаторного сосуда, можно интактно взять материал для посева или приготовления мазка
Такой подход позволяет регистрировать наличие бактериального роста на ранних этапах и резко упрощает процедуру ревизии посевов
При посевных дозах 1-13 клеток рост бактерий разных видов проявляется через 17-72 часа
Слайд 26

Для получения капсульных форм бруцелл используют: Среды с иммунной сывороткой Яичные

Для получения капсульных форм бруцелл используют:

Среды с иммунной сывороткой
Яичные

среды Петрова, Дорсе, Петраньяни
Культивирование в курином эмбрионе или
в присутствии специфического бактериофага
Слайд 27

L-формы бруцелл появляются после антибиотикотерапии: Способ посева бактериологического материала для выделения

L-формы бруцелл появляются после антибиотикотерапии:

Способ посева бактериологического материала для выделения

L-культур идентичен с методом выделения бактериальных гемокультур
Посевы выдерживаются в термостате не менее 35 - 40 дней
Среда для выделения и культивирования L-культур бруцелл:
Основа –печеночный бульон, мясная вода, пептон, рН 7,8, с добавлением глицерина и глюкозы
Заготовленный агар по мере надобности (перед посевом крови) расплавляют в водяной бане, охлаждают до 50 °C и к нему добавляют 25% нормальной лошадиной сыворотки (предварительно простерилизованной через фильтр Зейтца), 25% печеночного или мясопептонного бульона (в соответствии с основой агара), содержащего 50 - 100 ед. пенициллина на 1 мл среды
Посев крови, в объеме не менее 5 мл, пунктатов костного мозга и лимфоузлов производят на питательную среду сразу же после застывания агара и добавления бульона (метод предложен НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи)
Слайд 28

Дифференциация S- и R-форм бруцелл по White & Wilson: Исследуемые колонии

Дифференциация S- и R-форм бруцелл по White & Wilson:

Исследуемые колонии засевают

на Альбими-агар, разлитый в чашки Петри и подсушенный в течение 24 час
Посевы выдерживают при 370С в течение 96 час
На поверхность культур наслаивают водный раствор кристаллвиолета 1:2000 на 15 сек
Краску сливают в дезраствор, колонии
микроскопируют или просматривают
в проходящем свете
Шероховатые колонии приобретают красную или сине-красную окраску, S-формы остаются бледно-синеватыми или бледно-фиолетовыми

Некоторые виды (B. ovis, B. canis) существуют преимущественно в R-форме

Слайд 29

Родовую идентификацию выделенных культур проводят на основании: Изучения морфологии колоний Микроскопии

Родовую идентификацию выделенных культур проводят на основании:

Изучения морфологии колоний
Микроскопии мазков,

окрашенных по Граму или Козловскому
По результатам прямого иммунофлуоресцентного метода и
Реакции агглютинации на стекле с поливалентной и монорецепторными сыворотками
Слайд 30

Выявление R-форм бруцелл: Проба с трипафлавином На предметном стекле изучают взаимодействие

Выявление R-форм бруцелл:

Проба с трипафлавином
На предметном стекле изучают взаимодействие исследуемой

культуры с раствором трипафлавина 1:500. У диссоциированных культур быстро (в течение 1-2 мин) начинается агглютинация с образованием хорошо выраженных хлопьев. Взвесь из S-форм бруцелл остается гомогенной
Реакция термопреципитации
Взвесь двухсуточной агаровой культуры бруцелл в 0,85% растворе Na Cl в концентрации 1•109 м.к./мл подогревают в пробирке на водяной бане при 900С в течение 30 мин. Результаты учитывают предварительно через 30-60 мин и окончательно через 24 ч выдерживания при комнатной температуре
В эти сроки при наличии диссоциации наступает ясно выраженная агглютинация клеток бруцелл, тогда как взвесь клеток бруцелл в S-форме остается гомогенной
Слайд 31

Проба с трипафлавином (реакция Алессандрини и Сабатучи): Трипафлавин – солянокислая соль

Проба с трипафлавином (реакция Алессандрини и Сабатучи):

Трипафлавин – солянокислая соль

3,6-диамино-10-метилакридина
Диссоциированные культуры бруцелл вызывают агглютинацию на стекле в капле 0,2% раствора трипафлавина в 0,15М NaCl,
Клетки недиссоциированных штаммов дают гомогенную взвесь
Диссоциированные культуры
не сразу дают колонии R-формы,
хотя реакция термопреципитации и проба с трипафлавином уже будут положительными
Слайд 32

Феномен термопреципитации Бюрне: Реакция направлена на выявление диссоциированных штаммов, которые при

Феномен термопреципитации Бюрне:

Реакция направлена на выявление диссоциированных штаммов, которые при
прогревании их

культуральной взвеси при 85-90 0С в течение 30 мин дают спонтанную агглютинацию

Считают, что в процессе диссоциации
у бруцелл нарастает количество белков с гидрофобными свойствами

Слайд 33

Единые Видовые идентификационные тесты для выделенных культур (видовая дифференциация бруцелл): Определены

Единые Видовые идентификационные тесты для выделенных культур (видовая дифференциация бруцелл):

Определены Подкомитетом

по таксономии бруцелл Международного комитета номенклатуры бактерий и Объединенным комитетом ФАО/ВОЗ по бруцеллезу и включают:
изучение условий культивирования выделенных культур
определение их чувствительности к анилиновым краскам
определение способности образовывать сероводород
определение уреазной активности
изучение окислительно-метаболических реакций
изучение чувствительности к бруцеллезным фагам Tb ,Bk, Wb, Fi
выявление агглютинабельности монорецепторными (анти-abortus и анти-melitensis) сыворотками, а также
изучение вирулентности для лабораторных животных и
ряда других признаков
Слайд 34

Отношение к атмосферному СО2: В отличие от B. melitensis и B.

Отношение к атмосферному СО2:

В отличие от B. melitensis и B. suis,

культуры B. abortus и B. ovis в первых генерациях растут лишь при повышенном до 5-10% содержании СО2 в атмосфере термостата


Слайд 35

Редуцирующая активность в отношении основного фуксина и тионина: Возбудители бруцеллеза относительно

Редуцирующая активность в отношении основного фуксина и тионина:

Возбудители бруцеллеза относительно устойчивы

к бактериостатическому действию красителей – основного фуксина и тионина
Различная устойчивость к анилиновым краскам лежит в основе видовой дифференциации бруцелл:
Фуксин 1:50000 не влияет на рост B. abortus, но ингибирует рост B. suis
Тионин 1:50000 не влияет на B. suis, но может ингибировать B. abortus
B. melitensis хорошо растет в присутствии всех анилиновых красителей
К расплавленному питательному агару добавляют основной раствор красок (0,1 г краски, 20 мл 960 спирта, 80 мл дистиллированной воды) до концентрации 20 мкг/мл и разливают пипеткой по 20-25 мл в каждую чашку. Среды пригодны в течение 10-14 дней. Обесцвеченные среды не используют
Посевы производят секторами из взвеси 2-суточной агаровой культуры бруцелл в концентрации 2•109 м.к./мл
Иногда используют диски с красками, которые помещают в чашки Петри на плотную питательную среду с исследуемой культурой
Учет результатов осуществляют через каждые 48 ч при 370С в течение 6сут.
Слайд 36

Редуцирующая активность бруцелл в отношении красителей: тионин фуксин

Редуцирующая активность бруцелл в отношении красителей:

тионин

фуксин

Слайд 37

Сульфатредуцирующая активность бруцелл: Способность к образованию сероводорода выявляют на средах, содержащих

Сульфатредуцирующая активность бруцелл:

Способность к образованию сероводорода выявляют на средах, содержащих

серу в легко редуцируемом состоянии (цистин, цистеин, тиогликолевая кислота, тиомочевина)
Взвесь 2-суточной изучаемой культуры в концентрации 2•109 м.к./мл засевают петлей диаметром 2 мм на пробирку с агаром. Под пробку помещают полоску фильтровальной бумаги, смоченную насыщенным раствором уксуснокислого свинца так, чтобы ее свободный конец не касался посева. Посевы инкубируют в термостате при 370С. Результаты учитывают через каждые 48 ч в течение 6 сут.
Показателем интенсивности образования сероводорода является почернение свободного края фильтровальной бумаги, которое измеряют в мм. При каждом учете почерневшую полоску заменяют новой. Для окончательной оценки способности культур к образованию H2S все три показателя складывают
Возбудители B.melitensis, B.ovis, B.canis Н2S не образуют
Для культур вида B. suis (1 биовар) суммарный показатель составляет примерно 12-20 мм, для B. abortus (1 биовар) – около 5-7 мм, у культур B. neotomae равен 5-8 мм
Слайд 38

Образование H2S: Реакция ацетата свинца с сероводородом с образованием черного осадка сульфида свинца:

Образование H2S:

Реакция ацетата свинца с сероводородом с образованием черного осадка сульфида

свинца:
Слайд 39

Уреазной активностью обладают все эпидемиологически значимые виды бруцелл: Виды B.melitensis, B.abortus

Уреазной активностью обладают все эпидемиологически значимые виды бруцелл:

Виды B.melitensis, B.abortus и

B.suis гидролизуют мочевину в среде Кристенсена с образованием аммиака и углекислоты, в результате чего происходит изменение цвета среды из желтого в розовый или малиновый
Наиболее выражена уреазная активность у бруцелл вида B.suis, B.melitensis, B.neotomae, B.ovis, наименее – у B.abortus
Наиболее быстро и интенсивно изменение цвета среды Кристенсена происходит при высеве культур B. suis
Менее интенсивно цвет среды изменяется при посеве культур B. melitensis, наиболее медленно и слабо – при росте B. abortus
Проведение дифференцирующих тестов осуществляют
параллельно и с референтными штаммами бруцелл
B.melitensis 16M, B.abortus 544, B.suis 1330 (биовар 1)

Уреаза - гидролитический фермент из группы амидаз, обладающий специфическим свойством катализировать гидролиз мочевины до диоксида углерода и аммиака: CO(NH2)2 + H2O → CO2 + 2NH3

Слайд 40

Определение дезаминазной активности бруцелл: основано на качественном определении аммиака, образующегося в

Определение дезаминазной активности бруцелл:

основано на качественном определении аммиака, образующегося в

результате дезаминирования аденина до гипоксантина
Взвесь 2-сут агаровой культуры исследуемого штамма в 0,15 М NaCl рН 7,2
3•109 м.к./мл делят на 2 части
В опытную пробирку добавляют 1 мл 1% раствора аденина, в контрольную – 1 мл дистиллированной воды – инкубация при 370С - 24 ч, после чего
В каждую пробу добавляют по 0,2 мл реактива Несслера
Учет результатов производят визуально:
Если исследуемая культура не обладает дезаминазной активностью в отношении аденина (отрицательная проба) – раствор обесцвечен или слегка окрашен в желтовато-зеленый цвет, как и в контроле
При наличии дезаминазной активности (положительная проба) наблюдается ярко-красное окрашивание
Культуры бруцелл видов B. abortus и B. melitensis не обладают дезаминазной активностью, для B. suis она характерна
Слайд 41

Агглютинация монорецепторными А- и М-сыворотками: Монорецепторные (anti-abortus и anti-melitensis) сыворотки в

Агглютинация монорецепторными А- и М-сыворотками:

Монорецепторные (anti-abortus и anti-melitensis) сыворотки в объеме

0,5 мл титруют в 0,15 М растворе NaCl от 1:10 до их предельного титра
Во все опытные пробирки добавляют взвесь 2-суточной агаровой культуры изучаемого штамма в концентрации 2•109 м.к./мл в 0,15 М растворе NaCl по 0,5 мл
Контролями служат эталонные штаммы B.abortus 544 и B.melitensis 16М
Инкубация 370С- 2 ч, комн t 18-20 ч
Агглютинацию на 2+ и более с разведения 1: 20
учитывают как положительный результат
Бруцеллы вида B.melitensis (1 биовар) образуют хлопья агглютината с монорецепторной сывороткой anti-В.melitensis,
культуры вида B.abortus (1 биовар) – сывороткой anti-В.abortus
Для культур бруцелл видов B.ovis и B.canis и других, находящихся в R-форме, при проведении реакции агглютинации используют R-сыворотку, которую титруют в ФБР рН 8,2-8,4
Слайд 42

Слайд 43

Пробы с фагами:

Пробы с фагами:

Слайд 44

Чувствительность к бруцеллезным диагностическим бактериофагам: Для постановки теста используют набор бактериофагов

Чувствительность к бруцеллезным диагностическим бактериофагам:

Для постановки теста используют набор бактериофагов бруцеллезных

диагностических Тb; Wb, BK2, Fi (производства ФГУЗ СтавропольНИПЧИ Роспотребнадзора) в рабочем диагностическом титре (РДТ)
Для посева применяют 1-2-суточную взвесь агаровой культуры в концентрации 2•109 м.к./мл в 0,15 М растворе NaCl
Посев изучаемых культур осуществляют «газоном», на который «дорожкой» или петлей наслаивают бактериофаги,
Пробу с бактериофагами можно проводить двуслойным методом
Необходимым условием успешной постановки пробы является подсушивание посева культуры до нанесения бактериофагов
Результаты учитываются через 24-36 ч инкубации при 370С
Слайд 45

Проба с фагом (двуслойный метод): 0,7% полужидкий агар в пробирке растапливают

Проба с фагом (двуслойный метод):

0,7% полужидкий агар в пробирке растапливают над

пламенем спиртовки, пока столбик агара не начнет образовывать пузыри и подниматься вверх
Пробирку остужают до 45 0С
В охлажденный до 45 0С агар добавляют бульонную культуру исследуемого штамма «средней мутности» (109 м.к./мл – 0,3-0,4 мл)
Выливают через край на чашку Петри с питательной средой и оставляют в приоткрытом виде
После подсушивания (37 0С 30 мин)
в сооответствии с предварительно
произведенной разметкой наносят
краем петли раствор фага
Слайд 46

Проба с фагами методом дисков: Фаголизабельность исследуемого штамма бруцелл также может

Проба с фагами методом дисков:

Фаголизабельность исследуемого штамма бруцелл также может быть

выявлена с помощью дисков, импрегнированных бактериофагами
Диски помещают в чашки Петри с плотной питательной средой, засеянной газоном исследуемой культуры
Слайд 47

Чувствительность различных видов Brucella к специфическим бактериофагам: Примечание: ТВ – фаг

Чувствительность различных видов Brucella к специфическим бактериофагам:

Примечание: ТВ – фаг

Тбилиси;
Wb – фаг Weybridge;
Fi – фаг Firenze;
Bk2 – фаг Berkley;
РДТ – рабочий диагностический титр;
«+» – полный лизис культуры
«±» – частичный лизис культуры
«-» – отсутствие лизиса
Слайд 48

Биохимическая идентификация бруцелл: Процесс дифференциации бруцелл может быть дополнен определением окислительно-метаболической

Биохимическая идентификация бруцелл:

Процесс дифференциации бруцелл может быть дополнен определением окислительно-метаболической активности

в отношении 12 субстратов (L-аланин, L-аспарагин, L-глутаминовая кислота, L-аргинин, L-цитрулин, DL-орнитин, L-лизин, D-рибоза, D-ксилоза, D-галактоза, D-глюкоза, эритритол), а также выявлением аденин-дезаминазной активности возбудителя бруцеллеза
Бруцеллы разлагают углеводы до образования кислоты и газа, кроме ферментации глюкозы и арабинозы
Слайд 49

Упрощенная схема видовой дифференциации культур рода Brucella:

Упрощенная схема видовой дифференциации культур рода Brucella:

Слайд 50

Биологический метод в лабораторной диагностике бруцеллеза: Биологический метод диагностики бруцеллеза применяется

Биологический метод в лабораторной диагностике бруцеллеза:

Биологический метод диагностики бруцеллеза применяется параллельно

с бактериологическим при исследовании материала, контаминированного посторонней микробиотой (органы трупа, выделения больного, пищевые продукты, вода, почва и т.д.) или материала с заведомо невысокой концентрацией бруцелл
Нередко чистую культуру возбудителя бруцеллеза возможно выделить только через биопробу
Слайд 51

Биологическая проба при исследовании на бруцеллез: Используют морских свинок (250-300 г)

Биологическая проба при исследовании на бруцеллез:

Используют морских свинок (250-300 г) или

белых мышей (17-20 г)
Исследуемый материал вводят подкожно в паховую область в дозах не более 0,5 мл для мышей или 1,0 мл – для морских свинок
При исследовании крови или другого материала, не содержащего посторонней микробиоты, заражение биопробных животных производят внутрибрюшинно
Исследуемый материал вводят одновременно 6 б/мышам и 2 м/свинкам
Из 6 белых мышей 3 б/м вскрывают на 21 сут после введения материала и
3 – через 30 дней после заражения
На 30 день после заражения органы 1 морской свинки подвергают бактериологическому исследованию
При отрицательном результате еще через 15 дней вскрывают 2-ую м/св
У биопробных животных бактериологически исследуют паховые, аксиллярные, подчелюстные, шейные, парааортальные лимфатические узлы, печень и селезенку
Слайд 52

Иммунологическая диагностика бруцеллеза:

Иммунологическая диагностика бруцеллеза:

Слайд 53

Реакции, направленные на поиск антигенов возбудителя бруцеллеза: Метод флуоресцирующих антител РНГА

Реакции, направленные на поиск антигенов возбудителя бруцеллеза:

Метод флуоресцирующих антител
РНГА с

иммуноглобулиновым эритроцитарным бруцеллезным диагностикумом
ТИФМ
Кольцепреципитация
ПЦР
Слайд 54

Метод флуоресцирующих антител (прямой вариант): Метод флуоресцирующих антител (МФА) в прямом

Метод флуоресцирующих антител (прямой вариант):

Метод флуоресцирующих антител (МФА) в прямом варианте

используется для выявления возбудителя в фильтратах и центрифугатах проб воды, почвы и молока, а также в тканях и органах больных человека и животных
Окраску мазков проводят коммерческим препаратом бруцеллезных флуоресцирующих иммуноглобулинов в рабочем титре

В качестве метки используют различные флуоресцирующие соединения. Наиболее распространенным является флуоресцинизотиоционат (ФИТЦ)

Слайд 55

Метод флуоресцирующих антител: МФА применяют для исследования клинического материала от больных

Метод флуоресцирующих антител:

МФА применяют для исследования клинического материала от

больных людей и животных, а также проб из объектов внешней среды, пищевых продуктов и т.д.
Использование МФА предусматривает проведение концентрирования бактерий в нативном материале путем центрифугирования пробы (3000 g, 20-30 мин) или ее фильтрации через мембранные фильтры (0,22 или 0,45 мкм) с последующим смывом осадка с поверхности фильтра
Из исследуемых проб или осадка делают мазки-отпечатки, которые после их фиксации подвергают окрашиванию
Просмотр препарата в люминесцентном микроскопе осуществляют не менее чем в 25 полях зрения
Специфическим считается свечение клеточной стенки на 3-4 креста, центральная часть клетки при этом остается неокрашенной (феномен Кумбса)
Слайд 56

Методика окрашивания мазков для исследования в прямом МФА: На поверхность фиксированного

Методика окрашивания мазков для исследования в прямом МФА:

На поверхность фиксированного и

высушенного мазка, помещенного во влажную камеру (чашку Петри с влажной фильтровальной бумагой или ватой), пипеткой наносят каплю иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих бруцеллезных моноклональных в рабочем разведении
Через 20 мин инкубации при комнатной температуре мазки ополаскивают дистиллированной водой
Стекла промывают 0,15М раствором натрия хлорида два раза по 5 мин
Затем мазки ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе
На готовые мазки наносят каплю раствора глицерина (9 объемных частей глицерина и 1 часть фосфатного буфера, рН 7,0), накрывают покровным стеклом и просматривают в люминесцентном микроскопе
Слайд 57

Разрешающая способность (чувствительность) МФА составляет 105-106 м.к./мл С целью повышения чувствительности

Разрешающая способность (чувствительность) МФА составляет 105-106 м.к./мл

С целью повышения чувствительности

МФА разработан способ индикации возбудителя бруцеллеза, предполагающий предварительную инъекцию исследуемого материала биопробным животным
При этом подкожно белым мышам в область спины вводят 0,5-0,1 мл суспензии исследуемого материала в 0,15 М растворе хлорида натрия, которую предварительно смешивают с гепаринизированной кровью в соотношении 1:0,5 – 1:0,7
К полученной смеси из расчета на одно животное можно добавить 0,5 мл куриного желтка, 5-7 мг кортизона и 90-120 мг сухого молока
Из содержимого, полученного с места введения, готовят мазки, которые окрашивают препаратом флуоресцирующих бруцеллезных иммуноглобулинов
Таким способом выявляют возбудителя бруцеллеза при его минимальной концентрации в исследуемом материале
Слайд 58

РНГА с эритроцитарным бруцеллезным иммуноглобулиновым диагностикумом:

РНГА с эритроцитарным бруцеллезным иммуноглобулиновым диагностикумом:

Слайд 59

Чувствительность РНГА 105-106 м.к./мл РНГА может быть использована при исследовании выделенных

Чувствительность РНГА 105-106 м.к./мл

РНГА может быть использована при исследовании выделенных

культур микроорганизмов, а также проб как из объектов окружающей среды, так и от больных и животных
Исследуемую пробу разливают в лунки полистироловой пластины в объеме 0,025 мл . Первая лунка является опытной, вторая – контрольной (РТНГА)
В опытную лунку вносят 0,025 мл нормальной кроличьей сыворотки, во вторую – 0,025 мл иммунной сыворотки в разведении 1:10, инактивированной при 56 0С 30 мин
Через 15-20 мин инкубации при комнатной t в обе лунки добавляют 0,025 мл 1% взвеси диагностикума, нагруженного специфическими иммуноглобулинами
Результат реакции учитывают через 2 час и 24 час
В опытной лунке эритроциты, выпавшие «зонтиком», учитываются как положительный результат
В РТНГА должен быть отрицательный результат («пуговка»)
Если обе лунки «положительны», реакцию следует переставить с разбавленной в 10 раз пробой (м.б. избыток антигена)
Слайд 60

Иммуноферментный метод Твердофазный иммуноферментный метод [ТИФМ (в настоящее время чаще используют

Иммуноферментный метод

Твердофазный иммуноферментный метод [ТИФМ (в настоящее время чаще используют

термин ИФА) или ELISA] отличается высокой чувствительностью (5•104 м.к./мл или 1 мкг/мл растворимого белкового антигена) и специфичностью
Результат анализа можно получить спустя 4-5 ч от начала исследования. С помощью этого метода при поиске антигенов выявляют специфические антигенные комплексы возбудителя бруцеллеза как в различных биопробах, так и в объектах внешней среды
Для выполнения ИФА используют «Тест-систему диагностическую иммуноферментную для определения бруцеллезного антигена иммуноферментным методом», выпускаемую предприятием по производству бактериальных препаратов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (Москва) и ФКУЗ СтавропольНИПЧИ
Слайд 61

Чувствительность ТИФМ 104 м.к./мл Сэндвич-вариант ИФА

Чувствительность ТИФМ 104 м.к./мл

Сэндвич-вариант ИФА

Слайд 62

Реакция преципитации (кольцевая проба) для исследования проб молока:

Реакция преципитации (кольцевая проба) для исследования проб молока:

Слайд 63

ПЦР – метод амплификации специфичной нуклеотидной последовательности Используется на этапах выявления

ПЦР – метод амплификации специфичной нуклеотидной последовательности

Используется на этапах выявления

АГ
Наибольшая чувствительность – 103-104 м.к./мл
Срок анализа - 4-8 час
Позволяет идентифицировать также
Нетипичные
формы бруцелл

Денатурация
Отжиг праймеров
Элонгация

Слайд 64

Реакции, направленные на поиск бруцеллезных антител в сыворотках: Реакция Хеддльсона Объемная

Реакции, направленные на поиск бруцеллезных антител в сыворотках:

Реакция Хеддльсона
Объемная реакция агглютинации

Райта
НМФА (непрямой вариант)
РНГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом
Реакция Кумбса
ОФР
ТИФМ (непрямой вариант)
Слайд 65

Метод ускоренной реакции агглютинации на стекле (Хеддльсона) для выявления антител: Стекло

Метод ускоренной реакции агглютинации на стекле (Хеддльсона) для выявления антител:

Стекло тщательно

моют и обезжиривают и расчерчивают на 6 квадратов по диагонали
Вносят в квадраты исследуемую сыворотку в дозах: 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл (к-ль сыворотки)
К первым 3-м лункам добавляют по 0,03 мл диагностикума бруцеллезного жидкого для РА;
В 4-ю лунку вносят 0,03 мл 0,9% раствора NaCl
В последней лунке смешивают диагностикум и 0,9% р-р NaCl (к-ль диагностикума)
Стекло подогревают до 36 0С над пламенем горелки
Слайд 66

Слайд 67

Объемная (пробирочная) реакция Райта: Диагностикум разводят 1:10 Готовят разведения сыворотки двукратным

Объемная (пробирочная) реакция Райта:

Диагностикум разводят 1:10
Готовят разведения сыворотки двукратным шагом от

1:25 до 1:400 в объеме 0,5 мл
Контроль сыворотки проводят с разведением 1:25
В каждую пробирку, кроме контрольной, вносят по 0,5 мл диагностикума в разведении 1:10
Контроль сыворотки проводят с о,5 мл 0,15 М раствора Na Cl
Контроль диагностикума - в 5 пробирках: смесь диагностикума, разведенного 1:10, с 0,15 М раствора NaCl (2,0+2,0;
1,0+0;
0,75 +0,25;
0,5 + 0,5;
0,25 +0,75 соответствено
Учет реакции осуществляют через 24 час инкубации при 37 0С
Слайд 68

Учет реакции Райта: ++++ - полное просветление жидкости с образованием осадка

Учет реакции Райта:

++++ - полное просветление жидкости с образованием осадка в

виде крупно- и мелкозернистых хлопьев
+++ - почти полное просветление жидкости , хорошо заметные хлопья
++ - незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями
+ - мутная жидкость с едва заметной зернистостью
- - равномерно мутная жидкость без агглютинации
Слайд 69

Антиглобулиновая проба (реакция Кумбса): Постановка реакции Кумбса основана на выявлении неполных

Антиглобулиновая проба (реакция Кумбса):
Постановка реакции Кумбса основана на выявлении неполных антител
Для

пробы Кумбса отбирают пробирки с исследуемой сывороткой, в которых в реакции Райта зафиксирован отрицательный или слабоположительный результат
Эти пробирки центрифугируют: 3000 об/мин - 40 мин
Супернатант удаляют, осадок отмывают трижды 0,85 % раствором NaCl, после чего к 0,5 мл отмытого антигена добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки, используемой специально для реакции Кумбса
Пробирки выдерживают в термостате при 37 0С в течение 18-24 ч
Учет реакции осуществляют аналогично реакции пробирочной агглютинации Райта
Метод Кумбса принципиально не отличается от метода иммунофлюоресценции, но последний является более простым
Слайд 70

Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР): Реакция высокочувствительна и может применяться в комплексе с

Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР):

Реакция высокочувствительна и может применяться в комплексе с другими

диагностическими реакциями
Ее преимущества: техническая простота выполнения и высокий процент (до 96%) положительных реакций при хронических формах
К недостаткам следует отнести ложноположительные реакции, особенно во время лихорадки, или (в 6-8% случаев) появление отрицательных проб у бруцеллезных больных
Относительно высокий фагоцитоз отмечается у лиц, которые не болели, но сталкивались с возбудителем заболевания

Реакция основана на способности полинуклеарных нейтрофилов фагоцитировать бруцеллы в присутствии специфических опсонинов, которые нарастают в крови человека или животного в процессе бруцеллезной инфекции или в связи с введением им бруцеллезной вакцины

Слайд 71

При добавлении культуры бруцелл к крови зараженного бруцеллезом человека микробы энергично

При добавлении культуры бруцелл к крови зараженного бруцеллезом человека микробы энергично

фагоцитируются нейтрофильными лейкоцитами вследствие наличия у них специфических опсонинов и тропинов
Реакция учитывается путем подсчета количества фагоцитированных бруцелл в 25 нейтрофильных лейкоцитах из нескольких мест мазка
Показатель 10—24 характеризует слабо положительную реакцию; 25—49 — ясно выраженную; 50—75 — резкую
У здоровых людей показатель в большинстве случаев составляет 0 или 1, достигая в редких случаях 4—5
Слайд 72

Метод флуоресцирующих антител (непрямой вариант): Для быстрой серологической дифференциации первых биоваров

Метод флуоресцирующих антител (непрямой вариант):

Для быстрой серологической дифференциации первых биоваров видов

B. abortus и B. melitensis, выявления диссоциированных (R-форм) бруцелл можно использовать метод флуоресцирующих антител в непрямом варианте, при котором постановку МФА осуществляют в 2 этапа: на первом мазок обрабатывают немеченой бруцеллезной сывороткой, на втором – антивидовыми флуоресцирующими иммуноглобулинами
Слайд 73

НМФА для выявления специфических сывороточных антител: На предварительно сделанные и фиксированные

НМФА для выявления специфических сывороточных антител:

На предварительно сделанные и фиксированные мазки,

сделанные из взвеси бруцелл 109 м.к./мл, наслаивают исследуемую сыворотку в различных разведениях, инкубируют 20 мин при комнатной t, после чего отмывают и наносят антивидовые антитела, меченные ФИТЦ
После инкубации 20 мин при комнатной t в темноте просматривают в люминесцентном микроскопе
Реакцию иммунофлюоресценции считают положительной при наличии специфического свечения бруцелл с сывороткой в ее титре 1:50
Слайд 74

Слайд 75

ИФА, направленный на выявление антител в сыворотках:

ИФА, направленный на выявление антител в сыворотках:

Слайд 76

Аллергодиагностика бруцеллеза (проба Бюрне) – кожная проба: Становится положительной к концу

Аллергодиагностика бруцеллеза (проба Бюрне) – кожная проба:

Становится положительной к концу 1-го

месяца от начала инфекции в 80-90 % случаев
Иногда – с первой декады от начала болезни
Иногда сохраняется много лет и даже пожизненно
У больных хроническим бруцеллезом кожная проба положительна в 90-95% случаев
Может отсутствовать при иммунодефицитных состояниях или
Может быть положительной после вакцинации
Слайд 77

Аллергическая кожная проба (Бюрне) Проба Бюрне вполне специфична и отличается весьма

Аллергическая кожная проба (Бюрне)

Проба Бюрне вполне специфична и отличается весьма высокой

чувствительностью
Определяет способность организма, зараженного бруцеллезом, специфически отвечать местной реакцией кожи на внутрикожное введение бруцеллина — фильтра 3-недельного роста бульонной культуры бруцелл любого типа.
Реакция становится положительной на 3—4-й неделе от начала болезни, но бывают случаи и более раннего появления
В дальнейшем она сохраняется с большим постоянством на протяжении очень длительного периода (иногда до нескольких лет), даже после полного клинического выздоровления

Техника внутрикожного введения бруцеллина при постановке пробы Бюрне

Слайд 78

При постановке реакции Бюрне бруцеллин в дозе 0,1 мл вводят строго

При постановке реакции Бюрне

бруцеллин в дозе 0,1 мл вводят строго

внутрикожно в среднюю треть ладонной поверхности предплечья
Через 6—12 часов на месте инъекции появляется отек и покраснение, которые достигают максимального развития через 24 и 48 часов
В редких случаях внутрикожная проба становится положительной к 72 часам — это так называемые поздние реакции
При оценке реакции принимают во внимание, главным образом, воспалительный болезненный отек; гиперемия кожи на месте инъекции без отека диагностического значения не имеет. Отсутствие болезненности и изменения цвета кожи, обычно сопровождающих отек, не исключает положительной оценки пробы
Интенсивность реакции учитывают:
1) отрицательная реакция (—) — полное отсутствие местных изменений;
2) сомнительная реакция (±) — наличие асимметрии кожной складки по сравнению с контрольной
3) слабо положительная ( + )—наличие слабо выраженного отека и красноты диаметром 2—3 см
4) положительная реакция ( + + )— отечность 4—5 см, иногда с аденитом
5) резко положительная (+ + + ) —при отеке 6—8 см; аденит
Слайд 79

Комплексный сероаллергологический метод – основа некультуральной диагностики бруцеллезной инфекции на протяжении

Комплексный сероаллергологический метод – основа некультуральной диагностики бруцеллезной инфекции

на протяжении первых

десяти дней заболевания реакция Райта и проба Бюрне равноценны и выпадают положительными приблизительно в 28% случаев
Во второй декаде заметно расхождение: реакция Райта дает до 90% положительных результатов, а проба Бюрне – только 63%
Бруцеллиновая проба даже в более поздние периоды инфекции в отдельных случаях может быть отрицательной при положительной реакции агглютинации, поэтому только комплексное их применение обеспечит высокий процент выявления инфекции
Слайд 80

Общая схема исследования на бруцеллез: ПЦР ПЦР НМФА МФА

Общая схема исследования на бруцеллез:

ПЦР

ПЦР

НМФА

МФА

- Предыдущая
Шаги продаж
Следующая -
Масура Ибука

Похожие презентации

Лейкозы
Иппотерапия. Психологическое влияние метода
Бауыр жетіспеушілігі
Хирургическое лечение глаукомы
Хирургические доступы к органам брюшной полости
Бронхиальная астма. Этиология, патогенез, клиника, диагностика, лечение, профилактика. (Лекция 4)
Внутреннее кровотечение – состояние, при котором кровь изливается в естественную полость организма
Патология органов речи, слуха и зрения
Гигиена детских и учебных учреждений
История развития электрокардиографии
Открытие специализированной проводящей системы сердца
Презентация Степень и ее свойства
Общая анестезия
Побочные эффекты заместительной терапии L-тироксином
Фармакология. Главные задачи и проблемы фармакологии
Тағам микрофлорасы
Организация оториноларингологической помощи населению
Бета-лактамные антибиотики
Остеосинтез тазовой конечности при переломе бедренной кости у собаки
Совместимость витаминов
Биологическая роль железа. Применение железа в медицине
Мониторинг газообмена: капнография
Концепция формирования аддиктивной личности по Nakken
Перинатальный гепатит В. Синдром Рейе. Изменения печени при осложненной беременности
Хромосомные болезни (эпидемиология, классификация, методы профилактики и предупреждения рождения детей с хромосомной патологией)
Шейная вагосимпатическая блокада. Блокада плечевого сплетения по Куленкампфу. Подмышечная блокада плечевого сплетения
Хронический гломерулонефрит
Дифференциальная рентгенодиагностика остеопороза
Вы можете прислать нам Вашу презентацию и мы опубликуем ее на сайте.
Обратная связь
Для правообладателей
Email: Нажмите что бы посмотреть