Медицинская биотехнология. (Лекция 4)

Содержание

Слайд 2

МЕДИЦИНСКАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ БТ, направленные на создание диагностических, профилактическихи лечебных препаратов, а также биоматериалов

МЕДИЦИНСКАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ

БТ, направленные на создание диагностических, профилактическихи лечебных препаратов,
а также
биоматериалов

Слайд 3

Обновление клеток в организме человека Тело человека (~70 кг) состоит из

Обновление клеток в организме человека

Тело человека (~70 кг) состоит из

~1 х 1014 клеток.
Клетки эпителия слизистой оболочки желудочно-
кишечного тракта замещаются ~ 4000 раз, клетки
эпидермиса ~1000 раз, клетки соединительной ткани ~
400 раз течение жизни человека (70 лет)
Костный мозг обновляется в течении двух недель. В
течении жизни (70 лет) костный мозг вырабатывает 3
тонны клеток крови.
В течение жизни человека его организм образует около
20-30 тонн клеток!

[Ткачук В.А., 2014]

Слайд 4

Остеопороз (300 миллионов в мире) Остеоартроз (60 миллионов) Сахарный диабет (120

Остеопороз (300 миллионов в мире)
Остеоартроз (60 миллионов)
Сахарный диабет

(120 миллионов)
Болезни Паркинсона и Альцгеймера
(50 миллионов)
ИБС и инсульт (20 миллионов смертей
ежегодно)
Каждые 18 минут в мире создается
новый материал или устройство
для нужд трансплантологии!
ПОВЫШЕНИЕ
ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ЖИЗНИ
Слайд 5

ГОДОВОЙ ОБЪЕМ ПРОТЕЗИРОВАНИЯ В США Молочная железа 400 000 Кардиостимуляторы 200

ГОДОВОЙ ОБЪЕМ
ПРОТЕЗИРОВАНИЯ В США

Молочная железа 400 000
Кардиостимуляторы 200

000
Клапаны сердца 40 000
Хрусталик 1 000 000
Суставы 1 000 000
Костная фиксация 1 000 000
Позвоночник 400 000
Слайд 6

Слайд 7

Слайд 8

ИСКУССТВЕННЫЙ ХРУСТАЛИК

ИСКУССТВЕННЫЙ ХРУСТАЛИК

Слайд 9

Искусственные водители ритма сердца устанавливаются до 50000 пациентам ежегодно и продлевают

Искусственные водители ритма сердца устанавливаются
до 50000 пациентам ежегодно и продлевают

жизнь
в среднем на 15-25 лет.

КАРДИОСТИМУЛЯТОРЫ

Слайд 10

Доктор De Bakey держит в руках новую модель сердца, разработанную в

Доктор De Bakey держит в руках новую модель сердца, разработанную в

NASA.
Пока это только ограниченные и не вполне удачные испытания.

ИСКУССТВЕННОЕ СЕРДЦЕ?

Слайд 11

Основные направления тканевой инженерии клапанов сердца Децеллюляризация и девитализация для получения

Основные направления тканевой инженерии клапанов сердца

Децеллюляризация и девитализация для получения коллагенового

матрикса.
Заселение девитализированных трансплантатов клетками реципиента до имплантации

[Акатов В.С., 2010]

Слайд 12

РАЗРУШИТЬ КЛЕТКИ ДОНОРА! [Акатов В.С., 2010]

РАЗРУШИТЬ КЛЕТКИ ДОНОРА!

[Акатов В.С., 2010]

Слайд 13

Установка для заселения девитализированной ткани культурой клеток [Акатов В.С., 2010]

Установка для заселения девитализированной ткани культурой клеток

[Акатов В.С., 2010]

Слайд 14

Ускорение миграции гладкомышечных клеток в стенку аорты человека in vitro ростовыми

Ускорение миграции гладкомышечных клеток в стенку аорты человека in vitro ростовыми

факторами.

Нативная

Посев без PDGF

Посев клеток, PDGF

После девитализации

[Акатов В.С., 2010]

Слайд 15

Настоящее и будущее тканевой инженерии трансплантатов клапанов сердца и сосудов. Настоящее:

Настоящее и будущее тканевой инженерии трансплантатов клапанов сердца и сосудов.

Настоящее:
Аллографты без

модификации
Антикальцинозная девитализация аллографтов.
Будущее:
Ускорения репопуляции путем модификации аттрактантами клеток.
Подавление иммуногенности аллографтов (да), ксенографтов - ?
Заселение клетками реципиента до имплантации. ?
Создание биологических искусственных клапанов и сосудов. ??

[Акатов В.С., 2010]

Слайд 16

ПРОБЛЕМА ФИКСАЦИИ К ЖИВЫМ ТКАНЯМ

ПРОБЛЕМА ФИКСАЦИИ
К ЖИВЫМ ТКАНЯМ

Слайд 17

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ В ТРАВМАТОЛОГИИ

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ
В ТРАВМАТОЛОГИИ

Слайд 18

Восстановление костно-хрящевого повреждения в коленном суставе крысы через 8 недель после

Восстановление костно-хрящевого повреждения в коленном суставе крысы через 8 недель после

трансплантации культуры мезенхимальных стволовых клеток. А. Макровид. Б. Интенсивное формирование хрящевого матрикса (фиолетовые массы). В. Признаки клеточной репарации. FISH-реакция [Chu С.R., 2006].

БУДУЩЕЕ – ПОВЫШЕНИЕ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ

Слайд 19

Гистологическая картина восстановления повреждений суставного хряща в коленном суставе с помощью

Гистологическая картина восстановления повреждений суставного хряща в коленном суставе с помощью

препарата мезенхимальных стволовых клеток «Хондроген» [«Osiris Therapeutic Inc.», 2005].

БУДУЩЕЕ – ПОВЫШЕНИЕ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ

Слайд 20

Клеточные технологии в мире: наука и клинические испытания Reproduction SC 7 %

Клеточные технологии в мире: наука и клинические испытания

Reproduction
SC 7 %

Слайд 21

Объем продаж в области «stem cell therapy» в мире

Объем продаж в области «stem cell therapy» в мире

Слайд 22

Определение термина «стволовая клетка» Критерии: Самообновление Пролиферативный Клоногенный потенциал Дифференцировка в

Определение термина «стволовая клетка»

Критерии:
Самообновление
Пролиферативный
Клоногенный потенциал
Дифференцировка в зрелые (соматические) клеточные типы
Часто временный мультилинейный

потенциал
Слайд 23

ТКАНИ, ИЗ КОТОРЫХ БЫЛИ ВЫДЕЛЕНЫ МСК Взрослого организма: - костный мозг

ТКАНИ, ИЗ КОТОРЫХ БЫЛИ ВЫДЕЛЕНЫ МСК

Взрослого организма:
- костный мозг (Friedenstein

A.J. 1968);
жировая ткань (Gronthos S, 2001);
кожа (Toma J.G., 2001);
пульпа зуба (S. Gronthos, 2000);   
синовиальная мембрана
(C. De Bari, 2001);
периферическая кровь
(Roufosse,2004)
- эндометрий (Gargett C. E. ,2009)
Плода:
печень и поджелудочная
железа (C. Campagnoli, 2001);
плацента (P.S. in't Anker,2004);
амниотическая жидкость
(P.S. in't Anker, 2003);
пуповинная кровь и пуповина
(C. Campagnoli, 2001)


прикрепляются к пластику;
фибробластоподобная морфология;
способны к самообновлению;
дифференцироваться в остеогенном,
хондрогенном и адипогенном направлениях;
CD73+/CD105+/CD90+ (СD45-|CD31-/CD14-)
другие маркеры (Stro-1, VCAM)

МУЛЬТИПОТЕНТНЫЕ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ СТРОМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ

[Ткачук В.А., 2014]

Слайд 24

Типы стволовых клеток Эмбриональные СК Стволовые (inner cell mass) Герминогенные (embryonic

Типы стволовых клеток

Эмбриональные СК
Стволовые (inner cell mass)
Герминогенные (embryonic gonad)
Фето-плацентарные СК
Хорион
Децидуальная ткань
Пуповинная

кровь
Вартонов гель
Амниотическая жидкость
Взрослые
Костный мозг (гематопоэтические и мезенхимальные)
Ткани: нервная, кожа, скелетные мышцы (сателлитные клетки), жировая, эндотелиальные прогениторные клетки
Слайд 25

Использование стволовых клеток в медицине и науке Эктодерма Мезодерма Энтодерма Эмбриональные

Использование стволовых клеток в медицине и науке

Эктодерма

Мезодерма

Энтодерма

Эмбриональные стволовые клетки

Культивирование in vitro

Индуцированные

плюрипотентные стволовые клетки

Клетки костного мозга

Нейральныйе клетки

Клетки островков Лангерганса

Кардиомиоциты

СК взрослого организма

Исследование старения, патологий

Слайд 26

Lin G, Stem Cell Dev. 2008;17(6):1053-64 МСК локализуются в стенках сосудов

Lin G, Stem Cell Dev. 2008;17(6):1053-64

МСК локализуются в стенках сосудов

Rubina

K, Kalinina N., et.al. Tissue Eng Part A. 2009;15:2039-50
Слайд 27

Регуляция ангиогенеза IL-6, -8; VEGFC; ангиопоэтин-подобные белки-2,4; ингибин А; мидкин; тромбоспондин-1,

Регуляция ангиогенеза
IL-6, -8; VEGFC; ангиопоэтин-подобные белки-2,4;
ингибин А; мидкин; тромбоспондин-1, -2;
MMP

-2, -9; TIMP-1, -2; PAI-1, -2; UPAR; периостин

Регуляция иммунных клеток
CCL2; CXCL-3, -5, -10; G-CSF; IL-6, -8; M-CSF; MIF; програнулин; галектин-1, - 3

Регуляция чувствительности к инсулину
IGFBP-3,-4, -5, -6,-7; фактор роста пигментного эпителия

Регуляция роста аксонов
нейротрофный фактор астроцитов;
Т-кадгерин;
нейропилин-1;
семафорин-7А;
дистрогликан

Внеклеточный матрикс CTGF; аргин; бигликан; декорин; коллагены; ламинины; лизил-оксидаза; люмикан; нидоген-1, -2; тестикан; фибрилин-1, -2, -3; фибронектин;
фибулин-1, -2, -5

Белки, секретируемые культивируемыми МСК

Протеомный анализ

Калинина Н. И., Говорун В.М., Ткачук В.А. (неопубликованные данные)

Слайд 28

Перепрограммирование соматических клеток Первые iPS-клетки 2006 - Шинья Яманака, университет Киото, Япония

Перепрограммирование соматических клеток

Первые iPS-клетки
2006 - Шинья Яманака, университет Киото, Япония

Слайд 29

Слайд 30

Динамика снижение ограниченного числа фолликулов Ключевые вехи в изменении числа ооцитов

Динамика снижение ограниченного числа фолликулов

Ключевые вехи в изменении числа ооцитов у

человека:
Плод: 7 млн
Роды: 1-2 млн
Пубертат: 400 тыс.

[Сухих Г.Т., 2013]

Слайд 31

Образование зародышевых клеток in vitro из плюрипотентных стволовых клеток Использование плюрипотентных

Образование зародышевых клеток in vitro из плюрипотентных стволовых клеток

Использование плюрипотентных СК:

ES, EG и iPS клетки.
Пол клеточных линий: XY and XX.
Использование трансгенетических переносчинов / экспрессии генов: MVH, Stra8, Prm1 and Stella.
Использование методов дифференцировки: образование эмбриональных тел и дифференцировка монослоя
Условия культивирования: FBS, BMP4, N2B27, Activin A, bFGF, Retinoic Acid, Transferrin, Monothyoglicerol and Ascorbic Acid.
Получение клеток in vitro: эпибласт, примордиальные герминогенные клетки (PGCs), сперматогониальные стволовые клетки (SSCs) и мужские гаплоидно-подобные клетки.
Эпигенетический статус импринтинговых генов: корректировка
Функциональные методы: трансплантация сперматогониальных стволовых клеток (SSCs) в стерильные яички или интрацитоплазматическая инъекция спермы (ICSI)

[Сухих Г.Т., 2013]

Слайд 32

Образование зародышевых клеток in vitro из плюрипотентных стволовых клеток МЫШЬ Giejsen

Образование зародышевых клеток in vitro из плюрипотентных стволовых клеток

МЫШЬ

Giejsen et al.

Nature 2004
Toyooka et al. PNAS 2003
Nayernia et al. Developmental Cell 2006
Eguizabal et al. Differentiation 2009
Hayashi et al. Cell 2011
Hayashi et al, Science 2012

ЧЕЛОВЕК

Bucay et al. Stem Cells 2008
Tilgner et al. Stem Cells 2008; 2009
Park et al. Stem Cells 2009
Kee et al. Nature 2010
Panula S et al. HMG 2011
Eguizabal et al. Stem Cells 2011
Medrano et al. Stem Cells 2011
Schatten et al, Cell Reports 2012

[Сухих Г.Т., 2013]

Слайд 33

Возможности использования СК в акушерстве Диагностическая биопсия хориона Клетки из амниотической

Возможности использования СК в акушерстве

Диагностическая
биопсия хориона

Клетки из
амниотической
жидкости

7-9 недель

19-20 недель

Фетальная хирургия;
подготовка к

родам при осложнениях

[Сухих Г.Т., 2013]

Слайд 34

Использование внезародышевых тканей Невынашивание Задержка роста плода Неудачи имплантации в ЭКО

Использование внезародышевых тканей

Невынашивание
Задержка роста плода
Неудачи имплантации в ЭКО
Создание иммунологической толерантности (иммуноцитотерапия)

Выделение

и наращивание клеток

[Сухих Г.Т., 2013]

Слайд 35

ОНКОФЕРТИЛЬНОСТЬ Криоконсервация яичниковой ткани, сперматозоидов и ооцитов. Биобанки

ОНКОФЕРТИЛЬНОСТЬ
Криоконсервация яичниковой ткани,
сперматозоидов и ооцитов. Биобанки

Слайд 36

Ультраструктура матриц, полученных из полигидрокси-бутирата, в форме волокон (А), микрочастиц (Б).

Ультраструктура матриц, полученных из полигидрокси-бутирата, в форме волокон (А), микрочастиц (Б).

Инуцированное матрицей образование хрящевой ткани на 14 сутки эксперимента [Шишацкая Е.И., 2009].

ТКАНЕВЫЕ МАТРИЦЫ
ДЛЯ ИМПЛАНТАЦИИ

Слайд 37

3D матрица из полимолочной кислоты способствует восстановлению структуры хряща. А. Поры

3D матрица из полимолочной кислоты способствует восстановлению структуры хряща. А. Поры

матрицы при сканирующей электронной микроскопии. х 10000. Б. Запселение пор живыми хондроцитами ( зеленая флуоресция при конфокальной микроскопии. х 200 [Chu С.R., 2006].

ТКАНЕВЫЕ МАТРИЦЫ
ДЛЯ ИМПЛАНТАЦИИ

Слайд 38

Формирование костно-хрящевого повреждений (А) и восполнение их гранулированной формой препарата «Коллапан»

Формирование костно-хрящевого повреждений (А) и восполнение их гранулированной формой препарата «Коллапан»

производство «Интермедапатит», Россия (Б) в коленном суставе у собак [Маланин Д.А., Новочадов В.В., 2010].

КОЛЛАПАН – ИССЛЕДОВАНИЕ
В ВОЛГОГРАДЕ

Слайд 39

Суставные поверхности мыщелков бедренной кости через 16 (А) и 24 (Б)

Суставные поверхности мыщелков бедренной кости через 16 (А) и 24 (Б)

недели после восполнение костно-хрящевых дефектов гранулированной формой препарата «Коллапан» в эксперименте.

КОЛЛАПАН – ИССЛЕДОВАНИЕ
В ВОЛГОГРАДЕ

Слайд 40

Формирование зрелого регенерата смешанного типа через 24 недели после восполнения костно-хрящевых

Формирование зрелого регенерата смешанного типа через 24 недели после восполнения костно-хрящевых

дефектов мыщелков бедренной кости препаратом «Коллапан» (А). Формирование в эти же сроки соединительнотканного регенерата в области контрольных дефектов (Б).

КОЛЛАПАН – ИССЛЕДОВАНИЕ
В ВОЛГОГРАДЕ

Слайд 41

Пластика костно-хрящевого дефекта бедренной кости матрицей «TruFit» в эксперименте. Заживление через

Пластика костно-хрящевого дефекта бедренной кости матрицей «TruFit» в эксперименте. Заживление через

12 месяцев на макро-
и микропрепарате
[«OsteoBiologics Inc.», 2003].

БИОГИБРИДНЫЕ КОМПОЗИТЫ

Слайд 42

Нанотехнологии в тканевой инженерии суставов А. Элекроспининг. Б. Фазовая сепарация. В. Лиофилизация. Г. Самосборка.

Нанотехнологии в тканевой инженерии суставов

А. Элекроспининг. Б. Фазовая сепарация. В. Лиофилизация.

Г. Самосборка.
Слайд 43

Схема трансплантации аутогенного суставного хряща на синтетической матрице (CAIS) [Bruder S.P., 2012].

Схема трансплантации аутогенного суставного хряща на синтетической матрице (CAIS) [Bruder S.P.,

2012].
Слайд 44

В лаборатории кафедры последовательно произведены выделение хитина, очистка и преобразование его

В лаборатории кафедры последовательно произведены выделение хитина, очистка и преобразование его

в хитозан, модификация и оценка физико-химических свойств полученной пористой трехмерной бесклеточной матрицы.

МАТРИЦЫ
НА ОСНОВЕ ХИТОЗАНА

Слайд 45

Доказана биосовместимость полученной матрицы и ее хондроиндуктивные свойства (февраль 2012). Получены

Доказана биосовместимость полученной матрицы и ее хондроиндуктивные свойства (февраль 2012).
Получены

Патенты РФ «Способ получения хитозана»
(2013) и «Способ получения тканевой бесклеточной
матрицы на основе хитозана» (2014).

МАТРИЦЫ
НА ОСНОВЕ ХИТОЗАНА

Слайд 46

РУКОВОДСТВО ВРАЧАМ Книга издана на средства фирмы Sante Med. Systems, авторы

РУКОВОДСТВО ВРАЧАМ

Книга издана на средства фирмы Sante Med. Systems, авторы в 2011

году удостоены первой премии Волгоградской области в сфере науки и техники
Слайд 47

ООО «Русвиск» (Москва) Договор о разработке новых протезов синовиальной жидкости для хирургии суставов

ООО «Русвиск» (Москва)

Договор о разработке новых протезов синовиальной жидкости для хирургии

суставов
Слайд 48

Общий принцип стимуляции факторами роста при восстановлении повреждений хряща в коленном суставе. СТИМУЛЯЦИЯ ФАКТОРАМИ РОСТА

Общий принцип стимуляции факторами роста при восстановлении повреждений хряща в коленном

суставе.

СТИМУЛЯЦИЯ ФАКТОРАМИ РОСТА

Слайд 49

Общий принцип тканевой инженерии in vitro на примере культивирования хондроцитов. ТКАНЕВАЯ ИНЖЕНЕРИЯ

Общий принцип тканевой инженерии in vitro на примере культивирования хондроцитов.

ТКАНЕВАЯ ИНЖЕНЕРИЯ

Слайд 50

Регенеративная медицина клеточная и генная терапия; тканевая инженерия; стимуляция эндогенных регенеративных

Регенеративная медицина
клеточная и генная терапия;
тканевая инженерия;
стимуляция эндогенных

регенеративных процессов
регуляция гибели и обновления клеток в организме человека
Слайд 51

Межрегиональная общественная организация «Национальное общество регенеративной медицины»

Межрегиональная общественная организация «Национальное общество регенеративной медицины»