HLA-типирование. Связь HLA c болезнями

MHC – комплекс тесно сцепленных генетических локусов и кодируемых ими молекул,

Гены HLA - 6р21

Полиморфизм

Кодоминантное наследование

Презентация АГ Т-лимфоцитам
Селекция и обучение ЛФ в отношении «своего» и «чужого»
Взаимодействие

HLA-типирование

При типировании определяют:
Гаплотип (набор генов HLA на одной из гомологичных хромосом)

Это метод определения тканевой совместимости донора и реципиента, основанный на феномене

Выраженность агглютинации:
интенсивная, т.е. крупные агломераты, значительная площадь свободной жидкости ++++
выраженная -

Метод заключается в следующем:
К сывороткам против разных антигенов HLA добавляют по

Применяют в основном для определения HLA II класса
В качестве «-» контроля

В настоящее время молекулярно- генетические методы используются только для типирования генов

Метод основан на способности бактериальных эндонуклеаз расщеплять ДНК в сайтах рестрикции

Постановка:
Фрагменты ДНК, полученные после ее обработки эндонуклеазами, разделяют с помощью электрофореза

Недостатки метода:
большие затраты времени (обычно 2-3 нед);
невозможность различить аллели, сайты рестрикции

Аллели генов HLA иногда отличаются друг от друга лишь по одной

метод избирательной амплификации, предназначенный для получения большого количества копий фрагментов ДНК

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:
ДНК-матрица, содержащая тот

Денатурация ДНК - получение двух однонитевых фрагментов (90-95 °C, 5-90сек) (перед

Денатурация при 94—96 °C
Отжиг при 68 °C (например)
Элонгация при

Количественная ПЦР или ПЦР в реальном времени (Q-PCR, RT-PCR)
«Вложенная» ПЦР (Nested

Регистрируется количественное накопление продукта в реальном времени, т.е. после каждого цикла
Т.о.

Исп-т 2 пары праймеров для уменьшения кол-ва побочных продуктов
Вторая пара амплифицирует

Дает возм-ть амплифицировать уч-ки ДНК, фланкирующие область с известной последовательностью
Праймеры ориентированы

Метод заключается в последовательном сочетании обратной транскрипции (синтез одноцепочечной ДНК на

Одновременно используют более одной пары олигонуклеотидных праймеров, что приводит к коамплификации

Исп-т если в молекуле НК известна последовательность лишь для одного из

Модификация ПЦР для амплификации протяженных участков ДНК (10 тысяч и более

Вариант ПЦР, при котором концентрация одного из двух праймеров очень низка,

С помощью этого подхода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров
Первые циклы проводят

Метод молекулярных колоний (ПЦР в геле, англ. Colony - PCR Colony)

SSO (sequence specific oligonucleotide) — неспецифическая амплификация исследуемого участка (локуса) ДНК

Гель-электрофорез
Дот-блот-гибридизация
Блот-гибридизация по Саузерну
Секвенирование
Олигонуклеотидные зонды
Чаще всего используется самый простой метод – гель-электрофорез

Причины ложноположительных результатов:
Контаминация от пробы к пробе
Контаминация продуктами амплификации
Для исключения ложноположительных

История исследования связи антигенов системы HLA с некоторыми заболеваниями включает два

Рецепторная - молекулы HLA могут служить специфическими рецепторами для этиологических агентов
Молекулярная

Генетическая гипотеза - возможность плейотропного (множественного) эффекта генов иммунорезистентности – сцепленные

еще далеко не исчерпан круг заболеваний, для которых можно предполагать существование

Пересадка между сиблингами, т.е. между индивидуумами, связанных братско-сестринским родством. Вероятность наличия