Оптическая микроскопия. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия

Содержание

Слайд 2

Принцип лазерной сканирующей конфокальной микроскопии Принцип лазерной сканирующей конфокальной микроскопии

Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии

Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии

Слайд 3

Принцип лазерной сканирующей конфокальной микроскопии Принцип лазерной сканирующей конфокальной микроскопии Ito

Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии

Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии

Ito & Aoki

// Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131

Феофанов // Успехи биолог. хим. 2007, 47, 371

Конфокальная диафрагма для пространственной селекции сигнала флуоресцентного отклика, сканирование, информация о трехмерной структуре

Слайд 4

Фазовое разделение в смесях ПС / ПММА: результаты ЛCКМ Фазовое разделение

Фазовое разделение в смесях ПС / ПММА:
результаты ЛCКМ

Фазовое разделение в смесях

ПС / ПММА:
результаты ЛCКМ

Kumacheva et al. // Langmuir 1997 , 13 (9), 2483-2489

Слайд 5

ЛСКФМ: динамика фазового разделения в смесях полимеров ЛСКФМ: динамика фазового разделения

ЛСКФМ: динамика фазового разделения
в смесях полимеров

ЛСКФМ: динамика фазового разделения
в смесях полимеров

Ito

& Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131-169
Слайд 6

Агрегация молекул β-глюкана в растворе: наблюдения ЛCКМ Агрегация молекул β-глюкана в

Агрегация молекул β-глюкана в растворе:
наблюдения ЛCКМ

Агрегация молекул β-глюкана в растворе:


наблюдения ЛCКМ

Wu et al. // J. Agric. Food Chem. 2006, 54(3), 925-934

Возрастание концентрации в ряду: (A) 5, (B) 10, (C) 15, (D) 40, (E) 60, (F) 80, и (G) 100 мг/мл. Размер кадра 300 мкм × 300 мкм

Слайд 7

Гепатоциты печени (3D) Гепатоциты печени (3D) Разрешение: dx,y ≈ 0.4 λ

Гепатоциты печени (3D)

Гепатоциты печени (3D)

Разрешение: dx,y ≈ 0.4 λ / NA,

dz ≈ 1.4 λn / NA2

10 мкм

Слайд 8

Оптическая микроскопия Оптическая микроскопия Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия многофотонная схема

Оптическая микроскопия

Оптическая микроскопия

Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия
многофотонная схема

Слайд 9

Преимущества многофотонной схемы ЛСКМ Преимущества многофотонной схемы ЛСКМ Denk & Svoboda

Преимущества многофотонной схемы ЛСКМ

Преимущества многофотонной схемы ЛСКМ

Denk & Svoboda // Neuron

1997, 18, 351-357

Сочетание высокого разрешения и высокой интенсивности сигнала (нет необходимости в диафрагме), предотвращение обесцвечивания красителя (возбуждение на иной длине волны), меньше рассеяние (больше контраст)

Слайд 10

Изображение многофотонной ЛСКФМ Изображение многофотонной ЛСКФМ Denk & Svoboda // Neuron

Изображение многофотонной ЛСКФМ

Изображение многофотонной ЛСКФМ

Denk & Svoboda // Neuron 1997, 18,

351-357

Изображение нейрона in vivo, высокое разрешение

Слайд 11

Оптическая микроскопия Оптическая микроскопия 4π-микроскопия

Оптическая микроскопия

Оптическая микроскопия

4π-микроскопия

Слайд 12

Принципы 4π-микроскопии Принципы 4π-микроскопии Bewersdorf et al. // G.I.T. Imaging & Microscopy 2004, (4), 24-25

Принципы 4π-микроскопии

Принципы 4π-микроскопии

Bewersdorf et al. // G.I.T. Imaging & Microscopy 2004,

(4), 24-25
Слайд 13

Разрешение 4π-микроскопии Разрешение 4π-микроскопии Egner & Hell // TRENDS Cell Biol 2005, 15(4), 207-215

Разрешение 4π-микроскопии

Разрешение 4π-микроскопии

Egner & Hell // TRENDS Cell Biol 2005, 15(4),

207-215
Слайд 14

Оптическая микроскопия Оптическая микроскопия STED микроскопия STED: stimulated emission depletion (Истощение индуцированного излучения)

Оптическая микроскопия

Оптическая микроскопия

STED микроскопия
STED: stimulated emission depletion
(Истощение индуцированного излучения)

Слайд 15

Принципы STED-микроскопии Принципы STED-микроскопии Ito & Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131-169

Принципы STED-микроскопии

Принципы STED-микроскопии

Ito & Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182,

131-169
Слайд 16

Принципы STED-микроскопии Принципы STED-микроскопии Hell // Nature Biotechnol. 2003, 21(11), 1347-1355

Принципы STED-микроскопии

Принципы STED-микроскопии

Hell // Nature Biotechnol. 2003, 21(11), 1347-1355

Слайд 17

STED-микроскопия преодолела оптический предел разрешения STED-микроскопия преодолела оптический предел разрешения Ito

STED-микроскопия преодолела
оптический предел разрешения

STED-микроскопия преодолела
оптический предел разрешения

Ito & Aoki

// Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131-169

Молекулы флуоресцентного красителя

Слайд 18

Разрешение STED-микроскопии Разрешение STED-микроскопии Garini, et al. // Curr. Opin. Biotechnol. 2005, 16, 3-12

Разрешение STED-микроскопии

Разрешение STED-микроскопии

Garini, et al. // Curr. Opin. Biotechnol. 2005, 16,

3-12
Слайд 19

Электронная микроскопия Электронная микроскопия Сканирующая электронная микроскопия сер. 40х XX в,

Электронная микроскопия

Электронная микроскопия

Сканирующая электронная микроскопия
сер. 40х XX в, В.К. Зворыкин
1931

Р. Руденберг получил патент на просвечивающий электронный микроскоп
1932 году М. Кнолль и Э. Руска построили первый прототип современного прибора (1986 год - Нобелевская премия по физике)
разработки кон. 40х–50е гг. XX в, Ч. Отли, университет Кембриджа
1965 г., первый коммерческий СЭМ, Stereoscan Mark 1, Cambridge Instruments
Слайд 20

Принцип СЭМ Принцип СЭМ

Принцип СЭМ

Принцип СЭМ

Слайд 21

Отклик на первичный пучок Отклик на первичный пучок

Отклик на первичный пучок

Отклик на первичный пучок

Слайд 22

Взаимодействие первичных электронов с образцом Взаимодействие первичных электронов с образцом моделирование Монте-Карло →

Взаимодействие первичных
электронов с образцом

Взаимодействие первичных
электронов с образцом

моделирование
Монте-Карло →

Слайд 23

Схема СЭМ Схема СЭМ PE – первичные электроны, OL – линзы

Схема СЭМ

Схема СЭМ

PE – первичные электроны,
OL – линзы объектива,
SE – вторичные

электроны,
BED – детектор обратно-рассеянных электронов,
EDX/WDX – рентгеновские детекторы
Слайд 24

Детектор Эверхарта-Торнли Детектор Эверхарта-Торнли

Детектор Эверхарта-Торнли

Детектор Эверхарта-Торнли