Применение лазерных технологий (лазерный пинцет) для исследования динамики наномашин

λ=1064 нм

— научный прибор, который позволяет манипулировать микроскопическими объектами с помощью лазерного света. Он позволяет прикладывать к диэлектрическим объектам силы от фемтоньютонов до наноньютонов и измерять расстояния от нескольких нанометров до микронов.
В последние годы оптические пинцеты начали использовать в биофизике для изучения структуры и принципа работы белков.

полемОбъекты, представляемые в виде маленьких диэлектрических сфер взаимодействуют с электрическим полем, созданным световойОбъекты, представляемые в виде маленьких диэлектрических сфер взаимодействуют с электрическим полем, созданным световой волной, за счёт индуцированного на сфере дипольного моментаОбъекты, представляемые в виде маленьких диэлектрических сфер взаимодействуют с электрическим полем, созданным световой волной, за счёт индуцированного на сфере дипольного момента. В результате взаимодействия этого диполя с электрическим полем электромагнитной волны, объект перемещается вдоль градиента электрического поля. Кроме градиентной силы, на объект также действует сила, вызванная давлением (отражением) света от его поверхности. Эта сила толкает сферу по направлению пучка света. Однако, если луч света сильно сфокусирован, величина градиента интенсивности может быть больше величины давления света.

пучка, как на рисунке (a), наибольшее изменение импульса лучей с большей интенсивностью вызывает появление силы, направленной к центру ловушки. Когда шар расположен в центре пучка, как показано на рисунке (b), сила указывает в сторону сужения.
При анализе с использованием волновой оптики, рассмотрение процессов преломления и отражения света от микросферы достаточно, чтобы проанализировать втягивание в оптическую ловушку (см. рисунок справа).
Самый простой расчёт действующих сил в пределах подхода волновой оптики основывается на геометрической оптике. Рассмотрение луча указывает на изменение импульсаСамый простой расчёт действующих сил в пределах подхода волновой оптики основывается на геометрической оптике. Рассмотрение луча указывает на изменение импульса света при отражении и преломлении. Таким образом, это изменение импульса (фотонаСамый простой расчёт действующих сил в пределах подхода волновой оптики основывается на геометрической оптике. Рассмотрение луча указывает на изменение импульса света при отражении и преломлении. Таким образом, это изменение импульса (фотона как частицы), согласно второму закону Ньютона, будет приводить к возникновению силы.
Используя простую диаграмму лучей и вектора силы, можно показать, что на микросферу действуют две разных оптических силы благодаря инерцииИспользуя простую диаграмму лучей и вектора силы, можно показать, что на микросферу действуют две разных оптических силы благодаря инерции падающего и преломлённого света. Как это видно из диаграммы, результирующая сила толкает сферу в направлении области наивысшей интенсивности луча. Такая сила называется градиентной силой.

изменение импульса лучей с большей интенсивностью вызывает появление силы, направленной к центру ловушки. Когда шар расположен в центре пучка, как показано на рисунке (b), сила указывает в сторону сужения.

2,68 микрона) в воде получается из закона Стокса
F = 6πrηv
и составляет 730 фН.
В воздухе максимальная скорость для капель воды диаметром 5 микрон при мощности лазера 50 мВт составила 0,25 см/c

Это можно сделать за счёт двух встречных пучков света, которые толкают сферу в противоположных направлениях, или с помощью сильно сфокусированного гауссового пучкаЧтобы исследуемый объект был неподвижен, необходимо скомпенсировать силу вызванную давлением света. Это можно сделать за счёт двух встречных пучков света, которые толкают сферу в противоположных направлениях, или с помощью сильно сфокусированного гауссового пучка (с высокой числовой апертурой, NA>1,0), чтобы компенсировать давление света высокой градиентной силой.

меньше, чем длина волны света, условия удовлетворяют условию рассеивания Рэлея, и частицу можно рассмотреть как точечный дипольВ случаях, когда диаметр пойманной в ловушку частицы значительно меньше, чем длина волны света, условия удовлетворяют условию рассеивания Рэлея, и частицу можно рассмотреть как точечный диполь в неоднородном электромагнитном полеВ случаях, когда диаметр пойманной в ловушку частицы значительно меньше, чем длина волны света, условия удовлетворяют условию рассеивания Рэлея, и частицу можно рассмотреть как точечный диполь в неоднородном электромагнитном поле. Сила, действующая на заряжённую частицу в электромагнитной области, известна как сила Лоренца

виде
Квадрат величины электрического поля равен интенсивности луча как функция координат. Поэтому, результат указывает, что сила действующая на диэлектрическую частицу, при приближении точечного диполя, является пропорциональной градиенту интенсивности пучка. Другими словами, описанная здесь сила приводит к притяжению частицы в область с самой высокой интенсивностью. В действительности, сила, возникающая при рассеянии света зависит линейно от интенсивности луча, поперечного сечения частицы и показателя преломления среды, в которой находится ловушка (например, вода), работает против градиентной силы в осевом направлении ловушки, приводя к тому, что равновесное положение смещается немного вниз от положения максимума интенсивности.

наиболее распространённых систем сортировки клеток использует метод флуоресцентной проточной цитометрииОдна из наиболее распространённых систем сортировки клеток использует метод флуоресцентной проточной цитометрии. В этом методе суспензияОдна из наиболее распространённых систем сортировки клеток использует метод флуоресцентной проточной цитометрии. В этом методе суспензия биологических клеток сортируется в несколько контейнеров согласно флюоресцентным характеристиках каждой клетки в потоке. Процесс сортировки контролируется электростатической системой отклонения, которая направляет клетку к определённому контейнеру изменением напряжения приложенного электрического поля.
В оптически управляемой системе сортировки, клетки пропускают через двух- или трёхмерные оптические решётки. Без индуцируемого электрического напряжения, клетки сортируются по их свойствах преломления света. Разработана методика использования дифракционной оптики и других оптических элементов для создания таких оптических решёток.
Главный механизм сортировки — расположение узлов оптической решётки. Когда поток клеток проходит через оптические решётки, силы трения частиц непосредственно конкурируют с оптической градиентной силой от соседнего узла оптической решётки. Изменяя расположение узлов, возможно создать оптическую дорожку, по который будут двигаться клетки. Но такая дорожка будет эффективной только для клеток с определённым коэффициентом преломления, которые и будут эффективно отклоняться. Регулируя скорость потока клеток и мощность света возможно получить хорошую оптическую сортировку клеток.

одновременно
работающих ловушек 1 - 100
Размер перемещаемых частиц 20 – 10000 нм
Диапазон перемещений 100 мкм

Характеристики «лазерного пинцета»

Force production by disassembling microtubules.
Nature, 2005, v. 438(7066), p. 384-8

Наномашины, участвующие в делении клетки

to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, 3, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, 3, 4, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, 3, 4, 5, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, 3, 4, 5, 6, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, Microtubules (MTs) are important components of the eukaryotic cytoskeleton: they contribute to cell shape and movement, as well as to the motions of organelles including mitotic chromosomes. MTs bind motor enzymes that drive many such movements, but MT dynamics can also contribute to organelle motility1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8.
Each MT polymer is a store of chemical energy that can be used to do mechanical work, but how this energy is converted to motility remains unknown. Here we show, by conjugating glass microbeads to tubulin polymers through strong inert linkages, such as biotin–avidin, that depolymerizing MTs exert a brief tug on the beads, as measured with laser tweezers.
Analysis of these interactions with a molecular-mechanical model of MT structure and force production9, Analysis of these interactions with a molecular-mechanical model of MT structure and force production9, 10 shows that a single depolymerizing MT can generate about ten times the force that is developed by a motor enzyme; thus, this mechanism might be the primary driving force for chromosome motion. Because even the simple coupler used here slows MT disassembly, physiological couplers may modulate MT dynamics in vivo.

в лазерном луче

фотодетектор из 4-х квадрантов

компьютерный сбор данных и обработка

3.4 А, которые измеряют лазерным пинцетом. Один шаг соответствует длине одной пары нуклеиновых оснований

Схема эксперимента по измерению движения одной молекулы РНК полимеразы вдоль ДНК.

Пример. Работа по измерению шагов, делаемых РНК полимеразой. 1 измеренный шаг – 0.34 нм

(Abbondanzieri et al., .2004. Nature. 438(7067):460-465)