Лабораторная диагностика бруцеллёза

Содержание

Слайд 2

Бруцеллёз — зоонозная инфекция

Бруцеллёз — зоонозная инфекция

Слайд 3

Род Brucella - 10 видов B. melitensis (3 биовара; преимущественно поражает

Род Brucella - 10 видов
B. melitensis (3 биовара; преимущественно поражает

коз и овец, возможна миграция на крупный рогатый скот и свиней),
B. abortus (7 биоваров; вызывает аборты и орхиты у крупного рогатого скота),
B. suis (5 биоваров; поражает свиней, зайцев, северных оленей, грызунов),
B. neotomae (выделяется от пустынной кустарниковой крысы),
B. ovis (вызывает эпидидимиты и орхиты у баранов),
B. canis (поражает собак).
Вновь зарегистрированные бруцеллы:
B. ceti выделяются от китообразных,
B. pinnipedialis - от ластоногих
B. microti - от серой полевки,
B. inopinata - источник не установлен.
Заболевания людей преимущественно вызывают
B. melitensis, B. abortus и B. suis биовары 1 - 4, реже - B. canis
Слайд 4

Бруцеллы в мазке из чистой культуры Бруцеллы в мазке-отпечатке из тканей Окраска по методу Грама

Бруцеллы в мазке из чистой культуры Бруцеллы в мазке-отпечатке из тканей
Окраска

по методу Грама
Слайд 5

Колонии бруцелл на КА

Колонии бруцелл на КА

Слайд 6

Бруцеллы обитают в организме млекопитащих преимущественно внутри макрофагов и плацентарных трофобластов.

Бруцеллы обитают в организме млекопитащих преимущественно внутри макрофагов и плацентарных трофобластов.


Слайд 7

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА

Слайд 8

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА ГЛАЗА Кератит Язва роговицы Увеит Эндофтальмит ОРГАНЫ ДЫХАНИЯ

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА

ГЛАЗА
Кератит
Язва роговицы
Увеит
Эндофтальмит

ОРГАНЫ ДЫХАНИЯ
Бронхит
Бронхопневмония
Лимфоаденопатия корня легкого
Абсцесс легкого
Плеврит

ЖКТ
Гепатит
Илеит
Панкреатит
Холецистит
Перитонит

КОЖНЫЕ ПОКРОВЫ
Узелковая эритема
Васкулит

ЦНС
Менингит
Энцефалит
Психоз
Полирадикулит
Периферическая нейропатия

ССС
Эндокардит
Миокардит
Перикардит

МПС
Орхит
Гломерулонефрит
Интерстициальный

нефрит
Пиелонефрит
Аборт

ОДС
Артрит (сакроилеит)
Остеомиелит

Слайд 9

Лабораторная диагностика бруцеллёза Клинический материал: кровь, костный мозг, спинномозговая жидкость, пунктат

Лабораторная диагностика
бруцеллёза
Клинический материал:
кровь,
костный мозг,
спинномозговая жидкость,
пунктат

из лимфоузлов,
моча,
желчь,
суставная жидкость (при артритах),
гной (при абсцессах).
Материал из объектов внешней среды, продукты.
Слайд 10

пересев клинического материала с транспортной среды на плотные и жидкие среды;

пересев клинического материала с транспортной среды на плотные и жидкие среды;

инкубация при 37 °С до 20 - 30 сут.;

3 - 21 сут. от начала исследования:
- учет результатов роста, бактериоскопия;
постановка реакции агглютинации (МФА) отобранных изолированных колоний с сывороткой бруцеллезной диагностической поливалентной для РА;
отсев для получения чистой культуры;

5 - 30 дней от начала исследования:
постановка с культурами возбудителя бруцеллеза, находящимися в стабильной S-форме, тестов межвидовой дифференциации:
- отношение к избыточному содержанию углекислоты в воздухе;
- образование сероводорода;
- редукция красителей (тионин, основной фуксин);
- агглютинация моноспецифическими бруцеллезными сыворотками (anti-abortus, anti-melitensis);
- чувствительность к бруцеллезному бактериофагу Тб;
- чувствительность к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом;

10 - 40 сут. от начала исследования:
учет результатов.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Слайд 11

- заражение биопробных животных (морские свинки, белые мыши) подкожно в паховую

- заражение биопробных животных (морские свинки, белые мыши) подкожно в паховую

область или внутрибрюшинно - при исследовании крови, спинномозговой жидкости, костного мозга.

- вскрытие биопробных животных,

посев на питательные среды патологического материала: лимфатические узлы (регионарные в месте введения исследуемого материала, паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки органов (селезенка, печень, костный мозг), кровь;
- приготовление мазков-отпечатков из органов биопробных животных, постановка МФА;
- постановка ПЦР (суспензия из гомогената органов, лимфатических узлов, костный мозг, сыворотка крови);
- постановка реакций агглютинации

40 сут. от начала исследования:
учет результатов.

20-35 сут. от начала исследования:

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Слайд 12

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (реакции агглютинации Хеддельсона и Райта, реакция Кумбса, РНГА, ИФА

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ
МЕТОД
(реакции агглютинации Хеддельсона и Райта, реакция Кумбса,
РНГА, ИФА )

Отстаивание 1-2

часа 20 ̊С

Забор крови

Слайд 13

Протокол. Лабораторная диагностика бруцеллеза

Протокол. Лабораторная диагностика бруцеллеза

Слайд 14

Схема реакции Хеддельсона


Схема реакции Хеддельсона

Слайд 15

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ РАЙТА

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ РАЙТА

Слайд 16

1мл вылить 37˚ С - 2 часа

1мл вылить

37˚ С - 2 часа

Слайд 17

Диагностический титр - 1:200 1:100 1:400 1:200 1:800

Диагностический титр - 1:200

1:100

1:400

1:200

1:800

Слайд 18

Brucellinum Бруцеллин — фильтрат 30-дневной бульонной культуры трех типов бруцелл Показания

Brucellinum
Бруцеллин — фильтрат 30-дневной бульонной культуры трех типов бруцелл
Показания к применению
Бруцеллин применяется

для диагностики бруцеллеза у людей и выявления иммунологической перестройки организма после вакцинации.
Правила применения
Бруцеллин вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл в ладонную поверхность предплечья.

Оценка результата 24-48 часов
Размер гиперемированного и отечного участка: - до 1 см – peaкция сомнительная; - 1-3 см – реакция слабо положительная; - 3-6 см – реакция положительная; - более 6 см – реакция резко положительная.

Аллергический метод
Проба Бюрне с бруцеллином

Слайд 19

с пробами из нативного материала с материалом из подозрительных колоний; с

с пробами из нативного материала
с материалом из подозрительных колоний;
с материалом от

биопробных животных
с пробами из объектов внешней среды, продуктов

Молекулярно-генетические методы исследования
ПЦР

Слайд 20

Специфическая профилактика

Специфическая профилактика

Слайд 21

Вакцина для профилактики бруцеллеза Культура живых микробов вакцинного штамма Вrucella abortus

Вакцина для профилактики бруцеллеза
Культура живых микробов вакцинного штамма Вrucella abortus 19

ВА.

Через 20-30 дней после вакцинации развитие иммунитета до 10-12 мес, максимальная напряженность сохраняется 5-6 мес. Вакцинацию следует проводить не позднее, чем за 3-4 нед до начала работы, связанной с риском заражения.

Слайд 22

Вакцина бруцеллезная инактивированная лечебная Лекарственная форма: лиофилизат для приготовления раствора для

Вакцина бруцеллезная инактивированная лечебная

Лекарственная форма:
лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения

и накожного нанесения, суспензия для инъекций
Слайд 23

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Лабораторная диагностика
сибирской язвы

Слайд 24

Сибирская язва — особо опасная инфекция (ООИ)

Сибирская язва — особо опасная инфекция (ООИ)

Слайд 25

Классификация Семейство Bacillaceae Род Bacillus Вид B. anthracis

Классификация

Семейство Bacillaceae
Род Bacillus
Вид B. anthracis

Слайд 26

B.аnthracis мазок из стареющей культуры мазок-отпечаток из пораженных тканей (окраска по Граму))

B.аnthracis

мазок из стареющей культуры

мазок-отпечаток из пораженных тканей

(окраска по Граму))

Слайд 27

Колонии B. anthracis

Колонии B. anthracis

Слайд 28

Слайд 29

Кожная форма сибирской язвы

Кожная форма
сибирской язвы

Слайд 30

Лабораторная диагностика сибирской язвы материал для исследования а) от больных или

Лабораторная диагностика сибирской язвы материал для исследования

а) от больных или подозрительных на

заболевание людей в зависимости от формы заболевания - содержимое везикул, отделяемое карбункула или язвы, струпья, мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, моча, испражнения, экссудаты;
б) трупный материал - кровь, экссудаты, кусочки органов (селезенки, печени, лимфоузлов и др.);
в) материал от животных;
г) продовольственное сырье и продукты животного происхождения;
д) объекты окружающей среды - почва, трава, фураж, подстилка, вода и т.д.
Слайд 31

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД
СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ

Слайд 32

ЛЮМИНИСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ (МФА)

ЛЮМИНИСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ
(МФА)

Слайд 33

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД I уровень исследования Посевы материала на: МПА, агарХоттингера ,

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
I уровень исследования

Посевы материала на:
МПА, агарХоттингера ,
агар с

фенолфталеинфосфатом (на щелочную фосфатазу)
МПБ.
Инкубация (36 +/- 1) °С на 18 - 20 ч (до 48 ч)
Через 24 часа
Оценка характера роста
Бактериоскопия
Оценка активности щелочной фосфатазы (нет розовых колоний при обработке аммиаком)
МФА и ПЦР с материалом из типичных колоний
Высев для накопления чистой культуры
Слайд 34

I I уровень исследования идентификация Оценка характера роста чистой культуры Бактериоскопия

I I уровень исследования
идентификация

Оценка характера роста чистой культуры
Бактериоскопия
Определение подвижности (рост на

полужидком агаре по следу укола)
Капсулообразование (слизистый рост на сывороточных средах, бактериоскопия)
Чувствительность к бактериофагам
Гемолиз эритроцитов барана (рост на кровяном агаре)
Чувствительность к пенициллину («жемчужное ожерелье», диско-диффузионный метод)
Слайд 35

I I I уровень исследования Дополнительные тесты Чувствительность к антибиотикам Протеолитические

I I I уровень исследования
Дополнительные тесты

Чувствительность к антибиотикам
Протеолитические свойства:

Желатин
Казеин
Альбумин
Гемоглобин
Лецитиназная активность
Рост на минимальной среде
Оценка вирулентности на среде с противосибиреязвенным иммуноглобулином
(слизистые колонии, капсула в мазке, преципитация вокруг колоний)
Слайд 36

Биологический метод Животные - белые беспородные мыши, морские свинки, золотистые хомячки.

Биологический метод
Животные - белые беспородные мыши,
морские свинки,
золотистые хомячки.
Инфицирование -

внутренняя поверхность бедра
Гибель - чаще через 1 - 3 сут.
Студенистый геморрагический отек подкожной клетчатки на месте введения материала, гиперемия внутренних органов, увеличение селезенки, несвернувшаяся кровь.
Из тканей и органов - мазки-отпечатки,
посевы.
Слайд 37

Молекулярно-генетические методы исследования ПЦР с пробами из нативного материала с материалом

Молекулярно-генетические методы исследования
ПЦР

с пробами из нативного материала
с материалом из подозрительных колоний;
с

материалом от биопробных животных
с пробами из объектов внешней среды, продуктов
Слайд 38

Выявление сибиреязвенного антигена МФА, р Асколи Реакция термокольцепреципитации Асколи

Выявление сибиреязвенного антигена МФА, р Асколи Реакция термокольцепреципитации Асколи

Слайд 39

Серологический метод МФА (непрямой), РНГА Специфические антитела с 5-х сут. после

Серологический метод МФА (непрямой), РНГА

Специфические антитела с 5-х сут. после начала болезни,


титр нарастает до 21 и более суток.
Увеличение титра в парных сывороток с интервалом 5 - 7 дней.
В МФА: диагностические титры 1:16 - 1:32 или
4-кратное нарастание при повторном исследовании.
Слайд 40

Аллергический метод Антраксин (anthraxinum) - гидролизат вегетативных форм сибиреязвенных бацилл. Вводят

Аллергический метод

Антраксин (anthraxinum) - гидролизат вегетативных форм сибиреязвенных бацилл.

Вводят 0,1 мл строго

внутрикожно.
Результат положительный: через 24 - 48 ч участок гиперемии с инфильтрацией не менее 16-25 мм в диаметре.
Реакция сомнительная - до 15 мм,
требует повторения через 5-7 дней. 
Слайд 41

Протокол. Лабораторная диагностика сибирской язвы

Протокол. Лабораторная диагностика сибирской язвы