Биосинтез белков. Фактор терминации трансляции тРНК. (Лекция 14)

Июль 25, 2022

Главная
Биология
Биосинтез белков. Фактор терминации трансляции тРНК. (Лекция 14)

Содержание

2. Этап 1 (связывание аминоацил-тРНК) катализируется фактором элонгации EF1 (эукариоты) или EF-Tu (прокариоты), а этап 3 (транс-локация)
3. Факторы элонгации продвигают трансляцию и повышают ее точность. Два фактора элонгации входят в рибосому и покидают
4. Эпицикл трансляции (задает фазу по триплетам) Стадии инициации и терминации – это модификации стадии элонгации. В
5. Инициация трансляции – это серия молекулярных событий, происходящих с рибосомой, которая приводит к взаимодействию рибосомы с
6. Основные события при инициации трансляции Инициация начинается с диссоциации рибосомы. Малая субчастица связывает специальные белки –
7. Участки связывания рибосом (RBS) в мРНК Наличие RBS в мРНК обеспечивают возможность малой субчастице отличить стартовый
8. Инициаторы трансляции у про- и эукариот Специальная инициаторная метионил-тРНК (Met-тРНКiMet ) с тем же антикодоном CAU,
9. Неканоническое спаривание третьего (редко - первого) нуклеотида антикодона CAU тРНКFMet прокариот Малая субчастица обеспечивает взаимодействие инициаторного
10. Способы распознавания инициаторного кодона мРНК у эукариот и прокариот Эукариоты (моноцистронная мРНК): терминальная инициация – трансляция
11. Внутренняя инициация на полицистронной мРНК прокариот Рибосома прокариот узнает в мРНК участки связывания рибосомы (RBS) -
12. Узнавание инициирующего кодона на мРНК прокариот Инициирующий триплет AUG (GUG, UUG и др.) расположен через 3-10
13. «Терминальная инициация по сканирующему механизму» происходит с первого от 5’-конца триплета AUG, который находится в оптимальном
14. Фактор инициации IF3 (eIF3) -это фактор диссоциации субчастиц рибосомы IF2:ГТФ – аналог фактора элонгации EF1:ГТФ, связывается
15. Инициация трансляции (2): ассоциация субчастиц и функции большой субчастицы IF2:ГТФ Большая субчастица «наводит» ГТРазную активность на
16. Инициация синтеза белка у эукариот Для эффективного запуска трансляции необходимо, чтобы поли-А хвост мРНК был связан
17. Элонгация пептида на рибосоме Меt-tRNA Val-tRNA а - инициаторная метионил-тРНК в Р-участке; первая элонгаторная валил-тРНК, комплементарная
18. Сопряженная транскрипция-трансляция у прокариот Сопряжение осуществляется в пространстве (комплекс ДНК : РНК-полимераза : мРНК) и во
19. Эпицикл трансляции ИНИЦИАЦИЯ – ЭЛОНГАЦИЯ – ТЕРМИНАЦИЯ мРНК: нет специального триплеты терминаторный инициаторного триплета аминокислот триплет
20. Терминация трансляции Стадия терминации трансляции может рассматриваться как модифицированный элонгационный цикл, где пептидил-тРНК в качестве донорного
21. «Универсальный» кодовый словарь и факторы терминации прокариот RF1 RF2
22. Терминация трансляции а - после добавления к растущему полипептиду С-концевого аминокислотного остатка в А-участке устанавливается кодон
23. Молекулярная мимикрия: структура фактора терминации еRF1человека и его сходство с молекулой тРНК
24. «Портрет» большой рибосомной субчастицы бактерий белки рРНК Со стороны малой субчастицы С другой строны Слабое вращение
25. Комплекс терминации/реинициации трансляции у эукариот: петля 5‘кэп - 3‘поли-A-хвост мРНК и участие поли(А)-связывающего белка (PABP) eRF1–eRF3
26. Синтез большинства белковых молекул занимает от 20 секунд до нескольких минут. В течение этого промежутка времени
27. Стадии инициации и терминации – это модифицированный элонгационный цикл При инициации Met-tRNAfMet:IF2:GTP аналогична Aa-tRNA:EF1:GTP при элонгации.
28. Транспортно-матричная РНК (тмРНК) Транспортно-матричная РНК (тмРНК) содержит элементы как мРНК, так и тРНК. Матричная часть тмРНК
29. Роль транспортно-матричной РНК (тмРНК) Деградация КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА мРНК Деградация КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА БЕЛКА Освобождение мРНК Маркировка (tagging)
30. Регуляция трансляции Регуляция осуществляется путем изменения интенсивности трансляции на данной мРНК (в диапозоне от индукции трансляции
31. Позитивная регуляция: дискриминация мРНК Различные мРНК обладают разным сродством к инициирующим рибосомным частицам У прокариотических организмов
32. «Сила» мРНК в значительной мере определяет соотношение продукции различных белков в клетке Структурные белки мембран, рибосомные
33. Трансляционное сопряжение у прокариот В полицистронных мРНК работает механизм внутренней инициации, и рибосомы во многих случаях
34. Независимая и сопряженная инициация трансляции последовательных цистронов прокариотических мРНК а - независимая инициация трансляции б -
35. Негативная регуляция: трансляционная репрессия а) Сайт-специфические РНК-связывающие белки подавляют трансляцию специфических мРНК, блокируя доступ рибосомы к
36. Свойственно только эукариотам. Связывание маскирующего белка с сегментом маскирования в З'-нетранслируемой области (З'-UTR) мРНК приводит к
37. Функионирование RISC c miRNA и siRNA Мисмэтчи miRNA с мРНК не расщепляются и накапливаются в Р-тельцах
38. Маскирование мРНК у эукариот Маскирование и демаскирование мРНК являются особенно характерными для процессов гаметогенеза (оогенеза и
40. Скачать презентацию

Слайд 2

Этап 1 (связывание аминоацил-тРНК) катализируется фактором элонгации EF1 (эукариоты) или

EF-Tu (прокариоты), а этап 3 (транс-локация) - фактором элонгации EF2 (EF-G) .
В обоих процессах участвует ГТФ, гидролизующаяся до ГДФ и ортофосфата.
Этап 2 – транспепти-
дация.

Элементарный элонгационный цикл рибосомы

В результате элементарного элонгационного цикла полипептид удлиняется на одну аминокислоту

Слайд 3

Факторы элонгации продвигают трансляцию и повышают ее точность.
Два фактора элонгации

входят в рибосому и покидают ее в ходе каждого цикла: каждый из них гидролизует GTP до GDP, претерпевая при этом конформационные изменения.
Циклы связывания с факторами элонгации, гидролиза GTP и диссоциации гарантируют, что все такие изменения происходят в направлении «вперед», с тем чтобы трансляция могла проходить эффективно.

Фактор EF-Tu обеспечивает две возможности корректировать соответствие кодон–антикодон: 1) избирательно взаимодействует с правильными парами аминокислота–тРНК; 2) отслеживает первичное взаимодействие между антикодоном подходящей аминоацил-тРНК и кодоном мРНК в A-сайте.

Слайд 4

Эпицикл трансляции
(задает фазу
по триплетам)
Стадии инициации и терминации – это

модификации стадии элонгации.
В результате эпицикла трансляции синтезтруется полипептид

Слайд 5

Инициация трансляции – это серия молекулярных событий, происходящих с рибосомой, которая

приводит к взаимодействию рибосомы с началом кодирующей нуклеотидной последовательности мРНК и последующему считыванию (трансляции) этой последовательности. Специального инициаторного кодона нет, используются кодоны для аминокислот, у эукариот AUG(Met), у прокариот еще и другие.
При инициация трансляции специальная инициаторная метионил-тРНК заполняет рибосомный Р-сайт, имитируя пептидил-тРНК (донорный субстрат). Инициация обеспечивает точное узнавание первого кодона на мРНК и задает рамку считывания.
Второй субстрат при инициации отсутствует, и никакой реакции транспептидации, свойственный элонгационному циклу, не происходит.
Инициация играет ключевую роль в регуляции биосинтеза белков на уровне трансляции; она является точкой приложения регуляторных механизмов, определяющих интенсивность трансляции различных мРНК и, следовательно, продукцию соответствующих белков в клетке.

Инициация трансляции

Слайд 6

Основные события при инициации трансляции
Инициация начинается с диссоциации рибосомы.
Малая субчастица

связывает специальные белки – факторы инициации (IF):
-       у прокариот их 3 (IF1-IF3),
-       у эукариот – 12 (eIF1-eIF12).
Малая субчастица осуществляет свою декодирующую функцию и обеспечивает начало считывания мРНК:
-   распознает специальный инициаторный участок мРНК и связывает мРНК;
-  обеспечивает поблизости взаимодействие инициаторного (стартового) кодона с антикодоном специальной инициаторной метионил-тРНК и задает рамку считывания. Все другие аминоацил-тРНК связываются только с полной рибосомой.
Инициаторная аминоацилированная тРНКMet попадает в Р-сайт рибосомы и служит донорным субстратом в образовании первой пептидной связи.
Большая субчастица связывается с малой, что завершает инициацию.

Слайд 7

Участки связывания рибосом (RBS) в мРНК
Наличие RBS в мРНК обеспечивают возможность

малой субчастице отличить стартовый кодон от аналогичных внутренних кодонов, кодирующих аминокислоту. Известные RBS: - в мРНК эукариот – 5’- кэп, после чего малая субчастица узнает последовательность Козака и первый кодон AUG(Met);
- в мРНК прокариот – последовательность Шайна — Дальгарно (SD), расположенная на расстоянии до 10 нуклеотидов до инициирующего кодона;
- в некоторых мРНК эукариот и у вирусов –протяженные IRES (internal ribosome entry site) в 5’-нетранслируемой области мРНК (5’-UTR)
RBS узнаются 3’-концом рРНК малой субчастицы (комплемент. пары).

IRES в 5’-UTR
РНК-генома
полиовируса

Слайд 8

Инициаторы трансляции у про- и эукариот
Специальная инициаторная метионил-тРНК (Met-тРНКiMet )

с тем же антикодоном CAU, как у тРНКMet, но с некоторыми отличиями структуры от тРНКMet: первичной структуры (у эукариот) или вторичной (у прокариот).
У про- и эукариот Met-тРНКiMet аминоацилируется Met в реакции, катализируемой обычной метионил-тРНК-синтетазой.
У эукариот инициатор трансляции - Met-тРНКiMet.
У прокариот инициатор трансляции – формилированная F-Met-тРНКFMet (содержит амидную связь между Met и формильной группой, т.е. химически сходна с пептидил-тРНК):
формилтрансфераза переносит формильную группу от формилтетрагидрофолата на Met-тРНКFMet;
в дальнейшем формилаза расщепляет F-Met до Met.
У про- и эукариот N-концевой Met как правило отщепляется аминопептидазой от зрелого белка.

Слайд 9

Неканоническое спаривание третьего (редко - первого) нуклеотида антикодона CAU тРНКFMet прокариот

Малая субчастица обеспечивает взаимодействие инициаторного кодона мРНК с антикодоном инициаторной тРНК

у эукариот: AUG(Met),
у прокариот: AUG(Met)>>GUG(Val)>UUG(Leu)>
[AUU(Ile), AUA(Ile)]

Кодоны

Антикодон тРНКFMet CAU

(Ile)
5’AUU3’ 5’AUA3’
3’UAC 5’ 3’UAC5’

Слайд 10

Способы распознавания инициаторного кодона мРНК у эукариот и прокариот
Эукариоты (моноцистронная мРНК):

терминальная инициация – трансляция мРНК начинается с первого кодона AUG от 5’-кэпа.

Прокариоты (полицистронная мРНК): внутренняя инициация трансляции сразу нескольких кодирующих последовательностей внутри мРНК.

30S-субчастица

40S-субчастица

50S-субчастица

60S-субчастица

локальная структура с инициирующим кодоном

первый кодон AUG

мРНК

5’-кэп

Слайд 11

Внутренняя инициация на полицистронной мРНК прокариот
Рибосома прокариот узнает в

мРНК участки связывания рибосомы (RBS) - последовательности Шайна-Дальгарно (SD). SD –это полипуриновая (GGAG-содержащая) последовательность длиной 4-7 н.
Обычно на расстоянии от 3 до 10 нуклеотидов после SD находится инициаторный кодон AUG (или GUG, UUG и др.).
Это позволяет бактериям синтезировать с одной полицистронной мРНК несколько белков.

«Кэпа» нет

Слайд 12

Узнавание инициирующего кодона на мРНК прокариот
Инициирующий триплет AUG (GUG, UUG и

др.) расположен через 3-10 остатков после последовательности Шайна-Дальгарно (SD);
последовательность SD вступает во взаимодействие с 16S рРНК, что обеспечивает правильное расположение инициирующего кодона в рибосоме;
В начале транслируемого цистрона в полицистронных мРНК образуется нестабильная короткая шпилька с инициаторным кодом на вершине;
При трансляции соседних цистронов и связывании регуляторных белков вторичная структура шпильки может меняться.

тРНКFMet

мРНК

инициаторный
кодон в мРНК

Слайд 13

«Терминальная инициация по сканирующему механизму» происходит с первого от 5’-конца триплета

AUG, который находится в оптимальном контексте A/GCCAUGGA/CU (последовательность Козак); в 90% случаев это первый AUG.
Для такой инициации обязательно наличие 5'-кэпа (RBS), 3’-поли(А) последовательности и узнающих их специфических белков.
На некоторых мРНК эукариот и вирусных РНК происходит «внутренняя инициация» за счет узнавания рибосомами определенного внутреннего AUG. Для этого требуется протяженная последовательность (IRES, internal ribosome entry site) в 5’-нетранслируемой области мРНК (5’-UTR), которая узнается особыми клеточными белками и затем обеспечивает связывание рибосомы.
- Обнаружена для мРНК, кодирующих некоторые регуляторные белки, необходимые для эмбрионального развития.
- Мутация IRES в гене коннексина-32 – причина болезни Шарко-Мари-Тус.
- Мутация IRES в гене c-myc вызывает повышенную трансляцию этого онкогена, что приводит к множественной миеломе.
Используя оба способа инициации, с одной мРНК можно считать два разных белка, различающиеся по N-концу (например, с сигнальным пептидом и без него).

Узнавание инициирующего кодона на мРНК эукариот

Слайд 14

Фактор инициации IF3 (eIF3) -это фактор диссоциации субчастиц рибосомы
IF2:ГТФ – аналог

фактора элонгации EF1:ГТФ, связывается тем же участком рибосомы

IF2:ГТФ

Инициация трансляции (1): декодирующая функция малой субчастицы

У эукариот сначала связывается
Мет-тРНК, а потом - мРНК

Стадия сканирования мРНК есть
только у эукариот
eIF4 – АТРаза, хеликаза

Сформирован инициаторный комплекс: малая субчастица точно установлена на начале кодирующей последовательности мРНК

IF3

Слайд 15

Инициация трансляции (2): ассоциация субчастиц и функции большой субчастицы
IF2:ГТФ
Большая субчастица «наводит»

ГТРазную активность на IF2, и IF2 с ГДФ легко вытесняются из рибосомы.
Мет-тРНКi после ухода IF2 оказывается в Р-участке рибосомы. Все другие факторы инициации также вытесняются.

Полная рибосома (70S прокариот, 80S эукариот) готова к элонгации. Р-участок занят метионил-тРНКi, А-участок вакантен.
Далее – элонгация, образуется первая пептидная связь:
Met-tRNAi + Aa-tRNAe Met-Aa-tRNAe + tRNAi

GDP

Слайд 16

Инициация синтеза белка у эукариот
Для эффективного запуска трансляции необходимо, чтобы

поли-А хвост мРНК был связан с поли-А-связывающими белками, которые, в свою очередь, взаимодействуют с elF4G (проверка интактности мРНК).
Еще одно событие гидролиза GTP происходит непосредственно перед объединением большой и малой субчастиц рибосомы.

Показаны только три из многих необходимых факторов инициации трансляции.

Слайд 17

Элонгация пептида на рибосоме
Меt-tRNA
Val-tRNA
а - инициаторная метионил-тРНК в Р-участке; первая

элонгаторная валил-тРНК, комплементарная кодону GUG, приходит в A-участок;
б – транспептидация;
в - транслокация;
г - лейцил-тРНК, комплементарная очередному кодону CUG, связывается с А-участком.
д – транспептидация;
е – транслокация.
Далее процесс продолжается по схеме (г’->д’->е’).

Val-tRNA

Leu-tRNA

транспеп-тидация

транс-локация

связы-вание

Слайд 18

Сопряженная транскрипция-трансляция у прокариот
Сопряжение осуществляется в пространстве (комплекс ДНК

: РНК-полимераза : мРНК) и во времени (координация скоростей транскрипции и трансляции – 10-15 триплетов/сек).
У эукариот сопряжение транскрипции и трансляции невозможно (ядерная мембрана, для инициации нужен 3’-конец мРНК).

Слайд 19

Эпицикл трансляции
ИНИЦИАЦИЯ – ЭЛОНГАЦИЯ – ТЕРМИНАЦИЯ
мРНК: нет специального триплеты

терминаторный
инициаторного триплета аминокислот триплет
тРНК: специальная тРНК для нет терминаторной тРНК
иницаторная тРНКiMet аминокислот
Факторы
(общее название): IF (eIF) EF RF

Слайд 20

Терминация трансляции
Стадия терминации трансляции может рассматриваться как модифицированный элонгационный цикл, где

пептидил-тРНК в качестве донорного субстрата реагирует с молекулой воды, вместо аминоацил-тРНК, в качестве акцепторного субстрата.
В терминации участвуют факторы терминации RF1 или RF2, узнающие терминирующий кодон, и ГТФаза RF3.
Терминация трансляции у прокариот и эукариот отличается только по составу факторов терминации:
- у эукариот eRF1 узнает все терминирующие кодоны UAA/UAG/UGA
- у прокариот RF1 узнает кодоны UAA/UAG, a RF2 - UAA/UGA

Слайд 21

«Универсальный» кодовый словарь и факторы терминации прокариот
RF1
RF2

Слайд 22

Терминация трансляции
а - после добавления к растущему полипептиду С-концевого аминокислотного остатка

в А-участке устанавливается кодон терминации (UAG, UAA или UGA);
б - Связывание факторов терминации RF1 (или RF2) и RF3 (в комплексе с ГТФ);
в - гидролиз связи между тРНК и полипептидом пептидилтрансферазным центром рибосомы; выход полипептида;
г - деацилированная тРНК освобождается из рибосомы;
д - "пустая" рибосома легко диссоциирует на субчастицы.
Малая субчастица может некоторое время оставаться в лабильной ассоциации с мРНК, и в случае полицистронных мРНК у прокариот проскользнуть по цепи мРНК до начала следующей кодирующей последовательности и инициировать новую трансляцию (реинициация).

Слайд 23

Молекулярная мимикрия: структура фактора терминации еRF1человека и его сходство с молекулой

тРНК

Слайд 24

«Портрет» большой рибосомной субчастицы бактерий
белки
рРНК
Со стороны малой субчастицы С другой строны

Слабое вращение вида В
(поворот на 1800) по диагональной оси

Выходной
канал
пептида

Выходной канал пептида: большой (10нм х 1.5 нм), наполненный водой туннель, стенки которого представляют собой мозаику из крошечных гидрофобных поверхностей, уложенных на более пространном гидрофильном фоне. Такая структура сродни тефлоновому покрытию, по которой скользит любой пептид в почти неструктурированном виде (есть только небольшие альфа-спиральные области)

Слайд 25

Комплекс терминации/реинициации трансляции у эукариот: петля 5‘кэп - 3‘поли-A-хвост мРНК и участие

поли(А)-связывающего белка (PABP)

eRF1–eRF3 комплекс связан с А-сайтом рибосомы (показана пунктиром), достигшей стоп-кодона.
После гидролиза пептидил-тРНК комплекс eRF1–eRF3 связывается с поли(А)-связывающим белком (PABP).

Взаимодействие PABP с факторами инициации трансляции (eIF4G и др.) приводит к образованию замкнутой петли мРНК и обеспечивает «рециклирование» рибосомы и реинициацию трансляции

Слайд 26

Синтез большинства белковых молекул занимает от 20 секунд до нескольких минут.
В

течение этого промежутка времени на каждой транслируемой молекуле мРНК обыкновенно происходит множество событий инициации трансляции.

Реинициация трансляции на полирибосоме

80 н.

Электронная микрофотография и схема образования полирибосомы в эукариотической клетке

Слайд 27

Стадии инициации и терминации – это модифицированный элонгационный цикл
При инициации Met-tRNAfMet:IF2:GTP

аналогична Aa-tRNA:EF1:GTP при элонгации.
Когда к инициирующей малой субчастице присоединяется большая субчастица, фактор IF2, осуществляющий гидролиз GTP при транслокации Met-tRNAfMet в Р-сайт, ведёт себя подобно фактору транслокации EF-G в элонгационном цикле.
При терминации RF1 (или RF2) является аналогом Aa-tRNA (пространственная струкура RF1 похожа на тРНК), а RF3:GTP аналогичен EF1:GTP.
Гидролиз сложноэфирной связи в пептидил-тРНК при терминации – аналог реакции транспептидации.

Слайд 28

Транспортно-матричная РНК (тмРНК)
Транспортно-матричная РНК (тмРНК) содержит элементы как мРНК, так и

тРНК. Матричная часть тмРНК кодирует пептид, являющейся сигналом узнавания специфическими протеазами (tag-пептид). тРНК-подобная часть может аминоацилироваться.
С помощью тмРНК клетка избавляется от потенциально опасных недосинтезированных белков и освобождает рибосомы для дальнейшего синтеза.
В аминоацилированном состоянии тмРНК взаимодействует с рибосомой, в которой синтез белка блокирован деградированной мРНК, не содержащей сигнал терминации. тмРНК входит в А-участок таких заблокированных рибосом, полипептидная цепь переносится на молекулу аминоацил-тмРНК, после чего трансляция продолжается по матричной части тмРНК, завершающейся стоп-кодоном, на котором рибосома может терминировать полипептид с помощью обычных клеточных механизмов.
Синтезированный при участии тмРНК неполноценный белок несет tag-пептид, что приводит к его быстрому гидролизу специфическими протеазами.
тмРНК важна для роста клеток при условиях стресса, например, при повышенной температуре.
тмРНК играет важную роль в жизнедеятельности клеток и при некоторых нормальных условиях (поддерживает рост различных фагов, необходима для вирулентности некоторых бактерий, участвует в регуляции некоторых оперонов).

Слайд 29

Роль транспортно-матричной РНК (тмРНК)
Деградация
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА мРНК
Деградация

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА БЕЛКА

Освобождение мРНК

Маркировка (tagging) белка

Освобождение рибосомы

ВОЗВРАЩЕНИЕ РИБОСОМ В ОБОРОТ

мРНК без стоп-кодона

тмРНК

Слайд 30

Регуляция трансляции
Регуляция осуществляется путем изменения интенсивности трансляции на данной мРНК (в

диапозоне от индукции трансляции «молчащих» мРНК до полного прекращения трансляции) посредством регуляции инициации трансляции:
позитивная регуляция на основе сродства мРНК к инициирующей рибосоме и факторам инициации (дискриминация мРНК).
негативная регуляция с помощью белков-репрессоров, маскирующих белков и малых регуляторных РНК, которые, связываясь с мРНК, блокируют инициацию (трансляционная репрессия и маскирование мРНК).
В этих типах регуляции трансляции важнейшая роль принадлежит 5'- и 3'-нетраслируемым областям мРНК.
тотальная регуляция (подавление) инициации трансляции всех мРНК клетки посредством модификации фактора инициации eIF2.
При наличии ряда общих черт регуляции на уровне трансляции у прокариот и эукариот, эти два надцарства живых существ обладают также уникальными путями или способами регуляции. Так, тотальная регуляция за счет модификации факторов инициации характерна только для эукариот.

Слайд 31

Позитивная регуляция: дискриминация мРНК
Различные мРНК обладают разным сродством к инициирующим рибосомным

частицам
У прокариотических организмов участки связывания рибосомы (RBS) разных мРНК имеют разное сродство к рибосомам.
В эукариотических клетках дискриминация мРНК обусловлена разным сродством факторов инициации, а не самих рибосом, к разным 5'-концевым инициаторным структурам мРНК.

«плотные» полирибосомы

Слайд 32

«Сила» мРНК в значительной мере определяет соотношение продукции различных белков в

клетке

Структурные белки мембран, рибосомные белки, факторы элонгации, белки оболочки вирусов и другие белки, требуемые в большом количестве, кодируются «сильными» мРНК.
«Слабыми» мРНК кодируются многие специализированные ферменты и регуляторные белки.
Как правило, если белок имеет четвертичную структуру, построенную из разных субъединиц в различном соотношении, то «сила» мРНК или ее отдельных участков (цистронов), кодирующих эти субъединицы, координирована с пропорцией субъединиц в структуре.
- Пример: протонная АТФаза бактерий со структурой а1b2c10. Субъединица с кодируется очень «сильным» цистроном мРНК, субъединица а — «слабым», а субъединица b — цистроном промежуточной «силы».
Дискриминацию мРНК можно рассматривать как механизм конститутивного контроля надлежащего соотношения продуктов белкового синтеза.

Слайд 33

Трансляционное сопряжение у прокариот
В полицистронных мРНК работает механизм внутренней инициации, и

рибосомы во многих случаях могут инициировать трансляцию последовательных цистронов независимо друг от друга. Тогда интенсивность инициации и, следовательно, продуктивность цистронов будут определяться их собственной «силой»;
Инициация трансляции внутренних цистронов в ряде случаев может зависеть от трансляции предшествующего цистрона (трансляционное сопряжение):
- рибосомы, транслирующие предшествующий цистрон, расплетают вторичную и/или третичную структуру мРНК, в которой участвует инициаторный участок последующего цистрона, и делают его доступным для инициации свободными рибосомами (тип 1).
- сам по себе внутренний цистрон вообще не доступен для свободных инициирующих рибосомных частиц, и возможна только его реинициация 30S-субчастицами, терминировавшими на предыдущем цистроне и еще не успевшими покинуть мРНК (тип 2).

Слайд 34

Независимая и сопряженная инициация трансляции последовательных цистронов прокариотических мРНК
а -

независимая инициация
трансляции

б - инициация трансляции, зависимая от трансляции предшествующего цистрона (тип 1).

в – реинициация 30S-субчастицами, терминировавшими на предыдущем цистроне
(тип 2).

30S-субчастица

Слайд 35

Негативная регуляция: трансляционная репрессия
а) Сайт-специфические РНК-связывающие белки подавляют трансляцию специфических мРНК,

блокируя доступ рибосомы к последовательности SD.
б) «Термодатчик» РНК позволяет провести эффективную инициацию трансляции только при повышенной температуре.

в) Связывание низкомолекулярного соединения с рибопереключателем вызывает структурную перестройку РНК, изолируя последовательность SD.
г) «Антисмысловая» РНК, синтезированная в каком-то другом месте генома, спаривается со специфической мРНК и блокирует ее трансляцию.

Оранжевым показана последовательность
Шайна – Дальгарно (SD)

Примеры относятся к клеткам бактерий, но многие из этих принципов действуют и у эукариот.

Слайд 36

Свойственно только эукариотам.
Связывание маскирующего белка с сегментом маскирования в З'-нетранслируемой

области (З'-UTR) мРНК приводит к инактивации ее функций по всей длине.
При маскировании соответствующая мРНК не только становится недоступной для инициации трансляции, но и фактически выведена из всех других процессов ее возможных превращений или изменений - деградации нуклеазами, ферментативной модификации ее З'-конца путем полиаденилирования, и т. п.

Негативная регуляция: маскирование мРНК

Слайд 37

Функионирование RISC c miRNA и siRNA
Мисмэтчи miRNA с мРНК не

расщепляются и накапливаются в Р-тельцах и репрессируют трансляцию (маскирование мРНК?).

Слайд 38

Маскирование мРНК у эукариот
Маскирование и демаскирование мРНК являются особенно характерными для

процессов гаметогенеза (оогенеза и сперматогенеза), раннего эмбрионального развития, клеточной дифференцировки, гормонального включения или выключения функций.
Маскирование мРНК является способом запасания мРНК. Например, в оогенезе происходит запасание ряда материнских мРНК в маскированной форме, и часть этих мРНК демаскируется в ответ на оплодотворение яйцеклетки, обеспечивая белковый синтез на самых ранних стадиях эмбриогенеза.
Маскирование требует не только посадки маскирующего белка на 3'-UTR, но и присутствия большого количества менее специфического РНК-связывающего белка на всей мРНК (формирование информосом).

Тотальная регуляция трансляции у эукариот

Наиболее обычный путь тотальной регуляции белкового синтеза у эукариот (животные, грибы) - это активация специальной фосфокиназы, которая фосфорилирует eIF2, что приводит к подавлению инициации трансляции практически всех мРНК клетки.
Сигналами для активации фосфокиназы в клетке являются тепловой шок и другие виды стрессовых воздействий, недостаток ростовых факторов, аминокислотное голодание, недостаток железа, вирусные инфекции и пр.

Биосинтез белков. Фактор терминации трансляции тРНК. (Лекция 14)

Содержание

Этап 1 (связывание аминоацил-тРНК) катализируется фактором элонгации EF1 (эукариоты) или

Факторы элонгации продвигают трансляцию и повышают ее точность. Два фактора элонгации

Эпицикл трансляции(задает фазу по триплетам) Стадии инициации и терминации – это

Инициация трансляции – это серия молекулярных событий, происходящих с рибосомой, которая

Основные события при инициации трансляции Инициация начинается с диссоциации рибосомы.Малая субчастица

Участки связывания рибосом (RBS) в мРНКНаличие RBS в мРНК обеспечивают возможность

Инициаторы трансляции у про- и эукариот Специальная инициаторная метионил-тРНК (Met-тРНКiMet )

Неканоническое спаривание третьего (редко - первого) нуклеотида антикодона CAU тРНКFMet прокариот

Способы распознавания инициаторного кодона мРНК у эукариот и прокариотЭукариоты (моноцистронная мРНК):

Внутренняя инициация на полицистронной мРНК прокариот Рибосома прокариот узнает в

Узнавание инициирующего кодона на мРНК прокариотИнициирующий триплет AUG (GUG, UUG и

«Терминальная инициация по сканирующему механизму» происходит с первого от 5’-конца триплета

Фактор инициации IF3 (eIF3) -это фактор диссоциации субчастиц рибосомыIF2:ГТФ – аналог

Инициация трансляции (2): ассоциация субчастиц и функции большой субчастицыIF2:ГТФБольшая субчастица «наводит»

Инициация синтеза белка у эукариот Для эффективного запуска трансляции необходимо, чтобы

Элонгация пептида на рибосомеМеt-tRNAVal-tRNA а - инициаторная метионил-тРНК в Р-участке; первая

Сопряженная транскрипция-трансляция у прокариот Сопряжение осуществляется в пространстве (комплекс ДНК

Эпицикл трансляции ИНИЦИАЦИЯ – ЭЛОНГАЦИЯ – ТЕРМИНАЦИЯмРНК: нет специального триплеты

Терминация трансляцииСтадия терминации трансляции может рассматриваться как модифицированный элонгационный цикл, где

«Универсальный» кодовый словарь и факторы терминации прокариотRF1RF2

Терминация трансляцииа - после добавления к растущему полипептиду С-концевого аминокислотного остатка