Содержание
- 2. ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК ФЕРМЕНТЫ - ИНСТРУМЕНТЫ Профессор каф. Зоологии факультета биологии РГПУ им. А.И. Герцена д.б.н.,
- 3. Технология рекомбинантных ДНК (ее называют также молекулярным клонированием или генной инженерией) — это совокупность экспериментальных процедур,
- 4. Генетическая инженерия - получение новых комбинаций генетического материала путем проводимых вне клетки манипуляций с молекулами нуклеиновых
- 5. Основные предпосылки развития генетической инженерии 1944 г. - Эйвери, Мак Леод и Мак Карти показали, что
- 6. Цель прикладной генетической инженерии заключается в конструировании таких рекомбинантных молекул ДНК, которые при внедрении в генетический
- 7. Структура ДНК Нуклеотиды соединяются друг с другом в полимерную цепочку с помощью фосфодиэфирных связей.
- 8. Технология рекомбинантных ДНК использует следующие методы: специфическое расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции, ускоряющее выделение и манипуляции с
- 9. Однако, никакого единого, универсального набора методик здесь не существует, но чаще всего эксперименты с рекомбинантной ДНК
- 10. В условиях in vivo инструментами молекулярного манипулирования являются ферменты. Технология рекомбинантной ДНК потому и называется технологией
- 11. Ферменты, применяемые при конструировании рекомбинантных ДНК, можно объединить в несколько групп: - ферменты, с помощью которых
- 12. ИНСТРУМЕНТАРИЙ ФЕРМЕНТЫ НУКЛЕАЗЫ позволяют специфическим образом модифицировать молекулы ДНК и РНК: экзонуклеазы и эндонуклеазы. Нуклеазы могут
- 13. Рестрицирующие эндонуклеазы (РЭ) Эндонуклеазы рестрикции – высокоспецифичные бактериальные ферменты, которые узнают определенные последовательности оснований в двухцепочечной
- 14. Рестрицирующие эндонуклеазы типа II Ферменты этой группы не проявляют метилазную активность. Типичный представитель – EcoRI.Участок узнавания
- 15. Действие эндонуклеаз рестрикции типа II
- 16. НОМЕНКЛАТУРА 1. Название фермента начинается с трехбуквенного акронима, в котором первая буква совпадает с первой буквой
- 17. НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ РЭ На настоящий момент описано приблизительно 500 РЭ. У всех этих ферментов обнаружено около
- 18. Палиндромные участки узнавания и разрезания могут быть представлены шестью парами нуклеотидов (EcoRI, HindIII), пятью парами, где
- 19. Фосфомоноэстеразы (фосфатазы). Эти ферменты отщепляют как 5’-, так и 3’-концевые фосфомоноэфирные группы в ДНК и РНК.
- 20. Лигазы (лат. ligare – сшивать, соединять) – это ферменты, катализирующие соединение двух молекул с образованием новой
- 21. . ДНК-полимераза I удлинение цепи путем последовательного присоединения нуклеотидов к праймеру со свободной 3’ – гидроксильной
- 22. ДНК-полимераза E.coli. Фермент состоит из мономерной полипептидной цепи с молекулярной массой 103 кДа и имеет 3-х
- 23. Схема, демонстрирующая 5'→3' полимеразную активность ДНК-полимеразы I E.coli
- 24. Схема, демонстрирующая 3'→5'-экзонуклеазную активность ДНК-полимеразы I E.coli
- 25. Бифункциональная часть ДНК-полимеразы, состоящая из 5’ → 3’полимеразы и 3’→5’ экзонуклезы, названа фрагментом Кленова (по фамилии
- 26. Обратная транскриптаза (ревертаза или РНК-зависимая ДНК-полимераза) представляет собой фермент, катализирующий синтез ДНК на матрице РНК в
- 27. Терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза (терминальная трансфераза) синтезирует полинуклеотидную цепь в безматричном синтезе. Используется для создания липких концов. Реакция,
- 28. Создание рекомбинантной ДНК – это процесс объединения in vitro двух или более фрагментов ДНК, выделенных из
- 29. Лигирование по одноименным "липким" концам
- 30. Лигирование по "тупым" концам коннекторным методом
- 31. Лигирование фрагментов с разноименными липкими, или липким и тупым концам В ситуациях, когда необходимо сшить фрагменты
- 32. Изменение концов фрагментов ДНК с помощью различных адаптеров: “тупой – липкий” (1); “липкий – липкий” (2);
- 33. Преобразование липких концов рестрикционных фрагментов ДНК в тупые.
- 34. Линкеры, содержащие участки узнавания для нескольких эндонуклеаз рестрикции, называются полилинкерами или множественными сайтами клонирования (MCS –
- 36. Скачать презентацию