Генетика микроорганизмов

Содержание

Слайд 2

Генетическая информация Хранение – ДНК, хромосомы, плазмиды, репликация и репарация Реализация

Генетическая информация

Хранение – ДНК, хромосомы, плазмиды, репликация и репарация
Реализация – транскрипция

и трансляция
Передача – трансформация, конъюгация, трансдукция
Слайд 3

Хранение генетической информации ДНК – полимер, состоящий из дезоксирибонуклеотидов Хранение

Хранение генетической информации

ДНК – полимер, состоящий из дезоксирибонуклеотидов

Хранение

Слайд 4

Хранение генетической информации Нуклеоид – область цитоплазмы с расположенной в ней

Хранение генетической информации

Нуклеоид – область цитоплазмы с расположенной в ней ДНК,

а также набором белков для ее функционирования (аппарат репликации и транскрипции) и хранения (ДНК-связывающие белки)
Чаще всего у прокариот одна(?) кольцевая(?) хромосома и, соответственно, одна группа сцепления

Хранение

Слайд 5

Хранение

Хранение

Слайд 6

Mycoplasma genitalium – возбудитель урогенитального миксоплазмоза. Внутриклеточный паразит, лишенный клеточной стенки,

Mycoplasma genitalium – возбудитель урогенитального миксоплазмоза. Внутриклеточный паразит, лишенный клеточной стенки,

а значит практически неокрашиваемый обычными способами.
В силу своей паразитарности имеет очень маленький геном – около 580 т.п.н. – меньше, чем у некоторых вирусов

Хранение

Слайд 7

Хранение

Хранение

Слайд 8

Bradyrhizobium japonicum – вид клубеньковых азотфиксаторов, симбионт сои. Имеет один из

Bradyrhizobium japonicum – вид клубеньковых азотфиксаторов, симбионт сои. Имеет один из

самых крупных геномов среди бактерий – около 9-10 млн в зависимости от штамма

Хранение

Слайд 9

Хранение

Хранение

Слайд 10

Упаковка эукариотической хромосомы Хранение

Упаковка эукариотической хромосомы

Хранение

Слайд 11

Упаковка бактериальной хромосомы Суперспирализация – бактериальная хромосома состоит из 50–400 отрицательно

Упаковка бактериальной хромосомы

Суперспирализация – бактериальная хромосома состоит из 50–400 отрицательно суперспирализованных

ДНК петель, средний размер которых около 10 т.п.н.
ДНК петли являются топологически независимыми дискретными хромосомными единицами

Хранение

Слайд 12

Упаковка бактериальной хромосомы nucleoid-associated proteins (NAPs) – белки, ассоциированные с нуклеоидом

Упаковка бактериальной хромосомы

nucleoid-associated proteins (NAPs) – белки, ассоциированные с нуклеоидом
Отвечают за

компартментацию молекулы ДНК

Хранение

Слайд 13

Упаковка бактериальной хромосомы Степень и качество упаковки зависит от периода жизненного цикла: Хранение

Упаковка бактериальной хромосомы

Степень и качество упаковки зависит от периода жизненного цикла:

Хранение

Слайд 14

Репликация ДНК Хранение

Репликация ДНК

Хранение

Слайд 15


Слайд 16

Хранение генетической информации Плазмида - относительно короткие (?) кольцевые (?) молекулы

Хранение генетической информации

Плазмида - относительно короткие (?) кольцевые (?) молекулы ДНК,

реплицирующиеся и функцио-нирующие независимо от хромосомы (?)
Размер – 2-600 т.п.н.
Количество – 1-множество
Плазмида может передаваться от клетки к клетке в процессе конъюгации, либо поглощаться непосредственно из внешней среды в процессе трансформации

Хранение

Слайд 17

Функции плазмид Если плазмида дает бактерии способность быть донором при конъюгации,

Функции плазмид

Если плазмида дает бактерии способность быть донором при конъюгации, то

это F-плазмида (fertility)
Если плазмида содержит гены устойчивости к антибиотикам, то это R-плазмида (resistance)
Плазмиды также могут нести гены вирулентности, гены токсинов, гены антибиотиков, гены метаболизма

Хранение

Слайд 18

Плазмида – идеальный инструмент М-Г исследований В молекулярно-генетических исследованиях плазмиды используют

Плазмида – идеальный инструмент М-Г исследований

В молекулярно-генетических исследованиях плазмиды используют как

вектор (=челнок) для доставки генов в бактерии
В состав плазмиды входит:

ori
Сайты рестрикции
Ген устойчивости к антибиотику
Промотор
Целевой ген
Маркерный ген

Хранение

Слайд 19

Слайд 20

Слайд 21

Маркерные гены - GFP Маркерные гены позволяют узнать результат вставки плазмиды

Маркерные гены - GFP

Маркерные гены позволяют узнать результат вставки плазмиды без

каких-либо вмешательств, так как GFP и подобные белки флуоресцируют в ультрафиолете

Хранение

Слайд 22

Рестриктазы Ферменты, разлагающие полинуклеотиды Экзонуклеазы рестрикции и эндонуклеазы рестрикции В молекулярно-генетических

Рестриктазы

Ферменты, разлагающие полинуклеотиды
Экзонуклеазы рестрикции и эндонуклеазы рестрикции
В молекулярно-генетических исследованиях используются для

разрезания ДНК в определенных для каждой рестриктазы местах – сайтах рестрикции

Хранение

Слайд 23

Слайд 24

ДНК-лигазы Совместно с рестриктазами всегда идут ферменты лигазы, ответственные за соединение

ДНК-лигазы

Совместно с рестриктазами всегда идут ферменты лигазы, ответственные за соединение двух

молекул ДНК, то есть действуют обратно рестриктазам

Хранение

Слайд 25

ЗАЧЕМ? Хранение

ЗАЧЕМ?

Хранение

Слайд 26

Транспозоны Важный фактор изменчивости бактериального генома Транспозоны – МГЭ, способный перемещаться

Транспозоны

Важный фактор изменчивости бактериального генома
Транспозоны – МГЭ, способный перемещаться из одного

сайта в другой как в пределах одной хромосомы, так и внехромосомно вплоть до перемещения в другую клетку
Перемещение транспозонов может приводить к различным мутациям – делециям, дупликациям, инверсиям и т.д.

Хранение

Слайд 27

Виды транспозонов Инсерционные последовательности (IS) – содержат исключительно гены, предназначенные для

Виды транспозонов

Инсерционные последовательности (IS) – содержат исключительно гены, предназначенные для работы

самого транспозона – транспозазы и регуляторных элементов
Сложные транспозоны содержат помимо этих генов еще и, например, гены устойчивости к антибиотикам

Хранение

Слайд 28

Особенности организации генетического материала прокариот Отсутствие ядра Транскрипция и трансляция сопряжены во времени и пространстве Хранение

Особенности организации генетического материала прокариот

Отсутствие ядра
Транскрипция и трансляция сопряжены во времени

и пространстве

Хранение

Слайд 29

Особенности организации генетического материала прокариот Отсутствие процессинга Полицистронные мРНК Отсутствие интронов

Особенности организации генетического материала прокариот

Отсутствие
процессинга
Полицистронные
мРНК
Отсутствие интронов + гаплоидность =

отсутствие накопления «спрятанных» мутаций
Слайд 30

https://youtu.be/plVk4NVIUh8

https://youtu.be/plVk4NVIUh8

Слайд 31

Эволюционный Эксперимент Эксперимент по изучению базовых процессов эволюции, начатый в 1988

Эволюционный Эксперимент

Эксперимент по изучению базовых процессов эволюции, начатый в 1988 году

и продолжающийся до сих пор
Организатор – Ричард Ленски
Слайд 32

Методика эксперимента 12 популяций одного штамма Escherichia coli выращивали на минимальной

Методика эксперимента

12 популяций одного штамма Escherichia coli выращивали на минимальной среде

с глюкозой
Каждый день 100 мкл популяции высевалось на свежую питательную среду
Каждое 500 поколение (75 дней) замораживалось для дальнейших исследований
К настоящему моменту анализируется более, чем 60000 поколений
Слайд 33

Результаты эксперимента За первые 20000 поколений зафиксировались 45 мутаций На удивление

Результаты эксперимента

За первые 20000 поколений зафиксировались 45 мутаций
На удивление большинство мутаций

были полезными, а не нейтральными как ожидалось
Слайд 34

Результаты эксперимента После 26000 поколений произошла мутация в гене, ответственном за

Результаты эксперимента

После 26000 поколений произошла мутация в гене, ответственном за репарацию


Возросло количество мутаций
Возросло количество зафиксированных мутаций (609)
Такая же мутация возникла и в других популяциях и также зафиксировалась
Из «новых» 609 мутаций большинство на сей раз оказались нейтральными
Слайд 35

Результаты эксперимента Популяция А-3, поколение 33127 Помутнение среды Мутанты E. coli

Результаты эксперимента

Популяция А-3, поколение 33127
Помутнение среды
Мутанты E. coli Cit+, способные усваивать

цитрат натрия
Не одиночная мутация

Среда:

Слайд 36

Реализация генетической информации Реализация

Реализация генетической информации

Реализация

Слайд 37

Транскрипция Одна РНК-полимераза (4 субъединицы) Для ее работы требуется сигма-субъединица, основная

Транскрипция

Одна РНК-полимераза (4 субъединицы)
Для ее работы требуется сигма-субъединица, основная функция которой

– узнавание и связывание с промотором, отсоединяется на этапе элонгации
Терминация транскрипции может проходить с участиям ро-фактора, а может с образованием шпильки РНК

Реализация

Слайд 38

Инициация транскрипции -35 п.н. (бокс Гилберта) и -10 п.н. (бокс Смирнова)

Инициация транскрипции

-35 п.н. (бокс Гилберта) и -10 п.н. (бокс Смирнова) от

точки начала транскрипции – промоторная область, с которой связывается σ-фактор
После присоединения 9ого нуклеотида σ-фактор необратимо диссоциирует

Реализация

Слайд 39

Элонгация транскрипции Семнадцатипарный транскрипционный комплекс при элонгации содержит гибрид ДНК и

Элонгация транскрипции

Семнадцатипарный транскрипционный комплекс при элонгации содержит гибрид ДНК и РНК,

содержащий 8 пар оснований — 8-шаговый участок РНК, соединенный с шаблонной цепью ДНК.
По мере выполнения транскрипции рибонуклеотиды добавляются к 3'-концу собираемой РНК, и РНК-полимеразный комплекс движется по цепи ДНК.

Реализация

Слайд 40

Терминация транскрипции Терминация транскрипции у прокариот может происходить с помощью фактора

Терминация транскрипции

Терминация транскрипции у прокариот может происходить с помощью фактора терминации

транскрипции – ρ(ро)-фактора
Либо при образовании шпильки РНК, богатой G-C парами

Реализация

Слайд 41

Слайд 42

Трансляция прокариот Отсутствие процессинга мРНК: сплайсинга, КЭПирования и полиаденилирования мРНК +

Трансляция прокариот

Отсутствие процессинга мРНК: сплайсинга, КЭПирования и полиаденилирования
мРНК + рибосомы +

аминоацил-тРНК (тРНК+АК) + факторы трансляции + ATP
Инициация + элонгация + терминация

Реализация

Слайд 43

Инициация трансляции Реализация

Инициация трансляции

Реализация

Слайд 44

Слайд 45

Терминация трансляции Появление стоп-кодона в A-сайте Фактор терминации трансляции (релизинг фактор)

Терминация трансляции

Появление стоп-кодона в A-сайте
Фактор терминации трансляции (релизинг фактор) входит в

А-сайт
Гидролиз между полипептидов и последней аминоацил-тРНК

Реализация

Слайд 46

Трансляция прокариот https://www.youtube.com/watch?v=KZBljAM6B1s Реализация

Трансляция прокариот

https://www.youtube.com/watch?v=KZBljAM6B1s

Реализация

Слайд 47

Передача генетической информации Бесполое размножение – бинарное деление / почкование Половое

Передача генетической информации

Бесполое размножение – бинарное деление / почкование
Половое размножение –

трансформация, конъюгация и трансдукция

Важно понимать разницу между половым размножением эукариот и «половым размножением» прокариот.
У последних НЕ образуются гаметы, нет их слияния и образования зиготы. Единственное что есть – обмен ДНК в каком-либо процессе

Слайд 48

Трансформация Однонаправленный процесс поглощения ДНК из внешней среды клеткой Осуществляется только

Трансформация

Однонаправленный процесс поглощения ДНК из внешней среды клеткой
Осуществляется

только «компетентными» клетками
Компетентность – свойство клеток поздней лаг-фазы. Осуществляется компетентность выработкой клеткой факторов компетентности самостоятельно либо вызывается искусственно
Слайд 49

Слайд 50

Трансформация плазмидой

Трансформация плазмидой

Слайд 51

Слайд 52

Конъюгация Процесс передачи ДНК от одной клетки к другой при непосредственном

Конъюгация

Процесс передачи ДНК от одной клетки к другой при непосредственном контакте

двух клеток
Процесс однонаправленный – от донора к реципиенту
Передача ДНК осуществляется с помощью половых пилей
Необходима F-плазмида
Слайд 53

Слайд 54

Трансдукция Перенос ДНК посредством вирусов-бактериофагов Процесс также однонаправленный Может быть литической

Трансдукция

Перенос ДНК посредством вирусов-бактериофагов
Процесс также однонаправленный
Может быть литической – после которой

клетка умирает, а может быть лизогенной, когда ДНК вируса встраивается в хромосому бактерии
Лизогенная трансдукция может быть специфической (ДНК фага встраивается в конкретно место на хромосоме) и неспецифическая (в случайное место на хромосоме)
Слайд 55

Слайд 56

Слайд 57

Передача генетической информации

Передача генетической информации

Слайд 58

CRISPR-Cas9 clustered regularly interspaced short palindromic repeats Система адаптивного иммунитета бактерий и архей

CRISPR-Cas9

clustered regularly interspaced short palindromic repeats
Система адаптивного иммунитета бактерий и архей

Слайд 59

Слайд 60

Регуляция экспрессии генов прокариот Housekeeping gene Гены домашнего хозяйства Конститутивные гены

Регуляция экспрессии генов прокариот

Housekeeping gene
Гены домашнего хозяйства
Конститутивные гены
Экспрессируются вне зависимости от

условий существования
Репликация, цитоскелет, транскрипция, трансляция, первичный метаболизм…

Индуцибельные гены
Гены «роскоши»
Экспрессируются в ответ на изменения внешней среды
БТШ, комплексы ферментов, защита от антибиотиков…

Слайд 61

Регуляция работы оперонов Ф.Жакоб и Ж.Моно в 1961 сформировали теорию регуляции

Регуляция работы оперонов

Ф.Жакоб и Ж.Моно в 1961 сформировали теорию регуляции работы

прокариотических генов на примере лактозного оперона у E. coli
Лактозный оперон – индуцибельный оперон, состоит из трех структурных генов:
lacZ  -  β-галактозидаза – фермент, расщепляющий лактозу на глюкозу и галактозу
lacY  - β-галактозидпермеаза – мембранный белок, переносящий лактозу
lacA  -  β-галактозидтрансацетилаза – функция фермента в рамках работы лактозного оперона не ясна
Слайд 62

Лактозный оперон

Лактозный оперон

Слайд 63

Лактозный оперон: есть глюкоза, нет лактозы РНК lacI Транскрипция Трансляция

Лактозный оперон: есть глюкоза, нет лактозы

РНК lacI

Транскрипция

Трансляция

Слайд 64

Лактозный оперон: есть глюкоза, есть лактоза РНК lacI Транскрипция Трансляция Трансляция

Лактозный оперон: есть глюкоза, есть лактоза

РНК lacI

Транскрипция

Трансляция

Трансляция

Слайд 65

Лактозный оперон: нет глюкозы, нет лактозы

Лактозный оперон: нет глюкозы, нет лактозы

Слайд 66

Лактозный оперон: нет глюкозы, есть лактоза Полицистронная РНК Белки lacZ lacY lacA РНК-полимераза

Лактозный оперон: нет глюкозы, есть лактоза

Полицистронная РНК

Белки
lacZ
lacY lacA

РНК-полимераза

Слайд 67

Систематика бактерий и архей Микробиология

Систематика бактерий и архей

Микробиология

Слайд 68

Сложности систематики бактерий Малые размеры Малое количество видимых признаков для систематики

Сложности систематики бактерий

Малые размеры
Малое количество видимых признаков для систематики
Необходимость исследовать биохимию,

физиологию и генетику для описания и систематизации вида
НЕКУЛЬТИВИРУЕМОСТЬ большинства бактерий
Размытость понятия «вид» для бактерий
Слайд 69

Вид Штамм – культура МО, выделенная единовременно из одного источника Клон – совокупность потомков одной клетки

Вид
Штамм – культура МО, выделенная единовременно из одного источника
Клон –

совокупность потомков одной клетки
Слайд 70

Варианты систематики - Система бактерий Берджи Грамотрицательные эубактерии, имеющие клеточные стенки

Варианты систематики - Система бактерий Берджи

Грамотрицательные эубактерии, имеющие клеточные стенки (16

групп)
Грамположительные эубактерии, имеющие клеточные стенки (13 групп)
Эубактерии, лишенные клеточных стенок (микоплазмы)
Архебактерии (5 групп)
Слайд 71

Филогенетическая систематика

Филогенетическая систематика