ПЦР- полимеразная цепная реакция. Молекулярно-генетический метод

Август 9, 2022

Главная
Биология
ПЦР- полимеразная цепная реакция. Молекулярно-генетический метод

Содержание

2. В 1983 году Кэри Мюллис с сотрудниками разработал метод клонирования последовательностей ДНК in vitro, который получил
3. Цель постановки ПЦР В медицине 1.Диагностика вирусных и бактериальных инфекций 2.Диагностика генетических заболеваний 3. Выявление фальсификации
4. Компоненты реакции 1. Матрица – выделяемый из исследуемого материала фрагмент ДНК; 2. ДНК- полимераза (Tag полимераза)
5. 4. Дезоксинуклетидтрифосфаты 5. Буферный раствор для поддержания рН во время постановки ПЦР
6. При ПЦР происходит амплификация (увеличение числа копий) определенных фрагментов молекул ДНК. Амплифицируемый участок называется амплификоном.
7. Виды амплификаторов- приборов для проведения реакции в автоматическом режиме режиме
8. Метод основан на выделении фрагмента ДНК из исследуемого материала и синтезе нуклеиновых кислот путем размножения (амплификации)
9. Реакцию ставят в пробирках. После чего выявляют ДНК возбудителя в исследуемой пробе при помощи электрофореза в
10. Каждый цикл амплификации состоит из трех этапов: 1. Денатурация ДНК (расплетения спиралей)- расхождение цепей ДНК при
11. РЕЖИМЫ АМПЛИФИКАЦИИ ПЦР
12. Для обычной PCR накопленные продукты амплификации выявляют путем электрофореза в геле.
13. Если в исследуемом материале содержится РНК-содержащий вирус, тогда на его молекуле синтезируют комплементарную цепь ДНК при
14. Пример обустройства рабочего места для смешивания ПЦР-смеси:
15. Преимущества ПЦР: 1. Быстрота анализа. Все манипуляции осуществляют за 1-2 рабочих дня при параллельном исследовании 10-12
16. Недостатки ПЦР Выявленная молекула ДНК может принадлежать вакцинному штамму вируса или бактерии. Амплификация не только живого,
18. Скачать презентацию

Слайд 2

В 1983 году Кэри Мюллис с сотрудниками разработал метод клонирования последовательностей

ДНК in vitro, который получил название полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Слайд 3

Цель постановки ПЦР
В медицине
1.Диагностика вирусных и бактериальных инфекций
2.Диагностика генетических заболеваний
3.

Выявление фальсификации продуктов питания
4. Установление родства
В ветеринарии
1.Диагностика вирусных и бактериальных инфекций
домашних и сельскохозяйственных животных;
2.Проведение мониторинга ГМО в сырье и пищевых продуктах;
3. Выявление фальсификации кормов для животных ;

Слайд 4

Компоненты реакции
1. Матрица – выделяемый из исследуемого материала фрагмент

ДНК;
2. ДНК- полимераза (Tag полимераза) – термостабильный фермент благодаря которому происходит копирование и синтез комплементарной цепи ДНК.
3.Праймеры (затравки) - отрезки одноцепочечной ДНК (олигонуклеотиды), используемые для репликации матричной цепи.
Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец копируемого участка.

Слайд 5

4. Дезоксинуклетидтрифосфаты
5. Буферный раствор для поддержания рН во время постановки ПЦР

Слайд 6

При ПЦР происходит амплификация (увеличение числа копий) определенных фрагментов молекул

ДНК.
Амплифицируемый участок называется амплификоном.

Слайд 7

Виды амплификаторов- приборов для проведения реакции в автоматическом режиме режиме

Слайд 8

Метод основан на выделении фрагмента ДНК из исследуемого материала и

синтезе нуклеиновых кислот путем размножения (амплификации) участков генов вирусов или бактерий, увеличивая их количество в миллионы раз при помощи термостабильного фермента ДНК-полимеразы.

Слайд 9

Реакцию ставят в пробирках. После чего выявляют ДНК возбудителя в

исследуемой пробе при помощи электрофореза в агаровом геле.
Продолжительность реакции определяется числом циклов, необходимых для синтеза ДНК.

Слайд 10

Каждый цикл амплификации состоит из трех этапов:
1. Денатурация ДНК (расплетения спиралей)-

расхождение цепей ДНК при нагревании
2. Присоединение праймеров (20 нуклеиновых пар);
3. Достраивание цепей ДНК;

Слайд 11

РЕЖИМЫ АМПЛИФИКАЦИИ ПЦР

Слайд 12

Для обычной PCR накопленные продукты амплификации выявляют путем электрофореза в геле.

Слайд 13

Если в исследуемом материале содержится РНК-содержащий вирус, тогда на его молекуле

синтезируют комплементарную цепь ДНК при помощи специфических праймеров (РНК-зависимой ДНК полимеразы).

Слайд 14

Пример обустройства рабочего места для смешивания ПЦР-смеси:

Слайд 15

Преимущества ПЦР:
1. Быстрота анализа. Все манипуляции осуществляют за 1-2 рабочих дня

при параллельном исследовании 10-12 проб.
2. Высокая чувствительность.
3. Специфичность.
4. Для ПЦР пригоден любой материал и даже гистопрепараты.

Слайд 16

Недостатки ПЦР
Выявленная молекула ДНК может принадлежать вакцинному штамму вируса или бактерии.
Амплификация

не только живого, но и погибшего микроорганизма;
Различия при использовании разных тест-систем;