Определение онкомаркеров методом ИФА

Проблема онкологических заболеваний в России

А.Д. Каприн, В.В. Старинский, Г.В. Петрова, 2018г.

Прогноз увеличения онкологических заболеваний в мире

Согласно последнему отчету Всемирной организации здравоохранения,
к

Злокачественными опухолями в 2000 году в мире заболели 10 млн человек,

Структура заболеваемости злокачественными новообразованиями женщин России, 2016г.

А.Д. Каприн, В.В. Старинский, Г.В. Петрова. Москва

Структура заболеваемости злокачественными новообразованиями мужчин России в 2016 г.

А.Д. Каприн, В.В. Старинский, Г.В.

Статистические данные, РФ 2016 г

Выявлено 599 348 случаев в 2016г.

Контингент больных со злокачественными новообразованиями в РФ, 2016

West Midlands, UK, 1985-2002.

Относительная 10-летняя выживаемость больных раком молочной железы в

Проблема диагностики онкозаболеваний в РФ 2016 г

Каждый 4-ый онкобольной в РФ умирает

Необходимо:

Постановка диагноза на максимально ранней стадии
Адекватная оценка эффективности проводимого лечения
Раннее выявление

Отличия опухолевых клеток от нормальных

Аутопролиферативный сигнал
Нечувствительность к супрессорам пролиферации
Иммортализация (бессмертие)
Бесконечное деление
Инвазия

Базальная мембрана

Кровеносный сосуд

Выход антигенов
в кровоток

Раковые антигены

Нормальная ткань Раковая опухоль

Опухолевая клетка

Потеря регуляции роста

Быстрое клеточное деление

Дифференциация

Повышение концентрации нормальных молекул
(ферменты, белки

Опухолевые маркеры представляют собой макромолекулы, наличие и концентрация которых в крови

Специфичность ОМ – процентное выражение частоты истинно-отрицательных результатов теста в группе

«Идеальный маркер»

100% специфичности – определяется только при злокачественных заболеваниях, отсутствует у

Идеальный серологический маркер

100% 100%
Чувствительность cut off Специфичность

Пациенты здоровые и со

Реальный серологический маркер

74% 78%
Чувствительность Сut off Специфичность

Ложно-
Отрицательные

Ложно- Уровень маркера
положительные

Классы маркеров опухолевого роста

ассоциированные с опухолью антигены
или антитела к

Комплексы ОМ

Один хорошо, а два лучше !

Опухоли ЖКТ колоректальный рак (КРР) Одно из самых распространенных онкологических заболеваний.

Показания для определение

Основные ОМ для КРР

Раково-эмбриональный антиген РЭА
Сиалированный антиген Льюиса СА19-9
Опухолевый антиген 242

РЭА раково-эмбриональный антиген

Впервые описан Gold и Freedman как потенциальный опухолевый маркер в

матка
яичники

РЭА может быть повышен при ряде соматической патологии

Цирроз печени и

СА-19-9 сиалированный Lewis A антиген

Открыт Koprowski H, в 1979 году.
Антиген муцина (500-1000

СА 19-9 злокачественные заболевания

Рак поджелудочной железы
Рак желчного пузыря
Рак желудка

СА 19-9 Показания к назначению анализа

Прогноз и мониторинг течения карциномы

2. Диагностика и оценка эффективности лечения рака желчного пузыря, желчевыводящих путей,

СА 19-9 доброкачественные заболевания

поджелудочной железы,
желудка,
печени,
желчевыводящих протоков,
бронхов
эндометрия,
слюнных желез.

≈10

АФП альфа-фетопротеин

Открыт Г.И. Абелевым в 1963 году
Гликопротеин, 4,5% углеводных

Злокачественные процессы, ↑АФП:

первичный рак печени у 72 % больных -

- острый вирусный гепатит - хронический гепатит - ХПН - цирроз печени

Доброкачественные процессы, при

Клиническое применение АФП: заболевания печени

Россия 2016г
Новых случаев 8320
Умерших 9809

Клиническое применение АФП: герминогенные опухоли

ХГЧобщий и β-ХГЧ Хорионический гонадотропин человека

Гликопротеин.
Мол. масса 40 кДа.
Период полужизни 5

ХГЧобщий, св.β-ХГЧ

Используется как высокоинформативный ОМ:
для ранней диагностики опухолей трофобласта

ХГЧ

Повышенные концентрации ХГЧ могут определяться при:
опухолях легких (14 % случаев),

ТБГ (трофобластический β-1 гликопротеин)

Используется :
для ранней диагностики опухолей трофобласта (пузырный занос,

Рак молочной железы

Россия, 2016г
Новых случаев 69095
Умерших 22451

Опухолевые маркеры для РМЖ

Представители класса муциноподобных антигенов
СА15-3
МСА
СА549
СА27-29
BRMA
Раково-эмбриональный
антиген РЭА
Цитокератины Cyfra21.1 –

Серологический маркер
рака молочной железы

СА 15-3

антигенный эпитоп мембранного муциноподобного

Из-за недостаточной чувствительности СА15-3 не применим для скрининга в бессимптомной популяции.
СА15-3,

Уровень СА15-3 может быть повышен

доброкачественные заболевания молочной железы,
доброкачественные заболевания

Комплекс СА15-3/РЭА

Наилучшим образом осуществляется мониторинг течения и эффективности терапии диагностиро-ванной карциномы

Тактика ведения пациентов на примере РМЖ, комплекс СА15-3/РЭА

Постановка диагноза

Проведение лечения

Мониторинг течения

Значимость ОМ в диагностике Мts РМЖ

Stieber Р., Nagel D., Blankenburg I.

CA 15-3

РЭА

CA15-3+РЭА

CA 15-3

РЭА

30 Ед/мл

60 Ед/мл

4 нг/мл

6 нг/мл

30 Ед/мл + 4 нг/мл

60

Россия, 2016г
Новых случаев 60467
Умерших 51476

Рак легкого чувствительность

Маркеры МКРЛ ProGRP 76,6%

НСЕ нейронспецифическая енолаза

Гликолитический фермент, присутствующий в нейронах, нейроэндокринных клетках, эритроцитах и тромбоцитах.
Нормальные

опухолях нейроэктодермального происхождения;
опухолях нейроэндокринного происхождения;
Количественное определение НСЕ в сыворотке важно для

Ежегодно в мире диагностируется около 120 тыс.
В 2016 году в

Факторы риска РЩЖ

Возраст: 2/3 случаев диагностируют в 20-55 лет
Пол: преимущественно женщины

Гистологические варианты РЩЖ

Тиреоглобулин в коллоиде

Норма от 0 до 30-50 нг/мл.

Тироциты фолликула ЩЖ

Рак щитовидной

Концентрация ТГ отражает:

Размер и функциональную активность железы
1 г здоровой ЩЖ

Повышение концентрации ТГ:
- диффузном  токсическом зобе;
- подостром и аутоиммунном

Тиреоглобулин ↑

↑ 2-3 недель после пункционной биопсии
↑ 1 - 2 месяцев

Одна из главных причин смертей от онкопатологии у мужчин.
Ежегодно в мире

Рак предстательной железы в России

в 2016г в РФ зарегистрировано 38371 новых

Рак предстательной железы

Чаще встречается у мужчин старше 50 лет.
Ранняя диагностика и

Классические методы обнаружения – ректальное пальцевое исследование в сочетании с трансректальным

ПСА
простатспецифический антиген

Гликопротеин – протеолитический фермент семейства
каликреиновых протеаз.
Молекулярный

ПСА

Норма ПСА < 4,0 нг/мл

Незначительное ↑ ПСА:
ДГПЖ,
воспаление,
ишемия или инфаркт

Уровень ПСА < 4,0 нг/мл, вероятность злокачественных новообразований – 2%
Уровень ПСА

Диагностика РПЖ Инетрпритация результатов

ПСА = 2,5 - 10 нг/мл – «серая зона»
Рекомендовано

Важным критерием является скорость увеличения концентрации ПСА. Если за 1 год

Скорость удвоения ПСА - < 6 месяцев –
диссеминация процесса

Преимущества теста

Диагностика на основании определения концентрации ПСА позволяет выявлять РПЖ на

Использование ПСА для оценки эффективности терапии после радикальной простатэктомии

Уровень ПСА после

Свободная фракция ПСА в дифференциальной диагностике

Определение свободной фракции ПСА целесообразно

Молекулярные формы ПСА

2проПСА

ДПСА

инПСА

Пушкарь Д.Ю. и др., Москва 2014г.

Ближайшие перспективы лабораторной диагностики РПЖ Индекс здоровья простаты, PHI

PHI = (-2проПСА/свПСА) ˣ

в 2013г в РФ зарегистрировано 12595 новых случаев
и

Рак яичников

Очевидная связь между ранней диагностикой и выживаемостью:
- Стадия I :

Трудности определения распространенности злокачественного процесса

Определить грань, когда РЯ приобретает системный характер

Морфологическая классификация опухолей яичника

1. Эпителиальные 80-90% случаев
Серозные
Муцинозные
Эндометриоидные
Мезонефроидные

Рак яичников

СА-125 опухолеассоциированный антиген

идентифицирован в 1981 г. Р. Бастом
это высокомолекулярный гликопротеин, 200 кДа.
Период

СА-125

Содержание ОМ повышается при ряде новообразований, таких как:
рак яичников;
рак матки;
рак эндометрия;
рак

СА-125 Доброкачественные заболевания

уровень СА-125 может быть повышен при:
эндометриозе,
остром или

Повышение уровня СА-125 при эпителиальном раке яичников.
Коррелирует с массой

Сложности при ранней диагностике или скрининге рака яичников

Метод должен выявлять опухоль

CA-125 может быть повышен уже на доклинической бессимптомной стадии заболевания:
в

СА-125 Наблюдение после операции:

Радикально выполненная операция → нормализация концен-трации СА-125. Рекомендовано снижение

СА-125 Прогнозирование

Персистирующий повышенный уровень маркера является фактором плохого прогноза.
У пациенток,

Оценка риска РЯ

RMI (Risk of malignancy index) индекс риска РЯ

Интерпретация результата

RMI = A ˣ B ˣ C

≥ 190 – высокий

HE4 - маркер для оценки риска РЯ у женщин с опухолевыми образованиями

Наибольшие трудности применения СА-125 относятся к
- ранним стадиям РЯ
-

Комбинированное использование онкомаркеров HE4 и CA 125

Чувствительность в дифференциальной диагностике доброкачественных

НЕ4 + СА125 Диагностика рецидива РЯ

Алентов И.И. и др., 2014г.

Пример динамического наблюдения за концентрациями ОМ у пациентки М., 56 лет,

Комбинация СА125 и HE4 позволяет:
Сформировать группу пациенток с высоким риском РЯ,

ROMA (Risk of Ovarian Malignancy Algorithm)

В современной диагностике рака яичников широко

http://www.vector-best.ru/prod/roma.php

Общие рекомендации при исследовании уровня опухолевых маркеров

Опухолевые маркеры Применение

Скрининг
Диагностика, диф. диагностика и определение локализации опухоли
Стадирование
Прогноз.

Скрининг
В большинстве случаев опухолевые маркеры не применимы для скрининга в

Стадирование
Большая часть ОМ отражает размер опухоли и может быть использована для

Оценка эффективности терапии и мониторинг течения заболевания
Это наиболее важные показания

Современное понимание течения злокачественного процесса в организме (из учения об индивидуальной медицине)

Нет

Сбор анамнеза
Физикальное обследование
Инструментальные методы

Исследование содержания уровня
опухолевых маркеров максимально
эффективно в

В настоящее время нет онкомаркеров со 100% чувствительностью и специфичностью!
НО
Если
выявлен повышенный

⇑ ПСА – при инфекции мочевыводящих путей;
⇑ CA-125 –менструация, травма живота;
⇑

Оценка уровня ОМ при диагностированном злокачественном новообразовании:
Соблюдение интервалов
Ведение графика изменения
концентрации

Структура и специфичность онкоантигенов

Моноклональные антитела используемые в ИФА разных фирм выявляют

операция ↓

Концентрация маркера

Динамика изменений концентрации маркера

начало лечения
↓

Динамика изменений концентрации маркера

Критический уровень
Норма

Динамика изменений концентрации маркера

Необходимая частота тестирования:

До терапии: комплекс имеющихся информативных ОМ; отмечают маркеры, уровень

Таким образом, определение содержания ОМ В комплексе с другими диагностическими методами

Возможные ошибки иммуноанализа

"Хук эффект" высоких концентраций
Эффект интерференции антител в ИФА

Гетерофильные антитела;

"Хук эффект" высоких концентраций

Образец с очень высокой концентрацией аналита, в котором

Механизм "Хук эффекта" высоких концентраций

Проявление

Механизм

АТ к антигену Антиген конъюгат АТ* сэндвич

Гетерофильные антитела

Антитела в сыворотке крови наработанные в течении жизни человека при

Возможные источники гетерофильных антител

Введение моноклональных антител мыши в терапевтических целях или

В этом случае регистрируются помехи, вызванные гетерофильными антителами ( )

Что происходит

Наборы для определения концентрации ОМ методом ИФА производства АО «Вектор-БЕСТ»

«РЭА-ИФА-БЕСТ»
«ПСАобщий-ИФА-БЕСТ» (вариант