Специфические факторы защиты человек.а Практическое занятие № 14. Проведение иммунодиагностики

к ней устойчивый интерес.
Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях, нести за них ответственность.
Осуществлять поиск, и использование информации, необходимой для эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и личностного развития.
Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.
Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение квалификации.
Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, потребителями.
Брать на себя ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения задания.
Бережно относиться к историческому наследию и культурным традициям народа, уважать социальные, культурные и религиозные различия.
Быть готовым брать на себя нравственные обязательства по отношению к природе, обществу и человеку.
Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
Вести здоровый образ жизни, заниматься физической культурой и спортом для укрепления здоровья, достижения жизненных и профессиональных целей.

Практическое занятие № 14
Проведение иммунодиагностики

фаз: специфической, при которой происходит связывание АГ с АТ, с неспецифической, проявляющейся видимым результатом. По способу регистрации реакции №АГ – АТ» подразделяют на реакции, связанные с образованием макромолекулярного иммунного комплекса (агглютинации, преципитации), реакции лизиса – с участием комплемента и реакции с использованием меченых реагентов: реакцию иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ, иммуноблоттинг.

с АТ в физиологическом растворе. При агглютинации происходит склеивание частиц АТ с образованием хлопьевидного осадка.

Практическое занятие № 14
Проведение иммунодиагностики

антигенный или антигенный эритроцитарный диагностикум (эритроциты с адсорированными на их поверхности АТ или аГ). Эритроциты в этой реакции выполняют роль пассивных носителей.
Оценка результатов РПгА проводится следующим образом:
- при положительной реакции пассивно склеенные эритроциты покрывают дно U – или V- образной лунки ровным слоем с фестончатыми краями («зонтик»);
- при отрицательной реакции (отсутствии агглютинации) эритроциты скапливаются в центральном углублении лунки, образуя компактную «пуговку» с резко очерченными краями.

Практическое занятие № 14
Проведение иммунодиагностики

вирусных инфекций. Некоторые вирусы содержат на своей поверхности белок гемагглютинин, склеивающий эритроциты. Добавление специфических противовирусных АТ блокирует вирусный гемагглютинин – гемагглютинация отсутствует.
Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), или реакцию Кумбса, применяют для определения неполных АТ. добавление антиглобулиновой сыворотки (АТ против Ig человека) усиливает результаты реакции. РНГА применяют при определении резус – фактора.

АТ в физиологическом растворе. При преципитации происходит образование макромолекулярного иммунного комплекса, что проявляется переходом прозрачного коллоидного раствора в непрозрачную суспензию, или преципитат. Количество обоих реагентов должно быть в строго определенных соотношениях, так как избыток одного из них снижает результат. Существует различные способы постановки реакции преципитации.

Практическое занятие № 14
Проведение иммунодиагностики

малым диаметром. В пробирку вносят иммунную сыворотку и осторожно наслаивают растворимый АГ. АГ и АТ смешиваются за счет теплового движения молекул, и они взаимодействуют. При положительном результате на границе двух растворов образуется кольцо непрозрачного преципитата.
Реакцию двойной иммунодиффузии по Оухтерлони проводят в агаровом геле, в лунки которого вносят по схеме либо раствор АГ, либо раствор АТ. АГ и АТ диффундируют в гель навстречу друг другу и при положительном результате реакции образуют иммунные комплексы, видимые как линии преципитации.
Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини отличается от варианта реакции по Оухтерлони тем, что АТ добавляют в агаровый гель, а в лунки – раствор АГ. Последний диффундирует в агаровый гель, и при положительном результате образуется иммунный комплекс в виде кольца преципитации вокруг лунки. Диаметр кольца соответствует определенной концентрации разных классов Ig в сыворотке крови.

преципитации, которую используют для определения количества анатоксина. Расчет ведется в единицах начальной флокуляции по максимальной концентрации исследуемого вещества, дающей положительный результат (помутнение).
Реакции лизиса
Реакции лизиса основаны на способности комплемента вызывать цитолиз по классическому пути. Пример – реакция связывания комплемента (РСК). Реакцию проводят в два этапа. на первом этапе АТ взаимодействуют с АГ и комплементом, на втором этапе добавляют индикатор – гемолитическую систему (смесь эритроцитов и антиэритроцитарной сыворотки). При положительном результате на первом этапе АТ образуют с АГ иммунный комплекс, связывающий комплемент реакционной смеси. В этом случае эритроциты гемолитической системы, добавленные на втором этапе, не разрушаются. В противном случае несвязанный комплемент вызывает лизис индикаторных эритроцитов.
Реакция биологической нейтрализации основана на способности АТ блокировать повреждающее действие микроорганизмов или токсинов. Если АТ связываются с микроорганизмов или токсином и нейтрализуют его действие, живые тест – объекты (животные, эмбрионы птиц, культуры клеток) не погибают.

реакцию иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, радиоиммуный анализ, иммуноблоттинг.
- Реакция иммунофлюресценции (РИФ) (метод Кунса) основана на использовании аТ, меченых флюорохромами – веществами, светящимися в уФ. Результаты оценивают с помощью люминисцентного микроскопа. Метод позволяет как бактериальные АГ, так и АТ и применяется для экспресс – диагностики. Различают прямой и непрямой методы РИФ. При прямом методе неизвестный АГ (микроорганизмы, клетки) напрямую взаимодействует с мечеными АТ. В случае положительного результата наблюдется свечение аГ. Непрямой метод РИФ проводят в два этапа. На первом этапе известный АГ взаимодействует с искомыми АТ, на втором – образовавшиеся иммуноглобулиновой сыворотки. Результаты оценивают, как и в случае прямого варианта.
- Иммуноферментный анализ (ИФВ) – наиболее распространенный современный метод, используемый в микобиологической и иммунологической диагностике. Модификаций ИФА существует очень много, но широко используется его твердофазный неконкурентный вариант. В реакции используют специфические АТ, меченные ферментом. Проявляют реакцию, добавляя субстрат для фермента, а затем – краситель – хромоген. При положительной реакции наблюдается изменение цвета реакционной смеси.
- Радиоиммунологический анализ (РИФ) основан на использовании меченных радиоактивными изотопами аГ или АТ. Результат оцнивают по уровню радиоактивности образовавшихся иммунных комплексов.
- Иммуноблоттинг основан на сочетании электрофореза и ИфА (или РИФ, РИА). Проводят разделение смеси АГ в электрофорезе, которые затем проявляют АТ, меченными ферментами, изотопами, флюорохромами.
Иммунодиагностика – совокупность методов диагностики, направленных на выявление специфической сенсибилизации (аллергии) к микобактерии туберкулеза (МБТ). Профилактика туберкулеза: прописан порядок организации раннего выявления туберкулеза у детей. Иммунодиагностика туберкулеза органов дыхания.

Практическое занятие № 14
Проведение иммунодиагностики