Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине.

Слайд 2

Гибридомная технология. Методика получения лимфоидных гибридом, позволяющая получать моноклональные антитела практически

Гибридомная технология.

Методика получения лимфоидных гибридом, позволяющая получать моноклональные антитела практически на

любой антиген в необходимых количествах.
Технология лимфоидных гибридом была разработана в 1975 году Мильштейном и Келлером
1984 году Келлер и Мильштейн были удостоены Нобелевской премии.
Слайд 3

Гибридомная технология строилась на основе следующих разработок: 1) имелись линии миеломных

Гибридомная технология строилась на основе следующих разработок:
1) имелись линии миеломных

клеток мышей balb/c (дефектные по некоторым ферментам метаболизма нуклеиновых кислот)
2) Линии этих раковых клеток-носителей, имели дефект гена кодирующий одтн из ферментов (тимидинкиназе (ТК) или гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазе (ГГФРТ))
3) Технология слияния клеток с помощью вирусов (вирус Сендай) и полиэтиленгликоля

Гибридомная технология.

Слайд 4

Гибридомная технология.

Гибридомная технология.

Слайд 5

Гибридомная технология.

Гибридомная технология.

Слайд 6

Collect RNA Convert RNA to DNA PCR amplify antibody genes Heavy

Collect RNA

Convert RNA to DNA

PCR amplify antibody genes

Heavy Chain
Genes

Light

Chain
genes

Натуральные
библиотеки антител
- наивные библиотеки
(naïve library)
- иммунные библиотеки
(immune library)

Конструирование комбинаторной библиотеки

Фаговый дисплей.

Слайд 7

Фаговый дисплей Линкер Ser(Gly4Ser)2AlaArgGlySerGly4Ser Конструирование комбинаторных библиотек

Фаговый дисплей

Линкер
Ser(Gly4Ser)2AlaArgGlySerGly4Ser

Конструирование комбинаторных библиотек

Слайд 8

Фаговый дисплей. Фаг M13

Фаговый дисплей.

Фаг M13

Слайд 9

Фаговый дисплей Получение индивидуальных одноцепочечных антител Vh Vl pIII TAG Vh

Фаговый дисплей

Получение индивидуальных одноцепочечных антител

Vh Vl pIII

TAG

Vh

Vl

Несупрессорные штаммы E.coli:

TAG

Gln

Одноцепочечное антитело

ковалентно связано с белком рIII фаговой частицы

amber

Vh Vl pIII

аминокислота

стоп-кодон

C-myc

6×His

C-myc

6×His

Слайд 10

Фаговый дисплей

Фаговый дисплей

Слайд 11

Фаговый дисплей Следующий раунд Элюция V V V V V V

Фаговый дисплей

Следующий
раунд

Элюция

V V V V V

V V V V V

Аффинная

селекция (биопеннинг)

Амплификация
в E.coli

антиген

антиген