Молекулярный фишинг на чипе оптического биосенсора

Август 11, 2022

Главная
Биология
Молекулярный фишинг на чипе оптического биосенсора

Содержание

2. Оптический биосенсор Оптический биосенсор, основанный на эффекте поверхностного плазмонного резонанса (SPR), используется для количественных измерений ББВ.
3. Принцип работы оптического биосенсора на эффекте SPR
5. Анализ серии сенсограмм, полученных при разных концентрациях аналита: равновесные характеристики межмолекулярных взаимодействий — константу диссоциации комплекса
6. Принципы иммобилизации лигандов на поверхности оптических чипов ковалентная нековалентная иммобилизации иммобилизация лигандов лигандов
7. Принцип нековалентной иммобилизации На поверхности оптического чипа ковалентно закрепляется специфический аффинный реагент, на который нековалентно иммобилизируется
8. Оптический биосенсор не осуществляет идентификацию выделенных белков, поэтому он используется совместно с масс-спектрометрической идентификацией. Идентификация белковых
9. Методы, используемые в современных протеомных исследованиях, основаны на трех технологических платформах: Использование двумерного электрофореза в комбинации
10. Двумерный электрофорез метод разделения, основанный на последовательном использовании двух свойств белков: заряда и массы. Для визуализации
11. Одномерный электрофорез Белки, разделенные методом одномерного электрофореза, также подвергают триптическому гидролизу в геле. Затем экстрагированные пептиды
13. Скачать презентацию

Слайд 2

Оптический биосенсор
Оптический биосенсор, основанный на эффекте поверхностного плазмонного резонанса (SPR), используется

для количественных измерений ББВ.
SPR позволяет регистрировать ББВ в реальном времени в виде сенсограмм .

Слайд 3

Принцип работы оптического биосенсора на эффекте SPR

Слайд 4

Слайд 5

Анализ серии сенсограмм, полученных при разных концентрациях аналита:
равновесные характеристики межмолекулярных взаимодействий

— константу диссоциации комплекса и аффинность
кинетические параметры — константы скоростей образования и распада белковых комплексов
Анализ серии сенсограмм, полученных при разных температурах:
термодинамические характеристики — изменение свободной энергии Гиббса (ΔG), изменение энтальпии (ΔH) и энтропии (ΔS)

Слайд 6

Принципы иммобилизации лигандов на поверхности оптических чипов
ковалентная нековалентная
иммобилизации иммобилизация
лигандов лигандов

Слайд 7

Принцип нековалентной иммобилизации
На поверхности оптического чипа ковалентно закрепляется специфический аффинный реагент,

на который нековалентно иммобилизируется лиганд (рис. б). В качестве такой аффинной связки могут выступать специфические моно- или поликлональные антитела, стрептавидин .
Распространен метод иммобилизации белков лигандов, содержащих так называемый гистаг (метку в виде последовательности из 6 гистидинов, 6×His). Белки иммобилизуются на оптическом чипе, поверхность которого модифицирована соединением NTA (нитрилотриацетат), за счет образования трех хелатных комплексов, состоящих из двух остатков гистидина, одного иона никеля (Ni2+) и одной молекулы NTA (рис. в)

Слайд 8

Оптический биосенсор не осуществляет идентификацию выделенных белков, поэтому он используется совместно

с масс-спектрометрической идентификацией.
Идентификация белковых последовательностей при помощи комбинации высокопроизводительных методов разделения белков и их масс-спектрометрического анализа является ключевым этапом протеомного анализа.

Слайд 9

Методы, используемые в современных протеомных исследованиях, основаны на трех технологических платформах:

Использование двумерного электрофореза в комбинации с идентификацией белков методом MALDI-TOF масс-спектрометрии.
Использование одномерного электрофореза в полиакриламидном геле в комбинации с обращенно-фазовой жидкостной хроматографией, совмещенной с тандемной масс-спектрометрической детекцией.
Использование безгелевой технологии MudPit при помощи многомерного хроматографического разделения белков с последующим масс-спектрометрическим анализом

Слайд 10

Двумерный электрофорез
метод разделения, основанный на последовательном использовании двух свойств белков: заряда

и массы.
Для визуализации белковых молекул используют различные методы их окрашивания - методы серебрения, окраски Кумасси голубым и флуоресцентные красители.
Для изучения белковых комплексов используется нативный (неденатурирующий) 2DE или голубой нативный 2DE.
Для осуществления идентификации представленные на электрофореграмме в виде пятен белки вырезают, и затем проводят ферментативное расщепление белка в пятне с использованием трипсина.
Полученный гидролизат анализируют при помощи массспектрометрии.
Идентификация белков по полученным масс-спектрам пептидных фрагментов проводится с использованием баз данных белковых и нуклеотидных последовательностей.

Слайд 11

Одномерный электрофорез
Белки, разделенные методом одномерного электрофореза, также подвергают триптическому гидролизу

в геле.
Затем экстрагированные пептиды анализируют с использованием масс-спектрометрических подходов.

Молекулярный фишинг на чипе оптического биосенсора

Содержание

Оптический биосенсорОптический биосенсор, основанный на эффекте поверхностного плазмонного резонанса (SPR), используется

Принцип работы оптического биосенсора на эффекте SPR

Анализ серии сенсограмм, полученных при разных концентрациях аналита:равновесные характеристики межмолекулярных взаимодействий

Принципы иммобилизации лигандов на поверхности оптических чиповковалентная нековалентнаяиммобилизации иммобилизациялигандов лигандов

Принцип нековалентной иммобилизацииНа поверхности оптического чипа ковалентно закрепляется специфический аффинный реагент,