Фотометрия. Клинический спектрофотометр

Сентябрь 15, 2022

Главная
Физика
Фотометрия. Клинический спектрофотометр

Содержание

3. Оптическая схема нефелометра 1 – лампа, 2,11 – светофильтры; 3 – стеклянная пластинка, разделяющая свет на
4. Схема пламенного фотометра 1 – цилиндры с топливом и воздухом; 2 – клапаны регуляции давления и
15. КЛИНИЧЕСКИЙ СПЕКТРОФОТОМЕТР
16. Спектрофотометр без монохроматора
17. Кормей-мульти – программируемый фотометр с проточной кюветой
18. 340 длина волны 250 Спектры поглощения НАД+ и НАД⋅Н А
19. Сопряженные реакции Аланин + α-КГ → Пируват + Глутамат Пируват + НАДН → Лактат + НАД
20. Фотометрические методы анализа
21. ИЗМЕРЕНИЕ ПО КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ
22. Методы сравнения стандартного и опытного образца Анализируемая и стандартная проба обрабатываются в одинаковых условиях При больших
23. Методы определения без использования калибратора Фотометрические единицы (в случае отсутствия калибратора – средние молекулы, серомукоид) –
24. Методы определения без использования калибратора Определение концентрации по молярному показателю поглощения – применение закона Бургера С
25. Спектральные характеристики хромогенов
26. Примеры: Определение концентрации НАДН на основе определения оптической плотности Молярный показатель НАДН при 340 нм 6,22х10
28. Измерение по конечной точке
29. 1-точечное измерение. Сигнал развивается как функция времени для стандартов Исходная точка - нуль. Концентрация каждого стандарта
30. Измерение по кинетике А - скорость постоянна, в любой период можно по скорости реакции оценивать активность
31. Кинетическое измерение требует обеспечения наряду с фотометрическим адекватным обеспечением, также точного поддержания температуры в измерительной кювете
32. Волоконный световод минимизирует оптическую схему
33. Спектр поглощения производных гемоглобина спектры поглощения производных гемоглобина: 1 – дезоксигемоглобина (HbH); 2 – карбоксигемоглобина (HbCO)
34. Основные элементы биохимического анализатора
36. Скачать презентацию

Слайд 2

Слайд 3

Оптическая схема нефелометра
1 – лампа, 2,11 – светофильтры; 3 – стеклянная

пластинка, разделяющая свет на 2 пучка; 4 – кювета с исследуемым раствором; 5 – ловушка света; 7, 8, 9 – линзы; 8 – уравнительные диафрагмы; 10 – ромбические призмы; 12 - окуляр

Слайд 4

Схема пламенного фотометра
1 – цилиндры с топливом и воздухом; 2 –

клапаны регуляции давления и устройства для измерения расхода газов; распылительная камера; 6 – устройство для осушения распылительной камеры, 7 – фокусирующая линза; входная щель монохроматора; 9 – призма, разделяющая свет по длине волны; 10 – выходая щель монохроматора; 11 - фотодетектор

Слайд 5

Слайд 6

Слайд 7

Слайд 8

Слайд 9

Слайд 10

Слайд 11

Слайд 12

Слайд 13

Слайд 14

Слайд 15

КЛИНИЧЕСКИЙ СПЕКТРОФОТОМЕТР

Слайд 16

Спектрофотометр без монохроматора

Слайд 17

Кормей-мульти – программируемый фотометр с проточной кюветой

Слайд 18

340
длина волны
250
Спектры поглощения НАД+ и НАД⋅Н
А

Слайд 19

Сопряженные реакции
Аланин + α-КГ → Пируват + Глутамат
Пируват + НАДН →

Лактат + НАД

ЛДГ

АЛТ

КК

КФ + АДФ → Креатин + АТФ
АТФ + глюкоза → АДФ + Гл-6-Ф
Гл-6-Ф + НАДН → 6-ФГ + НАД

гексокиназа

КК

Гл-6-ФДГ

Слайд 20

Фотометрические методы анализа

Слайд 21

ИЗМЕРЕНИЕ ПО КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ

Слайд 22

Методы сравнения стандартного и опытного образца
Анализируемая и стандартная проба обрабатываются в

одинаковых условиях
При больших сериях – стандартную пробу исследовать в начале серии и через каждые 20 проб
Расчет ведут по ствндарту или по фактору
Расчет по стандарту: Сi = Di х Cст/Dст
Расчет по фактору: С = D х F

Слайд 23

Методы определения без использования калибратора
Фотометрические единицы (в случае отсутствия калибратора –

средние молекулы, серомукоид) – оптическую плотность умножают на 100
(D = 0,3, ответ – 30 единиц)

Слайд 24

Методы определения без использования калибратора
Определение концентрации по молярному показателю поглощения –

применение закона Бургера
С = D/lхξ (концентрация определяется делением измеренной оптической плотности на известный для данного вещества молярный показатель поглощения при длине волны измерения: С = D/ξ)
Учитывать разведение образца

Слайд 25

Спектральные характеристики хромогенов

Слайд 26

Примеры:
Определение концентрации НАДН на основе определения оптической плотности
Молярный показатель НАДН при

340 нм 6,22х10 3 лхмоль -1см-1. (ввести верхний символ). Измерена оптическая плотность в 1 см кювете – 0,38
Концентрация НАДН определяется по соотношению

Определение содержания гемоглобина гемоглобинцианидным методом
Милимолярный коэффициент при 540 нм = 11
Молекулярная масса гемоглобина – 64458, состоит из 4 суъединицю Эквивалентный вес Hb = 16114, т.е. 1 моль соответствует 16,114 Hb в крови
Кровь разводят трансформирующим раствором 1:251 (0,02 мл крови + 5,0 мл трансформирующего раствора)

Слайд 27

Слайд 28

Измерение по конечной точке

Слайд 29

1-точечное измерение. Сигнал развивается как функция времени для стандартов Исходная точка

- нуль. Концентрация каждого стандарта измеряется 1 раз по конечной точке (по достижении стационарного уровня)

Слайд 30

Измерение по кинетике
А - скорость постоянна, в любой период можно

по скорости реакции оценивать активность фермента, Б - скорость реакции постоянно снижается, рекомендуется активность фермента оценивать по начальной скорости, В - линейный участок, на котором рекомендуется определять активность фермента, устанавливается в середине периода инкубации

Слайд 31

Кинетическое измерение требует обеспечения наряду с фотометрическим адекватным обеспечением, также точного

поддержания температуры в измерительной кювете и правильного отсчета временных интервалов. Так, общепринятым считается поддержание температуры в измерительной ячейке в пределах ± 0,1 оС

Слайд 32

Волоконный световод минимизирует оптическую схему

Слайд 33

Спектр поглощения производных гемоглобина
спектры поглощения производных гемоглобина: 1 – дезоксигемоглобина

(HbH); 2 – карбоксигемоглобина (HbCO) 3 – оксигемоглобина (HbO2); 4 – метгемоглобина (MetHb).

Слайд 34

Фотометрия. Клинический спектрофотометр

Содержание

Оптическая схема нефелометра1 – лампа, 2,11 – светофильтры; 3 – стеклянная

Схема пламенного фотометра1 – цилиндры с топливом и воздухом; 2 –

КЛИНИЧЕСКИЙ СПЕКТРОФОТОМЕТР

Спектрофотометр без монохроматора

Кормей-мульти – программируемый фотометр с проточной кюветой

340длина волны250Спектры поглощения НАД+ и НАД⋅НА

Сопряженные реакцииАланин + α-КГ → Пируват + ГлутаматПируват + НАДН →

Фотометрические методы анализа

ИЗМЕРЕНИЕ ПО КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ

Методы сравнения стандартного и опытного образцаАнализируемая и стандартная проба обрабатываются в

Методы определения без использования калибратораФотометрические единицы (в случае отсутствия калибратора –

Методы определения без использования калибратораОпределение концентрации по молярному показателю поглощения –