Физико-химические методы исследования биологически активных веществ

хроматография (ТСХ)
Общее описание метода
Определение величины Rf
Основные правила идентификации с помощью ТСХ-анализа
Методы визуализации хроматографической картины
Препаративная колоночная хроматография

качественного анализа смесей соединений всех классов веществ (летучих и нелетучих, термически стабильных и нестабильных, полярных и неполярных)

Каждое соединение при данном наборе рабочих условий имеет определенное время удерживания (объем удерживания)

хроматография
(жидкостно-жидкостная) (ЖЖХ)
Жидкостно-адсорбционная хроматография

Используется для разделения широкого круга неионных соединений, от умеренно неполярных до умеренно полярных

Углеводороды, амины, спирты и кислоты

Неподвижная фаза - мелкие частицы твердого сорбента (силикагель,
окись алюминия)
Подвижная фаза (элюент) - органический растворитель

k’А = nSA / nMA

nSA – общее число молекул соединения А, адсорбированных твердым веществом;
nMA – общее число молекул соединения А, растворенных в элюэнте.

полярна молекула, тем сильнее она сорбируется

Адсорбционную активность можно регулировать содержанием воды в сорбенте

Определение степени активности по Брокману
(значение Rf на силикагеле или оксиде алюминия при использовании элюэнта 20% толуола + 80% петролейного эфира)

соединений, особенно полярных соединений, которые не разделяются ЖТХ

Подвижная фаза
Неподвижная фаза (жидкость химически
связана с твердым носителем)

жидкость

значение для:
быстрого качественного анализа смесей,
контроля хода реакций,
определения рабочих параметров для препаративной колоночной
хроматографии.

Разделение методом ТСХ – одна из форм жидкостно-адсорбционной
хроматографии

Получение начальной зоны (пятна) должно занимать
минимальную площадь!

от линии старта до середины пятна, отнесенное к
расстоянию от линии старта до линии фронта растворителя

Воспроизводимость величин Rf зависит от сорбента, его пористости (емкости), толщины, насыщения камер, температуры, угла наклона пластины, величины фронта растворителя и получения начального пятна

фильтровальной бумагой

Краевой эффект- искажение
хроматографической картины

2. Успех анализа зависит от правильного подбора элюэнта
Когда разделению препятствует сильное перекрывание двух пятен, попытайтесь предпринять следующее:
а) Изменить химическую природы проявляющего растворителя при
сохранении его силы
б) Изменить природу неподвижной фазы (замена пластинок)

3. Линии старта и фронта растворителя наносятся простым карандашом на
пластинку
Высота линии старта должна быть выше уровня растворителя в камере!
4. Исследуемое вещество обычно наносится в виде 1-2% раствора в
летучем растворителе (CH2Cl2 , эфира)
Избегать сильнополярных растворителей!
5. Детектирование пятен хроматограммы проводится подходящим методом

μ 60−40

Вата

1 2 3 4 5 6 7