Содержание
- 2. Размеры молекул простых и сложных белков, нуклеиновых кислот в растворе по своим размерам соответствуют коллоидным частицам
- 3. Факторы, определяющие электрофоретическую подвижность белков Величина заряда Размер белковой молекулы Форма белковой молекулы (чем менее шарообразна,
- 4. Факторы, определяющие электрофоретическую подвижность белков Для стабилизации зон используют: - в жидкой среде – использование градиента
- 5. Факторы, определяющие электрофоретическую подвижность белков Недостаток – носители имеют полярные группы (целлюлоза – карбоксильные, агар –
- 6. Электрофорез белков плазмы крови При добавлении к среде NaCl ионы Na+ взаимодействуют с отрицательно заряженными группами
- 7. Факторы, определяющие электрофоретическую подвижность белков
- 8. Виды электрофореза Электрофорез с подвижной границей – разделение идет в жидкой среде в U-образной кювете. Исследуемый
- 9. Камера Тизелиуса Камера Тизелиуса
- 10. Виды электрофореза Зональный электрофорез в поддерживающей среде – обеспечивает стабильность зон, используется непрерывная буферная система. В
- 11. На электрофоретическую подвижность влияют адсорбция молекул исследуемого вещества на поверхности раздела фаз Присутствие ионогенных групп в
- 12. Зональный электрофорез на бумаге Специальная бумага пропитывается буферным раствором, наносится образец и подключается ток За ходом
- 13. Недостатки метода: - неоднородность по структуре - при волокнистой структуре частицы движутся как в капиллярах (торможение
- 14. Зональный электрофорез на ацетатцеллюлозе Пленки имеют однородную структуру Диаметр пор –несколько микрон Не содержат ионогенных групп
- 15. Камера для электрофореза для ацетатцеллюлозной пленке
- 16. Зональный электрофорез на ацетатцеллюлозе
- 17. Фракции белков сыворотки крови при электрофорезе на ацетатцеллюлозе
- 18. Приборы для электрофореза для ацетатцеллюлозной пленке
- 19. Аппарат для электрофореза
- 20. Электрофорез в гранулированных материалах Зональный электрофорез в крахмальном геле - сложность приготовления крахмального геля - нестабильность
- 21. Электрофорез в гранулированных материалах Зональный электрофорез в геле агара и агарозы - электрофорез идет как в
- 22. Электрофорез в гранулированных материалах Электрофорез в полиакриламидном геле Синтетический материал с капиллярной структурой Размеры пор могут
- 23. Электрофорез в полиакриламидном геле Варианты : - в однородной буферной системе - в неоднородной (прерывистой) буферной
- 24. Диск-электрофорез Используется неоднородная разделяющая система – образуются зоны, имеющие форму диска Разделение белков проводится в геле
- 25. Диск-электрофорез
- 26. Диск-электрофорез в полиариламидном геле
- 27. Тест-набор для электрофореза
- 28. Диск-электрофорез Количественная оценка фракций проводится денситометрически
- 29. Капиллярный электрофорез В качестве камеры используется тонкостенный кварцевый капилляр (внутренний диаметр Высокое напряжение электрического поля Продолжительность
- 30. Миграция белков при капиллярном электрофорезе Разделение происходит за счет движения под действием электрического поля и тока
- 31. Оборудование, предназначенное для разделения образцов анализируемой смеси на компоненты, посредством взаимодействия пробы с электрическим полем внутри
- 32. Text Разделение аналитов основано на их распределении по величине электрического заряда. Sample applied Voltage applied Буфер
- 33. Результаты разделения и идентификации белков с использованием капиллярного электрофореза
- 34. СОВРЕМЕННЫЙ КАПИЛЛЯРНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ Знакомьтесь – V8 – новое решение от компании Helena
- 35. Стационарный электрофорез Через некоторое время после начала разделения макромолекул достигается распределение компонентов смеси, и ширина зон
- 36. Изоэлектрическое фокусирование Метод разделения веществ, обладающих амфотерными свойствами, в соответствии с значением их изоэлектрической точки в
- 37. pH Метод разделения макромолекул, основанный на их миграции в градиенте значений рН под действием постоянного электрического
- 38. Изоэлектрическое фокусирование
- 40. Изотахофорез Метод электрофореза, при котором молекулы под действием электрического поля разделяются в соответствии с зарядами, образуя
- 41. Оценка электрофореграмм Окрашивание специфическими красителями с последующей фотометрией Регистрация поглощения УФ-лучей и флуоресценции Иммунохимические методы Регистрация
- 42. Окрашивание Окрашиваются бумага, ацетат целлюлозы, агар, агароза, ПААГ Красители образуют комплексы с молекулами, но вымываются из
- 43. ДЕНСИТОМЕТР
- 44. Современный гелевый электрофорез SAS 1plus Helena – автоматическое нанесение, концентрирование и разделение образцов на агарозном геле
- 45. Выявление по поглощению УФ-света и флуоресценции Регистрация поглощенного УФ света, проходящего через электрофореграммы на твердых прозрачных
- 46. Иммунопроявление и иммунофиксация Взаимодействие белков (антигенов) с со специфическими к ним антителами вызывает образование преципитата Иммуноэлектрофорез
- 47. Регистрация радиоактивности Увеличивает чувствительность метода Предварительно молекулы метятся радиоактивной меткой Радиоактивность обнаруживается при сканировании высушинных гелей
- 48. Типичные ошибки Ошибка при расчете объема исследуемого образца – избыточное количество приводит к искажению электрофореграммы Сыворотка
- 49. Типичные ошибки Ошибки при подготовке образцов для исследования – если использована плазма, а не сыворотка крови
- 50. Типичные ошибки Свойства буферных растворов при близости рН к ИЭТ миграция замедлена повторное использование буфера может
- 51. Типичные ошибки Ошибки, связанные с электрической цепью отсутствие напряжения – отсутствие миграции неправильная полярность – миграция
- 52. Типичные ошибки при электрофорезе белков
- 53. Типичные ошибки при электрофорезе белков
- 54. Роль электрофоретического анализа Определение типа электрофореграммы может подтвердить предполагаемый диагноз, выявить скрытую патологию, следить за ходом
- 55. спасибо за внимание
- 56. Иммунофиксация – качественный метод, позволяющий установить природу моноклонального компонента Методы определения – гелевый электрофорез на агарозе
- 57. IgG κ Выявление моноклональных гаммапатий Иммунофиксация в гелевом электрофорезе На агарозном геле разделение белков IFE в
- 58. 1. Антисыворотка добавляется непосредственно к пробе. Если есть антитела, то происходит образование комплекса Антиген-Антитело. 2. Антисыворотка
- 59. IgG IgA IgM lambda Оригинальная электрофореграмма белка сыворотки kappa Можно сделать следующий вывод: IgG kappa При
- 60. Методические подходы к определению белков Электрофоретический метод является полуколичественным и не подлежит метрологическому контролю
- 61. Электрофоретические фракции и индивидуальные белки сыворотки крови здорового человека
- 62. Электрофоретические фракции и составляющие их белки сыворотки крови
- 63. Фракции белков сыворотки крови
- 64. Электрофореграмма при бисальбуминемии Выявляется двойная полоса в зоне альбумина Может быть генетически обусловленной или транзиторной Причины:
- 65. Электрофореграмма при анальбуминемии
- 66. Электрофореграмма при ожогах
- 67. Электрофореграмма при дефиците α1 -антитрипсина
- 68. Электрофореграмма при остром воспалительном синдроме
- 69. Электрофореграмма сыворотки крови при нефротическом синдроме Снижение α2 –глобулинов Нарушение питания Патология печени Внутрисосудистый гемолиз Увеличение
- 70. Электрофореграмма сыворотки крови и гипертрансферинемией при анемии Уменьшение β-глобулинов -патология печени -дефицит С3-компонента комплемента Увеличение β-глобулинов
- 71. Электрофореграма сыворотки крови при алкогольном циррозе Слияние β- и γ-фракции (за счет увеличения поликлонального Ig A)
- 72. Электрофореграмма сыворотки крови при гипогаммаглобулинемии Физиологическая – у новорожденных Первичный гуморальный иммунодефицит Вторичный – при лечении
- 73. Электрофореграмма сыворотки криви при поликлональной гипергаммаглобулинемии Диффузное усиление зоны γ-глобулинов (инфекционные заболевания печени, СПИД, аутоиммунные заболевания)
- 74. Электрофореграмма сыворотки крови при олигоклональной гипергаммаглобулинемии Появление нескольких полос (синтез в организме одновременно нескольких типов антител
- 75. Электрофореграмма сыворотки крови пожилого пациента с моноклональным компонентом Появление узкой гомогенной полосы У пожилых лиц обнаруживается
- 76. Электрофореграмма сыворотки крови с дополнительной полосой , обусловленной присутствием фибриногена, и того же образца после обработки
- 80. Определение фракций белков в моче (примеры) Определение фракций белков в моче должно проводиться после концентрирования и
- 82. Скачать презентацию