Лабораторная диагностика коклюша

Слайд 7

Микроскопический метод
Микроскопический метод является вспомогательным вариантом диагностики, так как коклюшные бактерии

не имеют четких морфотинкториальных особенностей.

Слайд 8

Бактериологический метод
Схема бактериологической диагностики коклюша включает 4 этапа:
I этап (1-й день).

Забор материала : основной материал – слизь с задней стенки глотки. Посев на пластинки Борде-Жангу с 20-30% крови или КУА, бордетеллагар с добавлением селективного фактора цефалексина; термостатирование при 35-36°С, 2-5 суток с ежедневным просмотром. На КУА колонии имеют серовато-кремовый цвет, а на среде Борде-Жангу приобретают жемчужный или ртутный блеск.

Слайд 9

II этап (2-3-и сутки). Отбор характерных колоний и отсев на сектора

пластинки КУА или бордетеллагара для накопления чистой культуры, термостатирование. Изучение морфологических и тинкториальных свойств в мазке по Граму. При наличии множества типичных колоний изучение антигенных свойств в слайд-агглютинации с поливалентной коклюшной и паракоклюшной сыворотками и выдача предварительного ответа.

Слайд 10

Ш этап (4-5-е сутки). Проверка чистоты накопленной культуры в мазках по

Граму. Изучение антигенных аггютинации с поливалентными коклюшной, паракоклюшной и адсорбированными факторными сыворотками 1 (2, 3) и 14, выдача предварительного ответа. Изучение биохимических свойств (уреазной и тирозиназной активности, способности утилизировать цитрат натрия). Изучение подвижности и способности расти на простых средах.
IV этап (5-6-е сутки). Учет дифференциальных тестов; выдача окончательного ответа по комплексу фенотипических и антигенных свойств.

Слайд 11

Серологические методы
Начиная с 3-4 недели заболевания в крови больных начинают появляться

антитела, которые можно обнаружить серологическим методом c помощью реакции агглютинации, РСК по Борде-Жангу и РНГА, РИФ, ИФА.

Слайд 12

Реакция агглютинации
Пробирки с разведенной сывороткой и добавленным в них диагностикумом помещают

на 2 часа в термостат при 37 °C, а затем на сутки оставляют при комнатной температуре.
Реакция считается положительной при четкой агглютинации с интенсивностью на ++ + + и + + +. Результаты реакции имеют диагностическое значение только при изучении их в динамике, в связи с чем они повторяются не менее двух раз в течение болезни с интервалами 5-7 дней.

Слайд 13

Реакция непрямой гемагглютинации
Основана на использовании эритроцитов (или латекса) с адсорбированными

на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.
Через 2 ч инкубации при 37°С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отрицательной реакции появляется осадок в виде пуговки на дне лунки, при положительной реакции − характерный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями.

Слайд 14

Реакция связывания комплемента по Борде-Жангу
Омыв бактерий центрифугируют до полного просветления, осадок

эмульгируют в дистиллированной воде для растворения случайно смытых со среды эритроцитов. После повторного центрифугирования готовят 1 млрд. суспензию культуры (взвесь 2-дневной культуры палочек коклюша), инактивируют при +56 °C 1 час и подвергают титрованию. Антиген титруют в присутствии комплемента.
Учет результатов :
«++++» − отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость прозрачная, бесцветная; «+++» − гемолиз 25 % эритроцитов; «++» − гемолиз 50% эритроцитов; «+» − гемолиз 75% эритроцитов; «−» − полный гемолиз эритроцитов, осадок отсутствует, жидкость интенсивно окрашена гемоглобином.

Слайд 15

Реакция иммунофлюоресценции
Для этого мазки из исследуемого материала обрабатывают специальными флюоресцирующими сыворотками

или люминесцирующими коклюшными иммуноглобулинами, приготовленными из гипериммунных антибактериальных сывороток. Исследование проводят с помощью люминесцентного микроскопа.

Слайд 16

Иммуноферментный анализ (ИФА)
В роли инфекционного возбудителя коклюша выступает палочка Борде-Жангу. Выделяемые

палочкой токсины являются антигенами, в ответ на которые иммунная система ребенка вырабатывает антитела – иммуноглобулины (Ig). Следовательно, повышение иммуноглобулинов с достаточной степенью достоверности свидетельствует об этом заболевании. При коклюше повышаются иммуноглобулины нескольких классов. Анализ на иммуноглобулины при коклюше позволяет судить о стадии и тяжести заболевания.

Слайд 17

Молекулярно-генетический метод (ПЦР)
В основе этого метода исследования лежит многократное копирование (амплификация)

специфических участков ДНК искомых бактерий, в процессе повторения от 35 до 45 раз запрограммированных циклов, состоящих из трех (как правило) режимов температуры, удерживаемой определенное время.

Слайд 18

Динамика заболеваемости коклюшем за 2017-2019 гг. на территории Белгородской области в

сравнении с общероссийскими показателями (на 100 тыс. населения)

Слайд 19

Административные территории с превышением областного показателя заболеваемости коклюшем в 2017-2019 гг

Слайд 20

Возрастная структура заболеваемости коклюшем в 2017-2019 годы на территории Белгородской области

Слайд 21

Анализ прививочного статуса заболевших коклюшем на территории Белгородской области за 2017-2019

гг

Слайд 22

Формы течения коклюша

Слайд 23

Структура тяжести течения коклюша среди заболевшего населения Белгородской области в 2017-2019

гг

Слайд 24

Сравнение эффективности диагностики коклюша различными лабораторными методами

Слайд 25

ВЫВОДЫ
1. Коклюш ‒ одна из наиболее распространенных «управляемых» инфекций, регистрируемая в настоящее

время в мире.
2. Наиболее эффективным методом в диагностике коклюша является ПЦР.
3. Анализ уровня заболеваемости коклюшем, показал, что в Белгородской области в динамике за 3 анализируемых года отслеживается тенденция к увеличению заболеваемости коклюшем. В возрастной структуре заболеваемости коклюшем преобладают дети в возрасте до 1 года.

Лабораторная диагностика коклюша

Содержание

Актуальность. Коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей

Задачи данной работы: 1. Изучить учебно-методическую литературу, касающуюся как самого заболевания, так и

Объект исследования: коклюш. Предмет исследования: методы лабораторной диагностики коклюша. Материалом исследования послужили сведения

Коклюш – острая антропонозная воздушно-капельная бактериальная инфекция, наиболее характерным признаком, которой