Лабораторная диагностика дифтерии

C. diphtheriae

БИОВАРЫ:

gravis

mitis

intermedius

ПОТЕНЦИАЬНО ТОКСИГЕННЫЕ
C.ulcerans
C.pseudotuberculosis

калия
Дефибринированная или гемолизированная кровь

СРЕДЫ ДЛЯ ПЕРВИЧНОГО ПОСЕВА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА

токсина в РНГА – моноклональные антитела, связанные с эритроцитами.

Штаммы коринебактерий дифтерии засевают в жидкую питательную среду и инкубируют при 37° C в течение
18 часов, используют надосадочную жидкость среды культивирования

Через 2,5 - 3,5 часа производят учет результатов реакции. Допускается - через 18 - 24 часа.

токсин

- кислый свинец.
Цистиназа расщепляет цистин, выделяется сероводород , который взамодействуя с индикатором, образует серно - кислый свинец - соединение темно - коричневого цвета.
Инкубация 37 ̊С – 24 часа
Ускоренный метод - большое количество культуры – 3 часа.

питательной среды: мочевина и фенолрот (крезолрот).
Уреаза расщепляет мочевину с образованием аммиака и углекислоты.
Повышается pH среды - покраснение индикатора.
При отсутствии фермента среда остается желтой.
Ускоренная проба Заксе: 37 ̊С – 30 мин.
Бульон с мочевиной: 37̊С – 24 часа

растворимым крахмалом.
Учет через 24 (48 часов) инкубации при 37° C.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРАТРЕДУКТАЗНОЙ АКТИВНОСТИ
Проводят на нитратном бульоне,
инкубируют 24 часа при 37° C.
Затем добавляют 2 - 3 капли реактива на нитриты (Грисса или Касаткина
При положительной реакции среда окрашивается в красный цвет.

доставлены в лабораторию не позднее 3-х часов с момента взятия материала.

часов

Повторные параллельные
исследования
колоний, пробы на
токсигенность,
цистиназу

Посев на:
сахарозу
глюкозу
крахмал
мочевину

72 часа
4 день

Учет свойств
Определение биохимического варианта

96 часов
5 день

72 часа
4 день
исследования
биохимических свойств

с КТА, 1/2 поверхности - из ротоглотки, 1/2 - из носа
(из мест атипичной локализации на дополнительные чашки)

2 день

Рост колоний на чашках с КТА (24 часа)

Изучение колоний, бактериоскопия, пробы на:
- токсигенность,
цистиназу
посев на скошенный сывороточный агар.

При множественном росте для выдачи предварительного ответа смешивают до 5 однотипных колоний и ставят дополнительные пробы на:
- цистиназу,
- уреазу (по Заксе)
- посев в жидкую среду и выявление дифтерийного токсина в РНГА.
Чашки оставляют до 48 часов.

выдают документированный ответ о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии.

2) Изучение роста чистой культуры на скошенном сывороточном агаре
Посев на среды с сахарозой, глюкозой, крахмалом, мочевиной.

3) Учет результатов проб при первичном множественном росте
При положительных РНГА, пробе Пизу , отрицательной уреазной пробе,
выдают предварительный ответ о выделении возбудителя дифтерии.

4)Повторно для чашек через 48 часов: изучение колоний, бактериоскопия
постановка проб на токсигенность, цистиназу и отсев колоний на скошенный сывороточный агар

5) При отсуствии роста дифтерийных бактерий - выдача отрицательного бактериологического ответа.

часовых колоний), выдача документированного ответа о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии.

2. Характеристика роста чистой культуры (от 48 часовых колоний)
Посев на среды с сахарозой, глюкозой крахмалом, мочевиной.

3. Учет биохимических свойств (от культуры 24 часовых колоний)

4. Выдача бактериологического ответа о выделении нетоксигенных
коринебактерий дифтерии с указанием биохимического варианта и дополнительного ответа о биохимических свойствах токсигенных коринебактерий дифтерии, выделенных ранее.

5 день

Учет биохимических свойств (от культуры 48 часовых колоний)
Выдача бактериологического ответа о выделении (через 48 часов инкубации первичного посева) токсигенных или нетоксигенных коринебактерий дифтерии с указанием биохимического варианта.

накопления токсина, а затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3—0,4% раствора формалина и помещают в термостат при температуре 37—40 °С на 3—4 нед до полного исчезновения токсических свойств.

дифтерийный анатоксин