Лабораторная диагностика туберкулёза

M. аfricanum
M. leprae

через 48 – 72 ч

БИОЛОГИЧЕСКИЙ
морские свинки –
M. tuberculosis
кролики – M. bovis

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ
АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ

Циля
подогреть 2-3 раза
дать остыть, промыть
серная кислота 5%
промыть водой
метиленовая синька 3-5 мин.

микобактерии туберкулеза методами микроскопии, в 1 мл исследуемого материала должно содержаться не менее 10000 микробных клеток.

Не позволяет дифференцировать возбудителей туберкулеза от нетуберкулезных микобактерий - возбудителей микобактериозов.
Кислотоустойчивость окраски можно наблюдать у:
Rhodococcux, Nocardia, Legionella, а также цисты Cryptosporidium и Isospora.
НА ОСНОВАНИИ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗМОЖНО СДЕЛАТЬ ЗАКЛЮЧЕНИЕ ТОЛЬКО
О НАЛИЧИИ ИЛИ ОТСУТСТВИИ В ПРЕПАРАТЕ
КИСЛОУСТОЙЧИВЫХ БАКТЕРИЙ.

НЕДОСТАТКИ БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКОГО МЕТОДА

культуральные свойства
биохимические свойства
Определение антибиотикорезистентности

(В отличие от бактериоскопического позволяет на 30 - 50% увеличить число выявляемых бактериовыделителей )

L-аспарагин Глицерин
Малахитовый зеленый
Яичная масса. Вода дистиллированная

Калий однозамещенный
фосфорнокислый
Магний сернокислый
Натрий лимоннокислый
Квасцы железоаммонийные
Аммоний лимоннокислый
однозамещенный
Натрий глутаминовокислый
однозамещенный
Глицерин
Малахитовый зеленый
Яичная масса.
Вода дистиллированная
pH = 6,3 - 6,8

и 18-20 час 37° С, нейтрализация - кислота соляная (HCl) концентрированная, промывка дистиллированной водой.
Посев по 0,5 - 0,6 мл в 2 пробирки с разными плотными средами;
переместить в горизонтальные штативы - "диваны" , в термостат при температуре 37° С.
Инкубация 12 недель при обязательном еженедельном просмотре.

¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Скорость роста ¦Медленнорастущие > 3 недель ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Пигментообразование ¦Цвет слоновой кости ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Морфология колоний ¦R или S формы ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Наличие кислотоустойчивости¦Выраженная кислотоустойчивая окраска¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Температура роста ¦Оптимальный рост при 35 - 37° C ¦
L---------------------------+-------------------------------------

Микобактерии ¦
¦ +---------------T-----------------+
¦ ¦М.tuberculosis ¦ нетуберкулезные ¦
¦ ¦ ¦медленнорастущие ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦ Основные биохимические тесты на наличие: ¦
+------------------------------T---------------T-----------------+
¦Никотиновой кислоты ¦ + ¦ - <*> ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Нитратредуктазы ¦ + ¦ +/- ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Термостабильной каталазы ¦ - ¦ + ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Рост на среде с натрием ¦ - ¦ +/+/- ¦
¦салициловокислым (1000 мкг/мл)¦ ¦ ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦ Дополнительные тесты: рост на средах, содержащих: ¦
+------------------------------T---------------T-----------------+
¦Паранитробензойную кислоту ¦ - ¦ + <**> ¦
¦(500 мкг/мл) ¦ ¦ ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Натрия хлорид 5% ¦ - ¦ + <***> ¦
L------------------------------+---------------+------------------

<*> За исключением М.simae.
<**> За исключением М.gastri.
<***> За исключением М.marinum, M.terrae.
Для дифференциации микобактерий комплекса М.tuberculosis, к
которому относятся следующие виды микобактерий: M.tuberculosis,
М.bovis, М.africanum, М.microti, от медленнорастущих
нетуберкулезных кислотоустойчивых

¦ Виды микобактерий комплекса ¦
¦ ¦ М.tuberculosis ¦
¦ +--------T--------T-------T-------+
¦ ¦М.tuber-¦М.bovis ¦М.af- ¦М.mic- ¦
¦ ¦culosis ¦ ¦ricanum¦roti ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦ Основные биохимические тес ты на наличие: ¦
+------------------------------T--------T--------T-------T-------+
¦Никотиновой кислоты ¦ + ¦ - ¦ +/- ¦ +/- ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Нитратредуктазы ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Термостабильной каталазы ¦ - ¦ - ¦ - ¦ -/+ ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Рост на среде с натрием ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦салициловокислым (1000 мкг/мл)¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦ Дополнительные тесты: рост на средах, содержащих: ¦
+------------------------------T--------T--------T-------T-------+
¦Пиразинамид ¦ + ¦ - ¦ + ¦ + ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Мочевина ¦ +/- ¦ +/- ¦ + ¦ +/- ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Гидролиз твина в течение 10 ¦ -/+ ¦ -/+ ¦ - ¦ -/+ ¦
¦дней ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦ТСН (2 мкг/мл)
гидразидом
тиофен-2-карбоксиловой кислоты ¦ + ¦ - ¦ +/- ¦ +/- ¦
L------------------------------+--------+--------+-------+--------

концентраций на среде Левенштейна-Йенсена.

Уровень устойчивости данного штамма в целом выражается той максимальной концентрацией препарата (количество мкг в 1 мл питательной среды), при которой еще наблюдается размножение микобактерий (по числу колоний на плотных средах).

КРИТЕРИЕМ УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИАЛЬНОЙ ПОПУЛЯЦИИ НАЗЫВАЮТ ПОКАЗАТЕЛЬ РОСТА МИКОБАКТЕРИАЛЬНОГО ПУЛА, ВЫРАЖЕННЫЙ В АБСОЛЮТНЫХ (ЧИСЛО КОЕ) ИЛИ ОТНОСИТЕЛЬНЫХ ЕДИНИЦАХ (ПРОПОРЦИЯ КОЕ), НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЙ ПРЕПАРАТ В КРИТИЧЕСКОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, ПРЕВЫШЕНИЕ КОТОРОГО СЧИТАЕТСЯ НАЛИЧИЕМ ПРИЗНАКА УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ.

Для метода абсолютных концентраций появление более 20 КОЕ микобактерий на питательной среде, содержащей лекарственный препарат в критической концентрации, свидетельствует о том, что данный штамм микобактерий обладает лекарственной устойчивостью. При этом необходимо иметь в виду, что объем засеваемой суспензии клеток стандартизован и соответствует 1 x 107 микробных тел.

НА СРЕДЕ ЛЕВЕНШТЕЙНА-ЙЕНСЕНА

(тип bovis).
Однократно, подкожно новорожденным
3-7 дневного возраста.
Ревакцинация 7лет, 14 лет.