Микробиологические исследования мяса

Содержание

Слайд 2

Бактериологические исследования мяса Отбор проб Подготовка образцов к исследованию и проведение

Бактериологические исследования мяса
Отбор проб
Подготовка образцов к исследованию и проведение
Методы обнаружения аэробов

— Выявление возбудителя сибирской язвы
— Выявление возбудителей рожи свиней, листериоза, пастереллеза
— Выявление бактерий кокковой группы
— Выявление бактерий рода Salmonella
— Выявление бактерий рода Proteus
Методы обнаружения анаэробов
Методы обнаружения микобактерий

Содержание

Слайд 3

Бактериологические исследования мяса При различных заболеваниях животных и птицы мышцы и

Бактериологические исследования мяса

При различных заболеваниях животных и птицы мышцы и внутренние

органы нередко обсеменены микроорганизмами. Продукты убоя этих животных (птицы) могут вызвать у человека инфекционные или пищевые заболевания.
Цель бактериологического анализа — подтверждение или исключение диагноза на инфекционные болезни, а также выяснение вопроса о наличии в мясе микробов, вызывающих пищевые токсикоинфекции и токсикозы.
Бактериологическое исследование проводят в случаях, предусмотренных действующими Правилами ветери­нарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов (1983 г.) и нормативно-технической документацией (ГОСТ 21237— 75. Мясо. Методы бактериологического анализа).
Слайд 4

при подозрении на остропротекающие инфекционные заболевания (сибирская язва, эмфизематозный карбункул и

при подозрении на остропротекающие инфекционные заболевания (сибирская язва, эмфизематозный карбункул и

др.);
при ящуре в случае обнаружения в мышцах единичных некротических очагов;.
при чуме свиней, роже, пастереллезе и болезни Ауески в случае отсутствия патологических изменений в мус­кулатуре туши и во внутренних органах;
при некробактериозе в случае поражения нескольких органов и удовлетворительной упитанности туши;
при лейкозе. в случае поражения отдельных лимфатических узлов или органов и отсутствия изменений в скелетной мускулатуре;
при мыте;
при беломышечной болезни и кетозах, если изменения в мускулатуре слабо выражены (цвет бело-розо­вый) или при патологоанатомических изменениях в органах или части скелетной мускулатуры;
при инфекционном ринотрахеите, парагриппе-3, вирусной диарее, аденовирусной инфекции с наличием патологоанатомических изменений в туше и во внутренних органах;
при стахиботриотоксикозе в случае отсутствия патологоанатомических изменений (некротических участков);
при осложненном течении онхоцеркоза с признаками гнойно-некротических процессов;

Бактериологический анализ проводят в следующих случаях:

Слайд 5

11. при пироплазмидозах в случае исчезновения желтушности в течение двух суток;

11. при пироплазмидозах в случае исчезновения желтушности в течение двух суток;
12.

при маститах, эндометритах, параметритах коров и овец;
13. во всех случаях вынужденного убоя животных независимо от причин убоя и принадлежности животных;
14. при отравлении или подозрении на отравление ядови­тыми веществами химического или растительного происхождения;
15. при подозрении на сальмонеллезные заболевания или на обсеменение мяса сальмонеллами;
16. при желудочно-кишечных заболеваниях;
17. при тяжело протекающих заболеваниях органов дыхания;
18. при обширных ожогах, кровоизлияниях с воспалительными явлениями в лимфатических узлах и признаках септического процесса или при небольших кровоизлияниях в подкожной клетчатке, во внутренних органах, на слизистых оболочках;
19. при отеках внутренних органов и частей туши;
20. при жировом перерождении печени;
при наличии гнойных очагов в печени, почках, селезенке и легких;
при желтушном окрашивании всех тканей туши, исчезающем в течение двух суток;
Слайд 6

23. при обнаружении серозных и фибринозных, перикардитов у свиней; 24. при

23. при обнаружении серозных и фибринозных, перикардитов у свиней;
24. при септикопиемических

заболеваниях;
25. при гнойных нефритах, нефрозах;
26. при удалении кишечника из туши позднее чем через 2 ч. после убоя животного;
27. при обнаружении в паренхиматозных органах множественных абсцессов;
28. при доставке на колхозный рынок неклейменого мяса без головы и внутренних органов или без справки ветеринарного врача (фельдшера);
29. при сомнительной свежести мяса или других продук­тов и невозможности установить их доброкачественность органолептическим путем, а также во всех других случаях, когда санитарная оценка не может быть дана по результатам ветеринарного осмотра;
30. по требованию органов ветеринарного и санитарного надзора;
31. при обнаружении в сырокопченых колбасах бактерий группы кишечной палочки или протея после дополнительной выдержки в течение 10—12 сут. в случае сохранения нормальных органолептических свойств.
Слайд 7

В зависимости от предполагаемого диагноза и характера патологоанатомических изменений для бактериологического

В зависимости от предполагаемого диагноза и характера патологоанатомических изменений для

бактериологического исследования в ветеринарную лабораторию на­правляют:
две пробы мышц — часть сгибателя или разгибателя передней и задней конечности или кусок другой мышцы имеете с покрывающей его фасцией размером не менее 8 х 6 х 6 см;
лимфатические узлы (не менее двух) — поверхностный шейный или собственно подкрыльцовый и наружном подвздошный; от свиных туш — подчелюстной и поверхностный шейный дорсальный или подкрыльцовый первого ребра и подколенной складки. Лимфатические узлы берут целиком вместе с окружающими их соедини­тельной и жировой тканью;
внутренние органы — целиком селезенку и почку, до­лю печени с печеночным лимфатическим узлом или опо­рожненным желчным пузырем. Поверхность разреза доли печени прижигают до образования струпа;
трубчатую кость (посылают для уточнения диагноза с целью выделения более чистой культуры возбудителя). При исследовании полутуш или четвертин туш в лабораторию направляют кусок мышцы, лимфатические узлы и трубчатую кость.

Отбор проб

Слайд 8

Пробы берут стерильными инструментами. Каждую пробу в отдельности заворачивают в пергаментную

Пробы берут стерильными инструментами. Каждую пробу в отдельности заворачивают в

пергаментную бумагу или полиэтиленовую пленку и складывают в об­щий бумажный пакет. На нем ставят дату отбора пробы, номер туши и направляют в ветеринарную лабораторию в запломбированном (или опечатанном) металлическом ящике с нарочным.
Если же лаборатория находится на большом расстоянии от места взятия материала и его невозможно доставить в течение 24—30 ч., то для предупреждения размножения гнилостной микрофлоры пробы консервируют. Для этого их помещают в 30 %-ный водный раствор глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением. Материал можно консервировать в стериль­ном вазелиновом масле. Консервирующую жидкость заливают в количестве, в 4—5 раз превышающем объем материала.
Обработанный материал укладывают в оцинкованный ящик и пересыпают опилками, смоченными дезинфицирующим средством. При необходимости тару с образцами опечатывают или пломбируют.
В сопроводительном документе указывают: вид мяса, его принадлежность, перечень пересылаемых проб и их количество, причину направления материала, краткие патологоанатомические данные, предполагаемый диагноз, дату взятия образцов и подпись лица, напра­вившего их на исследования.
Кроме того, следует сообщить данные осмотра туши и внутренних органов, основное содержание ветеринарного документа с места доставки туш и какое требуется провести исследование.
Слайд 9

Схема бактериологического исследования мяса Пробы: мясо, лимфатические узлы, внутренние органы, костный

Схема бактериологического исследования мяса

Пробы: мясо, лимфатические узлы, внутренние органы, костный мозг

Бактериоскопия

мазков-отпечатков

Посевы

Реакция преципитации на сибирскую язву (при подозрении)

Мясо-пептонный агар

Элективные среды

Среды обогащения (для накопления сальмонелл)

Скошенный агар по Шукевичу и агар Плоскирева (для обнаружения протея)

Среда Китта-Тароцци (на анаэробы)

Изучение характера роста, микроскопия мазков из подозрительных колоний

Отсевы

Проба на каталазу (для обнаружения листерий)

Определение подвижности

Реакция агглютинации с моноре- цепторными О- и Н-адсорбиро- ванными сыворотками

Трехсахарный агар Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука

Элективные среды (агар Эндо, агар Левина)

Изучение характера роста, микроскопия мазков из подозрительных колоний

Определение подвижности

Пестрый ряд

Изучение характера роста. Мик- роскопия мазков

Определение подвижности

Пестрый ряд

Изучение характера роста, микроскопия мазков

Биопроба

Реакция агглютинации с монорецептор- ными О- и Н- адсорбированными сыворотками

МПА

МПБ

Желатин

МПА с кровью

Углеводная среда с салицином

Мясо-пептонный печеночный агар

Пестрый ряд

Биопроба

Слайд 10

Образцы освобождают от жировой и соединительной ткани, погружают на 2—3 мин.

Образцы освобождают от жировой и соединительной ткани, погружают на 2—3

мин. в спирт и два раза обжигают с поверхности. Для приготовления суспензии стерильными ножницами из глубины исследуемых образцов (из разных мест) вырезают кусочки размером 2 х 1,5 х 2,5 см; лимфатические узлы разрезают пополам. Для приготовления мазков-отпечатков для бактериоскопии (2—10) одновременно с приготовлением суспензии отбирают кусочки мышц, лимфатических узлов, органов. Мазки фиксируют и окрашивают по Граму и одним из специальных методов (например, метод Ольта, Муромцева) для выявления капсул возбудителя сибирской язвы.
Для посева составляют две пробы по 15 г каждая (одна —из кусочков мышц и лимфатических узлов; другая — из кусочков печени, почек, селезенки. Каждую пробу помещают в стерильные стаканы гомогенизатора, куда добавляют по 15 мл физиологического раствора (1 мл полученной взвеси содержит 0,5 г продукта) и отстаивают 10 мин. Затем петлей или пастеровской пипеткой из верхнего слоя надосадочной жидкости каждой взвеси делают посевы на поверхность подсушенного МПА для обнаружения возбудителей некоторых зооантропонозов (сибирская язва, рожа свиней, листериоз, пастереллез, а также кокковые инфекции); на поверхность элективной среды (среда Эндо или Левина) — для обнаружения сальмонелл и бактерий группы кишечных палочек; в среду Киллиана—для выделения Salmonella cholerae suis; в одну из сред обогащения (селенитовый Ф-бульон, Мюллера, Кауфмана и др.) —для накопления сальмонелл; в среду Б или Хейфеца— для обнаружения бактерий группы кишечных палочек; в конденсационную воду свежескошенного МПА (метод Шукевича) —для обнаружения бактерий рода Proteus; в среду Китта-Тароцци—при подозрении на анаэробные инфекции.

Подготовка образцов к исследованию и проведение

Слайд 11

Посев в среду обогащения производят следующим образом: в одну колбу со

Посев в среду обогащения производят следующим образом: в одну колбу

со средой вносят 10 г измельченной пробы из мышц и лимфатических узлов; в другую — 10 г измельченных кусочков паренхиматозных органов (сердце, селезенки, печень).
Посевы помещают в термостат при температуре 37°С. Через 18 ч. их просматривают визуально, при необходимости — через лупу или под микроскопом при малом увеличении.
Если роста не наблюдается через 18 ч., то посевы выдерживают в термостате дополнительно 6 ч. В зависимости от результатов бактериоскопии и характера роста на питательных средах проводят исследование на наличие возбудителя определенной инфекции.
Слайд 12

Колонии, подозрительные на Вас. anthracis, отвивают на поверхность скошенного МПА и

Колонии, подозрительные на Вас. anthracis, отвивают на поверхность скошенного МПА

и МПБ для получения чистой культуры, которую используют в дальнейшем для определения видовой принадлежности выделенного микроба. Для этого производят высев на цветной ряд, состоящий из следующих сред: МПБ, МПА, МПЖ, молока, агара или бульона с кровью, ставят биологическую пробу на опытных животных, реакцию преципитации.

Методы обнаружения аэробов

Выявление возбудителя сибирской язвы

Слайд 13

Обнаружение бацилл сибирской язвы. Сущность метода выявления бацилл сибирской язвы заключается

Обнаружение бацилл сибирской язвы. Сущность метода выявления бацилл сибирской язвы

заключается в определении их характерной морфологии и характера роста на питательных средах, а также изучение патогенности заражением лабораторных животных (белых мышей).
Бациллы сибирской язвы неподвижны, в организме образуют капсулы, а во внешней среде при доступе кислорода и температуре 12—42 °С — споры. При микроскопии мазков из патологического материала обнаруживают крупные грамположительные палочки, соединенные в короткие цепочки, а иногда цепочки имеют форму бамбуковой трости.
При окраске 2 %-ным раствором сафранина сибиреязвенные бациллы окрашиваются в кирпично-красный цвет, а капсулы и теки (следы распада бактерий) — в светло-желтый.
При окраске раствором Ребигера бациллы антракса окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а капсулы — в красно-фиолетовый.
На МПА через 16—24 ч бациллы растут в виде серо-белых, шероховатых с бахромчатыми краями колоний, напоминающих при осмотре с лупой «головку медузы» Или «львиную гриву». Из подозрительной колонии делают посев в пробирку с МПБ.
Слайд 14

Bacillus anthracis

Bacillus anthracis

Слайд 15

Слайд 16

Рост Вас. Anthracis на кровяном МПА

Рост Вас. Anthracis на кровяном МПА

Слайд 17

Споры Вас. Anthracis, окраска по Ауеске Мазок из чистой культуры Вас. Anthracis (РИФ)

Споры Вас. Anthracis, окраска по Ауеске

Мазок из чистой культуры Вас. Anthracis (РИФ)

Слайд 18

На МПБ сибиреязвенные бациллы растут в виде крупных хлопьев, оседающих на

На МПБ сибиреязвенные бациллы растут в виде крупных хлопьев, оседающих

на дно пробирки к концу первых суток, с образованием осадка, напоминающего комок ваты. Бульон остается прозрачным. Из бульонной культуры готовят препарат «раздавленная» или «висячая» капля. При микроскопии препарата под средним увеличением микроскопа обнаруживают неподвижные сибиреязвенные палочки.
Иногда возникает необходимость дифференцировать сибиреязвенные бациллы от сапрофитных бацилл, которые морфологически очень сходны. В этом случае чистую культуру, выросшую на МПА или МПБ, исследуют: на капсулообразование in vitro, на гемолитическую активность, на тест «жемчужное ожерелье», на чувствительность к сибиреязвенному фагу или на свертываемость желтка куриного яйца.
Для возбудителя сибирской язвы в отличие от сапрофитных ба­цилл характерно отсутствие гемолиза как вокруг колоний на МПА, так и в МПБ с кровью.
Слайд 19

Из исследуемого материала готовят взвесь на физиологическом растворе. 0,5 мл этой

Из исследуемого материала готовят взвесь на физиологическом растворе. 0,5 мл

этой взвеси вводят двум белым мышам подкожно в область спины. При исследовании материала от свиней (подчелюстные лимфатические узлы) опытных животных заражают молодой (16-часового роста) чистой культурой. После гибели мышей, которая наступает через 24—72 ч., их вскрывают; из крови сердца, печени, селезенки и места заражения готовят мазки и производят посевы на питательные среды (МПА, МПБ). Одновременно с бактериоскопией исходного материала в сомнительных случаях проводят реакцию преципитации (РП).

Постановка биологической пробы

Слайд 20

2 г исследуемого материала мелко нарезают, помещают в пробирку и заливают

2 г исследуемого материала мелко нарезают, помещают в пробирку и

заливают 10 мл карболинизированного 0,5%-ного физиологического раствора. Если исследуют свежий материал, то его предварительно выдерживают в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. Полученный экстракт кипятят 30—40 мин. и фильтруют через асбестовую нейтральную вату до полной прозрачности. Прозрачный экстракт в количестве 0,25—0,3 мл вносят в узкую пробирку и под него подслаивают такое же количество преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, профильтрованной через бумажный фильтр. В случае положительной реакции через 3—8 мин. на границе сыворотки и экстракта появляется преципитирующее кольцо; при сомнительной реакции оно появляется через 10—15 мин.; при отрица­тельной— кольцо отсутствует. При проведении РП контролем служат стандартный сибиреязвенный антиген и стандартная сибиреязвенная сыворотка, нормальная сыворотка с исследуемым экстрактом, преципитирующая сыворотка с физиологическим раствором. В первой контрольной пробирке должно образоваться кольцо, а в двух других — нет, т. е. реакция отрицательная.
Основанием для постановки диагноза на сибирскую язву являются наличие капсул в мазках из органов, а в мазках из культуры — грамположительных палочек, расположенных в виде цепочек; концы палочек, обращенные друг к другу, резко обрублены; характерный рост на МПА, МПБ, МПЖ; положительная РП и положительный результат биологической пробы.
При бактериологическом исследовании на сибирскую язву, особенно несвежего материала, часто обнаруживают большое количество посторонней микрофлоры. В этом случае трудно дифференцировать Вас. anthracis от антракоидов, псевдоантраксных палочек и других спорообразующих сапрофитных аэробов, положительно красящихся по Граму и имеющим колонии, сходные с колониями сибиреязвенного микроба.

Постановка РП

Слайд 21

Для дифференциации необходимо сделать посевы на МПБ с кровью, МПЖ и

Для дифференциации необходимо сделать посевы на МПБ с кровью, МПЖ

и исследовать культуру микроорганизма на подвижность. Для ускоренной дифференциальной диагностики возбудителя сибирской язвы и сходных с ним почвенных аэробных бацилл рекомендуется использовать следующие тесты: феномен «жемчужное ожерелье», чувствительность к сибиреязвенному бактериофагу, свертываемость желтка куриного яйца, гемолитическую активность, феномен капсулообразования.

Экспресс-методы дифференциации Вас. anthracis и почвенных спорообразующих бактерий

Слайд 22

В две пробирки с МПА, содержащими 0,5 и 0,05 ед. пенициллина,

В две пробирки с МПА, содержащими 0,5 и 0,05 ед.

пенициллина, и в контрольную пробирку без пенициллина (контроль I) вносят по 0,25 мл испытуемых 3-часовых бульонных культур. Культуры почвенных бацилл, засеянные на МПА и МПА с пенициллином, служат контролем II. Посевы помещают в термостат при 37°С. Через 3 ч. из конденсационной жидкости берут материал и готовят мазки, которые фиксируют в спирте — эфире и окрашивают метиленовым синим, разведенным фуксином, или по Граму.
При положительной реакции теста «жемчужное ожерелье» бациллы сибирской язвы, засеянные на МПА с пенициллином, приобретают шарообразную форму, а цепочки их имеют вид ожерелья. Споровые сапрофитные аэробы (контроль) имеют обычную форму палочек.

Феномен «жемчужное ожерелье»

Слайд 23

Для постановки этого теста применяют фаг «Гамма МВА». Исследуемую культуру высевают

Для постановки этого теста применяют фаг «Гамма МВА». Исследуемую культуру

высевают в 3 пробирки на скошенный МПА и выдер­живают в термостате 20 мин при 37°С. Пробирки ставят вертикально в штатив. В 2 пробирки вносят по капле неразведенный фаг, третья пробирка является контролем (без фага). Действие фага устанавливают через 6—8 ч. В контрольной пробирке по всей поверхности ага­ра наблюдается обычный рост культуры. В пробирках с фагом по хо­ду стекания капли на поверхности агара образуется прозрачная до­рожка лизиса с бордюром роста культуры по бокам дорожки. Наибо­лее четко явление лизиса наблюдается через 16—18 ч. Этот метод получил название способа «стекающей капли».
Испытуемую культуру засевают на среду ГКИ и помещают в термостат при 37°С. Через 30—120 мин наблюдается образование капсул у отдельных сибиреяз­венных палочек, а через 16—18 ч. — у большинства.
При хронических сибиреязвенных процессах, сопровождающихся некрозом ткани, обнаруживают лишь слабоокрашенные тени, напоминающие сибиреязвенные бациллы.

Чувствительность к сибиреязвеннному фагу

Феномен капсулообразования

Слайд 24

Свертываемость желтка куриного яйца определяют следующим образом. Исследуемую культуру высевают в


Свертываемость желтка куриного яйца определяют следующим образом. Исследуемую культуру

высевают в пробирку со средой Дрожжевкиной. Посевы помещают в термостат при 37°С и выдерживают от 8 до 24 ч. За это время сибиреязвенная палочка вызовет коагуляцию желтка куриного яйца. Большинство же спорообразующих аэробов коагулируют желток уже через 6—8 ч.
Ее определяют путем засева культуры на чашки с кровяным агаром или на МПБ с кровью. Посевы помещают в термостат при 37оС на 20—24 ч.

Гемолитическая активность

Свертываемость желтка куриного яйца

Слайд 25

Выявление возбудителей рожи свиней, листериоза, пастереллеза и других инфекций Наличие в

Выявление возбудителей рожи свиней, листериоза, пастереллеза и других инфекций

Наличие в

чашках с МПА прозрачных колоний обусловливает необходимость проведения исследований на присутствие в мясе возбудителей рожи свиней, листериоза и пастереллеза.
Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму. Микробы исследуют на подвижность и делают посев на МПА, МПБ, МПЖ, молоко, полужидкие углеводные среды с индикатором ВР, на агар с 4% пептона и 0,25% уксуснокислого свинца.
Листерии и рожистые палочки дифференцируют на основании морфологических, культуральных и ферментативных свойств. Иногда ставят биопробу.
Слайд 26

Erysipelothrix rhusiopathiae

Erysipelothrix rhusiopathiae

Слайд 27

Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes

Слайд 28

Pasteurella multocida

Pasteurella multocida

Слайд 29

Если в мазках, приготовленных из мелких прозрачных колоний, обнаруживают коккообразные грамотрицательные

Если в мазках, приготовленных из мелких прозрачных колоний, обнаруживают коккообразные

грамотрицательные палочки, расположенные в виде диплококка, или цепочки из коротких палочек, то исследование проводят на пастереллез. Испытуемую культуру вводят внутривенно кролику, внутрибрюшинно морской свинке или белой мыши. При наличии возбудителя животные обычно погибают через 24—48 ч. Из органов павших животных готовят мазки-отпечатки, окрашивают их краской Муромцева в течение 30 с и микроскопируют. Диагностическое значение при этом имеет обнаружение в мазках би­полярно окрашенных овоидных палочек.
Существует метод ускоренной идентификации возбудителей рожи свиней, листериоза, сальмонеллеза с помощью флюоресцирующих (люминесцирующих)" антител. Сущность метода заключается в определении способности антител иммунных сывороток при соединении через карбомидные группы со специальными красителями (флюорохромами) вступать в специфическую связь с соответствующими анти­генами. Образующийся при этом комплекс антиген—антитело флюоресцирует, и его легко можно обнаружить при люминесцентной микроскопии. Применение метода люминесцирующих сывороток для идентификации выделенной культуры микробов ускоряет исследование, так как исключает в ряде случаев необходимость определения культуральных, ферментативных, антигенных и других свойств микроорганизмов.
Слайд 30

Слайд 31

Наличие на чашках с МПА мелких прозрачных или слегка мутноватых колоний,

Наличие на чашках с МПА мелких прозрачных или слегка мутноватых

колоний, образующих иногда различные пигменты, дает основание предположить присутствие возбудителей кокковых инфекций (диплококкоз, стафилококкоз, стрептококкоз).
Дифференциальный диагноз ставят на основании микроскопического исследования (грамположительные, неподвижные, неспорообразующие круглые клетки, располагающиеся одиночно, цепочками, гроздями, в виде ланцетовидных диплококков), а также определения характера роста на питательных средах. На МПБ стафилококки и диплококки дают равномерное помутнение, на дно пробирки выпадает осадок. При росте стрептококков в МПБ с 2% глюкозы бульон остается прозрачным, а на дно пробирки выпадает осадок. Патогенность стафилококков определяют реакцией коагулирования плазмы крови. Для этой цели берут 2 пробирки с плазмой крови кроликов. В одну из них бактериологической петлей вносят суточную агаровую культуру испытуемого стафилококка и тщательно перемешивают. Другая пробирка является контрольной. Пробирки помещают в термостат при 37°С. Результаты реакции учитывают через 2—4 и 24 ч. Штаммы стафилококка, продуцирующие фермент плазмокоагулазу, свертывают плазму, вследствие чего она превращается в студнеоб­разную массу. Положительная реакция указывает на наличие в мясе патогенных стафилококков.

Выявление бактерий кокковой группы

Слайд 32

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus epidermidis

Слайд 33

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus

Слайд 34

Род Streptococcus

Род Streptococcus

Слайд 35

На дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина) учитывают подозрительные колонии, характерные для сальмонелл.

На дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина) учитывают подозрительные колонии, характерные для

сальмонелл. В случае отсутствия роста колоний, типичных для сальмонелл на этих средах, через 16 ч. производят пересев со среды обогащения на одну из элективных сред.
Пересевы со сред обогащения целесообразно производить на среду Плоскирева, так как число случаев выделения сальмонелл на этой среде наибольшее. Эта среда ингибирует рост вульгарного протея, или он вырастает на ней в О-форме.
При обнаружении на среде Эндо или Левина подозрительных на сальмонелл колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму, исследуют подвижность микробов. Одновременно с микроскопией ставят реакцию агглютинации на предметном стекле с поливалентной агглюти­нирующей сальмонеллсзной сывороткой пяти основных групп (B1, C 1, С 2, D 1, E 1). В ветеринарной практике чаще всего встречаются бактерии этих групп. Отрицательная реакция с поливалентной сывороткой указывают на то, что испытуемая культура не принадлежит к группам В 1, С 1, С 2, D 1, E 1. Если испытуемая культура дает положительную агглютинацию с поливалентной сывороткой, то это позволяет отнести ее к роду Salmonella одной из пяти групп. Такую культуру окончательно идентифицируют в РА с монорецепторными агглютинирующими сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, устанавливая в ней наличие не всех присущих ей антигенов, а лишь основных, имеющих значение для дифференциации.

Выявление бактерий рода Salmonella

Слайд 36

Сначала культуру испытывают в реакции агглютинации с одной из О-сывороток. Выбирают

Сначала культуру испытывают в реакции агглютинации с одной из О-сывороток.

Выбирают сыворотку, исходя из вида животного, от которого выделена испытуемая культура, серотипа сальмонелл, наиболее часто встречающегося у данного вида животных. При отрица­тельной реакции с первоначально взятой О-сывороткой культуру ис­пытывают в РА с остальными четырьмя групповыми О-сыворотками и на основе положительной реакции агглютинации относят культуру к одной из серологических групп.
Затем культуру испытывают в РА ,с Н-сыворотками первой и второй фазы. В выборе сывороток для реакции исходят из антигенной структуры сальмонелл той группы, к которой отнесена определенная культура, с учетом вида животного, от которого она выделена. При положительной РА с определенными О- и Н-сыворотками испытуемую культуру относят к одному из серотипов.
При идентификации сальмонелл по антигенной структуре иногда возникает трудность в определении Н-антигеиа или одной из его фаз, что может быть обусловлено угнетением или утратой Н-антигена (потеря подвижности) либо преобладанием какой-либо одной фазы.
Для восстановления агглютинабильности и выявления специфической фазы Н-антигена можно использовать метод роения в чашках по Свену Гарду. Принцип этого феномена основан на том, что при добавлении к агару гомологичной Н-сыворотки подавляется подвиж­ность бактерий, зависящая от этой фазы. Фаза, не подвергающаяся влиянию сыворотки, разрастается и может быть выделена из краевой части колонии.
Слайд 37

На предметное стекло из ампулы наносят каплю неразведенной сыворотки. Затем платиновой

На предметное стекло из ампулы наносят каплю неразведенной сыворотки. Затем

платиновой петлей берут испытуемую 20-часовую агаровую культуру и тщательно растирают ее в капле сыворотки.
При положительной реакции (через 1—2 мин.) образуется агглютинат, который можно наблюдать в виде плотных комочков, зернышек (О-агглютинация) или крупных, рыхлых, легко разбивающихся хлопьев (Н-агглютинация). С образованием агглютината жидкость становится прозрачной. При отрицательной реакции культура распределяется в капле в виде гомогенной взвеси.
Если выделенная культура типична по морфологии (грамотрицательные подвижные палочки), имеет характерный рост па элективной среде, дает положительную реакцию агглютинации, то ее относят к роду Salmonella.

Постановка реакции агглютинации

Слайд 38

В случае отрицательной реакции агглютинации, но при характерном росте на элективной

В случае отрицательной реакции агглютинации, но при характерном росте на

элективной среде и соответствующих морфологических признаках сальмонелл производят высев из подозрительных колоний на короткий пестрый ряд, состоящий из углеводных сред с лактозой, сахарозой, глюкозой, маннитом, бульона Хоттингера (для определения индолообразоваиия) и скошенного МПА. Для полной типизации выделенной культуры делают посев на развернутый пестрый ряд, включающий глицеринофуксиновый бульон Штерна, среду с рамнозой (по Биттеру), лакмусовое молоко, углеводные среды с арабииозой, салицином, дульцитом и пр.
Если по ферментативным свойствам культура принадлежит к роду Salmonella, а реакция агглютинации отрицательна, то микроб относят к неагглютинабильным штаммам сальмонелл. Для уточнения вида выделенного штамма сальмонелл можно поставить биологическую пробу.
Биологическую пробу проводят обычно на белых мышах путем введения культуры peros. За животными наблюдают в течение 10 — 12 сут. Культура патогенна, если зараженные мыши погибают. В этом случае производят высевы из внутренних органов животных на элективную среду.
При нетипичности выделенной культуры по ферментативным свойствам (отклонения в ферментации тех или иных углеводов и спиртов), но избирательно агглютинирующей монорецепторные сыво­ротки, ее относят к бактериям рода Salmonella.
Если по ферментативным свойствам культура нетипична и агглютинируется несколькими монорецепторными сыворотками разных серологических групп (явление параагглютинации), то культуру не относят к роду Salmonella.
При невозможности полной типизации выделенную культуру сальмонелл направляют в соответствующий научно-исследовательский институт.
Слайд 39

Для идентификации сальмонеллезных культур предлагается использовать О-фаготест — определение фагочувствительности сальмонелл

Для идентификации сальмонеллезных культур предлагается использовать О-фаготест — определение фагочувствительности

сальмонелл к О-бактериофагу. О-фаготест позволяет дифференцировать сальмонелл и непатогенных энтеробактерий: цитробактер, аэробактер, протеус и др.
Для испытания культур на чувствительность к О-бактериофагу на пластинке хорошо подсушенного мясопептонного агара (рН 7,2— 7,4) стерильной пробиркой с ровным краем делают 5—6 насечек. На каждую насечку наносят тонкой пастеровской пипеткой по 2 капли 4- или 18-часовой бульонной культуры испытуемого штамма. После подсыхания культуры наносят каплю О-бактериофага, на другую в качестве контроля наносят каплю бульона (фаг наносят в 10- или 100-кратном разведении в зависимости от указанного на этикетке). Чашки помещают в термостат при 37°С на 18—20 ч. При положительном результате на месте нанесения фага видна четко очерченная зона лизиса. При отрицательной реакции лизис культуры отсутствует. Контроль также отрицательный: отмечен рост культуры микроорганизма.

Фаготипизирование

Слайд 40

Род Salmonella

Род Salmonella

Слайд 41

Сущность метода заключается в изучении морфологических, культуральных, ферментативных свойств этих бактерий.

Сущность метода заключается в изучении морфологических, культуральных, ферментативных свойств этих

бактерий.
Наличие на средах в чашках Петри вуалеобразного налета (Н-форма), при микроскопии которого обнаруживают полиморфные грамотрицательные подвижные палочки, указывает на присутствие вульгарного протея. Для подтверждения наличия протея (Н-форма) производят посев в конденсационную воду свежескошенного агара (способ Шукевича). Присутствие изолированных колоний средней величины, нежных, полупрозрачных, с розоватым центром, свидетельствует о наличии нероящихся О-форм протея. При микроскопии этих колоний обнаруживают грамотрицательные неподвижные палочки. Для подтверждения наличия О-форм протеуса производят посев на агар Плоскирева. О-форма протеуса образует на этой среде прозрачные колонии с характерным запахом. Среда вокруг колоний приобретает желтый цвет в результате ее подщелачивания. Старые колонии нередко мутнеют и принимают белую окраску.

Выявление бактерий рода Proteus

Слайд 42

Сущность выявления анаэробов заключается в определении их морфологии, способности расти на

Сущность выявления анаэробов заключается в определении их морфологии, способности расти

на питательных средах в отсутствие кислорода воздуха и установлении патогенное заражением лабораторных животных.
Удовлетворительные анаэробные условия создаются в жидких питательных средах, в которых используют печень и мясо в качестве восстановления и источника питания.
Бактериологическое исследование на присутствие возбудителей анаэробных инфекций проводят при подозрении на следующие заболевания: ботулизм, энтеротоксемия овец, дизентерия ягнят, некробактериоз, столбняк, эмфизематозный карбункул (эмкар), злокачественный отек и брадзот овец.
В зависимости от подозреваемого заболевания отбор проб в лабораторию может быть различен. Так, для исследования направляют: при ботулизме — селезенку, кусочек печени, головной мозг и содержимое желудка; при энтеротоксемии овец и дизентерии ягнят — пораженную ; почку и содержимое кишечника; при некробактериозе — некротические фокусы паренхиматозных органов; при столбняке — кусочки тканей из глубоких слоев пораженных участков, гной (при наличии) и раневой секрет; при эмкаре и злокачественном отеке — кусочки пораженных мышц, лимфатические узлы, селезенку, кусочек печени и отечные ткани; при брадзоте овец — инфильтрированные ткани, подкожной клетчатки, кровь из сердца, слизистые оболочки сычуга и тонкого отдела кишечника. Материал заворачивают в целлофан или пергаментную бумагу, а жидкость (кровь, содержимое желудка и кишечника) помещают во флаконы, плотно закрывают резиновыми пробками и заливают сургучом. Кровь разрешается запаивать в пипетки.

Методы обнаружения анаэробов

Слайд 43

Диагноз на анаэробные инфекции ставят на основании бактериоскопии, посева материала на

Диагноз на анаэробные инфекции ставят на основании бактериоскопии, посева материала

на питательные среды и биопробы на лабораторных животных.
К анаэробам, представляющим большую опасность для людей и животных, относят Cl. botulinum и Сl. реrfringers.
Cl. botulinum — слабо подвижная палочка длиной 4—8 мкм и шириной 0,6—0,8 мкм, по Граму окрашивается положительно. Спора обычно располагается на конце палочки, в связи с чем споровые формы микроба имеют вид теннисной ракетки или короткой свечи с пламенем. Вегетативные формы Cl. botulinum инактивируются при 80°С течение 30 мин., а споры, не погибают при кипячении даже в течение 4—5 ч. Cl. botulinum относят к группе сапрофитных почвенных микробов, широко расространенных в природе. Различают шесть серотипов этого возбудителя (А, В, С, Е, D, F), которые обладают различной патогенностью по отношению к животным и человеку. Последние заболевают ботулизмом только при проникновении в их организм токсинов, накопившихся в продуктах и кормах.
Слайд 44

Clostridium botulinum

Clostridium botulinum

Слайд 45

Cl. perfringens — короткая, спорообразующая, неподвижная, грамположительная палочка, анаэроб. Существуют 6

Cl. perfringens — короткая, спорообразующая, неподвижная, грамположительная палочка, анаэроб. Существуют

6 типов Cl. perfringens, обозначаемых начальными буквами латинского алфавита. Некоторые представители этих типов могут быть патогенными. Типы В, С, D, E являются возбудителями энтеротоксемии различных животных, а тип С также и возбудителем некротического энтерита людей.
В отличие от ботулизма пищевые заболевания, связанные с заражением продуктов Cl. perfringens, по-видимому, следует отнести к токсикоинфекциям.
Для бактериоскопии готовят 2—5 мазков-отпечатков Из каждой присланной пробы и окрашивают по Граму Или метиленовой синью, а при необходимости — на споры или капсулы. При микроскопировании обращают внимание на форму, наличие спор и капсул и расположение отдельных микроорганизмов.
Для посева на питательные среды пробы обжигают и навеску массой около 10 г растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором в соотношении 1 : 2.
По 3—5 мл приготовленной взвеси засевают в четыре большие пробирки с мясной средой типа Тароцци, залитой слоем вазелинового масла толщиной 0,5 см, предварительно прогретой в кипящей водяной бане в течение 20—30 мин., а затем быстро охлажденной до температуры не ниже 50 °С. Посевы перед термостатированием прогревают при температуре 80°С в течение 20 мин. (две пробирки); при исследовании на Cl. botulinum типа Е одну пробирку прогревают при температуре 60 °С в течение 15 мин. (при этом сохраняются споры Cl. botulinum E), а другую при 80 °С в течение 20 мин. Остальные пробирки оставляют непрогретыми.
Слайд 46

При подозрении на Cl. botulinum для выявления типа Е пробирки —

При подозрении на Cl. botulinum для выявления типа Е пробирки

— одну непрогретую и одну прогретую до 60 °С — выдерживают при температуре 28°С.
Другие пробирки (непрогретую и прогретую при 80 °С) инкубируют при температуре 37 °С для выявления остальных анаэробов.
Термостатирование проводят в течение 5—10 сут.; наблюдают за ростом ежедневно. При обнаружении роста осуществляют микроскопическое исследование.
Для биологической пробы можно использовать присланный материал, а также чистую культуру. При подозрении на ботулизм биопробу ставят на белых мышах (реакция нейтрализации токсина противоботулинической сывороткой). Для этого исходный материал растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1 :2, для экстрагирования токсина выдержи­вают 1 —1,5 ч при комнатной температуре, а затем филь­труют через ватно-марлевый фильтр или центрифугиру­ют при 3000 об/мин в течение 15—20 мин.
Далее проводят реакцию нейтрализации токсина; к 0,5—0,8 мл фильтрата (центрифугата) добавляют 0,24 мл смеси диагностических, моновалентных, противоботулинических сывороток типа А, В, С, D, E, F (по 0,04 мл каждого типа).
Двум мышам вводят внутривенно или внутрибрюшинно по 0,5—0,8 мл исследуемого фильтрата. Центрифугат вводят в такой же дозе только внутривенно. Другим двум мышам вводят смесь фильтрата (центрифугата) и сыворотки, где токсин находится в нейтрализованном состоянии (контроль).
Слайд 47

Аналогичный эксперимент можно провести с 6—7-месячной культурой, выращенной на печеночном бульоне.

Аналогичный эксперимент можно провести с 6—7-месячной культурой, выращенной на печеночном

бульоне. Пастеровской пипеткой отсасывают верхний слой культуры, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и вводят белым мышам в той же дозе.
Если при введении необработанного противоботулинической сывороткой фильтрата мыши погибли, биопроба считается положительной, то есть в исследуемом материале имеется токсин. Мыши, которым вводили смесь фильтрата (центрифугата) с сывороткой, выживают.
В случае гибели всех четырех мышей повторяют реакцию нейтрализации токсина в фильтрате (центрифугате) в разведении в 5, 10, 20 и более раз и вновь ставят биопробу.
При обнаружении в присланных пробах ботулинического токсина сразу же ставят развернутую реакцию нейтрализации с типоспецифическими диагностическими сы­воротками для определения типа токсина.
При подозрении на энтеротоксемию овец и дизентерию ягнят взвесь в дозе 0,5—1 мл вводят внутримышечно кроликам или морским свинкам (гибель в течение суток); при подозрении на некробактериоз заражают подкожно кролика в область уха или мышь в область живота (по­являются некрозы); при подозрении на столбняк — вводят подкожно фильтрат из культуры в дозе 0,5—0,8 мл белым мышам в область корня хвоста (погибают на третьи-четвертые сутки); при подозрении на эмкар — заражают внутримышечно взвесью в дозе 0,5—1 мл мор­скую свинку (погибает через 16—96 ч.); при подозрении на злокачественный отек — вводят внутримышечно взвесь. в дозе 1 мл морской свинке или мышке (погибают через 12—24 ч.); при подозрении на брадзот овец заражают взвесью подкожно или внутримышечно морскую свинку в дозе 1 мл (погибает через одни-двое суток).
Слайд 48

Clostridium perfringens

Clostridium perfringens

Слайд 49

Слайд 50

Слайд 51

Слайд 52

Микобактерии — это микроорганизмы, обладающие способностью при культивировании на питательных средах

Микобактерии — это микроорганизмы, обладающие способностью при культивировании на питательных

средах образовывать длинные нити со вздутиями на концах, и виде колбочек. Под микроскопом они похожи на мицелий плесневых грибов. Среди микобактерий различают патогенные виды и сапрофиты. Последние широко распространены в природе.
Патогенные микобактерии — возбудители ряда инфекционных заболеваний животных и человека. Они вызывают туберкулез многих видов сельскохозяйственных животных, а также паратуберкулез крупного рогатого скота.
Обнаружение возбудителя туберкулеза. Существует пять видов микобактерий туберкулеза: М. tuberculosis, М. bovis, M. avium, M. murium, M. poykilothermorum. Сущность метода выявления этих микроорганизмов и их видовая типизация заключается в определении по мор фологии, скорости и характеру роста на питательных средах, по патогенности и другим свойствам. Микобактерии туберкулеза — тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки с закругленными краями. Располагаются изолированно или группами. Спор и капсул не образуют, неподвижны, кислото- и спиртоустойчивы.
Ввиду гидрофобности оболочек грамокраску микобактерий проводят модифицированным методом (по Грам — Мухе). Вначале мазок окрашивают карболовым метилвиолетом с подогреванием до появления паров, затем Краску сливают, а мазок обрабатывают раствором Люголя с последующим обесцвечиванием поочередно 5%-ной азотной кислотой, 3 %-ной соляной кислотой и смесью ацетона и алкоголя. Дополнительно препарат окрашивают сафранином или разведенным фуксином. При микроскопии на красном фоне видны фиолетовые микобактерии.

Методы обнаружения микобактерий

Слайд 53

В лаборатории из присланного материала (кусочки печени, селезенки, легких и лимфоузлов)

В лаборатории из присланного материала (кусочки печени, селезенки, легких и

лимфоузлов) делают мазки, фиксируют их на пламени и окрашивают по Цилю— Нильсену. Микобактерии можно обнаружить не в каж­дом случае, поэтому просматривают 100—200 полей зрения. Для бактериоскопического исследования применяют люминесцентный анализ: простое флуорохромирование или иммунофлуоресцентный метод.
Если в исследуемом материале туберкулезных микобактерий слишком мало, то прибегают к обогащению — центрифугированию или флотации. Для этого материал измельчают, растирают в ступке, заливают 1 %-ным раствором едкого натра, размешивают и переносят в колбу, которую встряхивают 10—15 мин. Затем содержимое центрифугируют 10 мин., надосадочную жидкость сливают, осадок нейтрализуют кислотой и из него делают мазки.
Метод флотации основан на адсорбции углеводорода­ми (ксилолом, бензином, лигроином) микобактерий туберкулеза и всплывании последних вместе с ними. Этот метод применяют при исследовании молока и мокроты, реже — бронхиальной слизи, экссудата, суспензий из растертых органов и тканей.
Питательные среды для культивирования микобактерий делят на: глицериносодержащие (простые) и элективные (белковые и безбелковые). К первым относят глицериновый мясо-пептонный бульон и агар, а также глицериновый картофель. Ко вторым относят среды: Петраньяни, Гельберга, Левенштейна — Йенсена, а так же безбелковые среды: Сотона, Моделя и др.
Слайд 54

Для получения культур микобактерий туберкулеза материал перед посевом обрабатывают по методу

Для получения культур микобактерий туберкулеза материал перед посевом обрабатывают по

методу Л, П. Аликаевой или Гона. По методу А. П. Аликаевой, материал разрезают на кусочки размером 0,5 см2, помещают в ступку и заливают 3—6 %-ным раствором серной кислоты на 10—20 мин. Затем кусочки тканей промыва­ют 5 мин физиологическим раствором и растирают. Из полученной суспензии делают посевы и готовят мазки.
На жидких питательных средах с глицерином рост микобактерий туберкулеза проявляется в виде пленки только через 30—30 сут., а иногда и позже.
На плотных питательных средах они образуют вначале едва заметные микроколонии, которые затем увеличиваются и приобретают различные размеры. Они могут быть мелкими, крупными, блестящими или матовыми, гладкими или шероховатыми. Располагаются коло­нии единично, однако может быть и сплошной рост.
Для биологического исследования используют тот же материал, который был приготовлен для посева на питательные среды, а серную кислоту, находящуюся в нем, необходимо нейтрализовать стерильным 10 %-ным раствором двууглекислой соды. Заражают кроликов, морских свинок, а при необходимости и кур. Биопроба наряду с бактериоскопическим, культуральным и биохимическим методами позволяет определить вид микобактерий туберкулеза.
Слайд 55

Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis

Слайд 56

Mycobacterium bovis

Mycobacterium bovis

- Предыдущая
Сосна звичайна
Следующая -
ЯЩУР Aphtae epizooticae

Похожие презентации

Эффективные методы по управлению персоналом Работу выполнил Студент группы 21 О Красюк С.И.
Организационные структуры в проектах. Управление проектами
Информационные технологии в защите баз данных таможенных органов в свете вступления России в ВТО Студентка 2 курса Экономическо
Шрифты чертежные. Начертание строчных и прописных букв
Гипотеза де-Бройля.Опыты по дифракции электронов
Состояние международного миграционного движения Подготовил: Майстренко Денис Козлов Артур Группа Т-115
Презентация Место и роль трудового права в системе Российской системы права
Политический режим. Всеобщий контроль за жизнью общества
Национальные праздники и традиции Беларуси
Фестиваль практики 2010
Настройка интернета
г.Днепропетровск, 2007
Условные обозначения наиболее часто встречающихся элементов электрических схем электронных устройств
Определить недостающие проекции точки А(А2) и В(В1). (задача 15)
Система подготовки спортсмена
Биохимические закономерности адаптации к мышечной работе
Опухоли почки
Особенности и специфика религиозно-политического экстремизма
Безопасность детей в интернете
Влияние физических нагрузок на сердечно - сосудистую систему
Общие условия главного судебного разбирательства
Культура в меняющемся мире. (9, 11 класс)
Всемирная паутина. Электронная почта
КАДРЫ ПРЕДПРИЯТИЯ
Ортогональные проекции прямой
Государственное устройство и его формы
Плоские железобетонные перекрытия (монолитное перекрытие)
Презентация "Стилевое многообразие искусства XVII-XVIII веков" - скачать презентации по МХК
Вы можете прислать нам Вашу презентацию и мы опубликуем ее на сайте.
Обратная связь
Для правообладателей
Email: Нажмите что бы посмотреть