Поиск, Идентификация и отбор трансформированных клеток, содержащих в рекомбинантной ДНК заданный структурный ген

Сентябрь 3, 2022

Главная
Алгебра
Поиск, Идентификация и отбор трансформированных клеток, содержащих в рекомбинантной ДНК заданный структурный ген

Содержание

2. Прием (техника) инактивации маркера вставки Клетки инокулируют на ПС и создают условия для их размножения и
3. клетки с рекомбинантной плазмидой высевают на плотную ПС. Образуются колонии (клоны) клеток, которые содержат разные гены
4. В какую из тысяч трансформированных клеток (или фагов) попал интересующий нас ген? Как распознать клон, несущий
5. Методы идентификации генов, кодирующих определенные белки, из геномных библиотек Скрининг путем гибридизации с меченым ДНК-зондом Иммунологический
6. 1. СКРИНИНГ ПУТЕМ ГИБРИДИЗАЦИИ С МЕЧЕНЫМ кДНК-ЗОНДОМ кДНК-ЗОНД - РАДИОАКТИВНО МЕЧЕНАЯ ДНК, ХАРАКТЕРНАЯ ДЛЯ КОНКРЕТНОГО СТРУКТУРНОГО
7. Гибридизация с меченым ДНК-зондом. Схема
8. Гибридизация нуклеиновых кислот — соединение in vitro комплементарных одноцепочечных нуклеиновых кислот в одну двухцепочечную молекулу. Возможна
9. Протокол гибридизации ДНК
10. ДНК-гибридизация. Схема
11. Скрининг геномной библиотеки ДНК путем гибридизации с меченым ДНК-зондом. Схема
12. Поиск рекомбинантных клонов методом радиоавтографии
13. 2. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ СКРИНИНГ Используется, если отсутствует ДНК-зонд или его невозможно создать
14. Иммунологический скрининг Обязательные процедуры: выделяют нужный белок и тщательно очищают от примесных белков; иммунизируют им экспериментальных
16. Скачать презентацию

Слайд 2

Прием (техника) инактивации маркера вставки
Клетки инокулируют на ПС и создают условия

для их размножения и роста.
Каждая клетка даст колонию клеток с рекДНК

Слайд 3

клетки с рекомбинантной плазмидой высевают на плотную ПС.
Образуются колонии (клоны)

клеток, которые содержат разные гены одного и того же организма

Совокупность колоний клеток, содержащих разные рекДНК (гены) одного организма = ГЕНОМНАЯ БИБЛИОТЕКА

Различные фрагменты ДНК (гены) одного организма с одинаковой векторной ДНК

Слайд 4

В какую из тысяч трансформированных клеток (или фагов) попал интересующий нас

ген?
Как распознать клон, несущий рекДНК с тем самым геном, который кодирует нужный белок (продукт)?

Слайд 5

Методы идентификации генов, кодирующих определенные белки, из геномных библиотек
Скрининг путем

гибридизации с меченым ДНК-зондом
Иммунологический скрининг

Слайд 6

1. СКРИНИНГ ПУТЕМ ГИБРИДИЗАЦИИ С МЕЧЕНЫМ кДНК-ЗОНДОМ кДНК-ЗОНД - РАДИОАКТИВНО МЕЧЕНАЯ

ДНК, ХАРАКТЕРНАЯ ДЛЯ КОНКРЕТНОГО СТРУКТУРНОГО ГЕНА.

Наиболее распространенный способ

Слайд 7

Гибридизация с меченым ДНК-зондом. Схема

Слайд 8

Гибридизация нуклеиновых кислот —
соединение in vitro комплементарных одноцепочечных нуклеиновых кислот

в одну двухцепочечную молекулу.
Возможна гибридизация молекул:
одноцепДНК - ДНКодноцеп
одноцепДНК - РНК

Слайд 9

Протокол гибридизации ДНК

Слайд 10

ДНК-гибридизация. Схема

Слайд 11

Скрининг геномной библиотеки ДНК путем гибридизации с меченым ДНК-зондом. Схема

Слайд 12

Поиск рекомбинантных клонов методом радиоавтографии

Слайд 13

2. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ СКРИНИНГ
Используется, если отсутствует ДНК-зонд или его невозможно создать

Слайд 14

Иммунологический скрининг
Обязательные процедуры:
выделяют нужный белок и тщательно очищают от примесных белков;
иммунизируют

им экспериментальных животных с целью выработки АТ к этому белку (используют как АГ);
выделяют выработанные АТ животного и очищают;
очищенные АТ используют для скрининга геномных библиотек