ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАции ДНК МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ или ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ

Сентябрь 3, 2022

Главная
Алгебра
ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАции ДНК МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ или ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ

Содержание

2. Herbert Boyer Courtesy Genentech Stanley Cohen, Stanford University professor Показали, что объединив генетические элементы из разных
3. Общий принцип рекомбинации ДНК
4. ОСНОВНЫЕ СТАДИИ ТЕХНОЛОГИИ РЕКДНК в биотехнологическом производстве ЛС
5. Ферменты, используемые в технологии рекомбинации ДНК РЕСТРИЦИРУЮЩИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ (рестриктазы) ДНК-лигаза БАКТЕРИОФАГА Т4
6. ТАТА ТТGAC ТАС Сайт-промотор Сайт-терминации ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ АТТ АТС При молекулярном клонировании важно, чтобы
7. Расщепление ДНК рестриказой EcoRI Образование «липких» концов EcoRI EcoRI гуанин
8. Рестриктазы и расщепляемые ими последовательности ДНК крупнощепящая крупнощепящая крупнощепящая мелкощепящая мелкощепящая
9. Расщепление ДНК рестриказой Hind II Hind II Hind II «т у п ы е» к о
10. ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHI Фрагменты ДНК «слона» Фрагменты ДНК «лягушки» рекДНК
11. Лигирование липких концов ДНК-лигазой Т4
12. Лигирование тупых концов ДНК-лигазой Т4
13. Расщепление молекул ДНК рестриктазой и соединение полученных фрагментов ДНК-лигазой.
14. Объединение разных молекул ДНК само по себе бесполезно, если вновь образованные рекДНК не будут реплицироваться в
15. КЛОНИРУЮЩИЕ ВЕКТОРЫ Vehicle – англ. , повозка , транспортное средство
16. Вектор (в технологии рекДНК) Это молекула ДНК, способная самостоятельно реплицироваться в клетках различных организмов и обеспечивать
18. Плазмидные векторы
19. ПЛАЗМИДЫ
20. Плазмидный вектор pBR322 создатели - Боливар Ф., Родригес Р.
21. Технология рекомбинации ДНК с применением плазмидного вектора клеток E. Coli или др. реципиентов
22. ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗОВАВШИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHI Фрагменты ДНК плазмиды Фрагменты донорной ДНК рекДНК
23. Модификации плазмидных векторов Для всех рутинных процедур молекулярного клонирования широко используют E.coli в качестве клетки-хозяина. Но
24. Векторы на основе бактериофага
25. Структура бактериофага λ Escherichia coli. Схема
26. Бактериофаг λ Escherichia coli «Портрет» электронномикроскопический
27. Инфицирование фагом λ клетки E.coli После адсорбции фага на поверхности клетки белковый отросток (чехол) сокращается, проталкивая
29. Скачать презентацию

Слайд 2

Herbert Boyer Courtesy Genentech
Stanley Cohen,
Stanford University professor
Показали, что

объединив генетические элементы из разных источников (организмов), можно создать новую реплицирующуся генетическую структуру с новыми свойствами.

Слайд 3

Общий принцип рекомбинации ДНК

Слайд 4

ОСНОВНЫЕ СТАДИИ ТЕХНОЛОГИИ РЕКДНК в биотехнологическом производстве ЛС

Слайд 5

Ферменты, используемые в технологии рекомбинации ДНК
РЕСТРИЦИРУЮЩИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ (рестриктазы)
ДНК-лигаза БАКТЕРИОФАГА Т4

Слайд 6

ТАТА
ТТGAC
ТАС
Сайт-промотор
Сайт-терминации
ИНИЦИАЦИЯ
ТРАНСКРИПЦИИ
ТЕРМИНАЦИЯ
ТРАНСКРИПЦИИ
АТТ АТС
При молекулярном клонировании важно, чтобы расщепление

донорной и векторной ДНК происходило в строго определенных участках ДНК (сайтах) с образованием дискретного и воспроизводимого набора нуклеотидов.

Ген регуляции

Если разрез ДНК окажется внутри гена, то такой разрез приведет к его инактивации

Слайд 7

Расщепление ДНК рестриказой EcoRI
Образование «липких» концов
EcoRI
EcoRI
гуанин

Слайд 8

Рестриктазы и расщепляемые ими последовательности ДНК
крупнощепящая
крупнощепящая
крупнощепящая
мелкощепящая
мелкощепящая

Слайд 9

Расщепление ДНК рестриказой Hind II
Hind II
Hind II
«т у п ы е»

к о н ц ы

Слайд 10

ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHI
Фрагменты ДНК «слона»
Фрагменты

ДНК «лягушки»

рекДНК

Слайд 11

Лигирование липких концов ДНК-лигазой Т4

Слайд 12

Лигирование тупых концов ДНК-лигазой Т4

Слайд 13

Расщепление молекул ДНК рестриктазой и соединение полученных фрагментов ДНК-лигазой.

Слайд 14

Объединение разных молекул ДНК само по себе бесполезно, если вновь образованные

рекДНК не будут реплицироваться в клетке-хозяине и экспрессироваться.

Для доставки чужеродных генов в клетки различных организмов применяют ВЕКТОРЫ.

Как полученные гибридные гены ввести в клетку и заставить там работать – производить белки?

Слайд 15

КЛОНИРУЮЩИЕ ВЕКТОРЫ
Vehicle – англ. , повозка , транспортное средство

Слайд 16

Вектор (в технологии рекДНК)
Это молекула ДНК, способная самостоятельно реплицироваться в клетках

различных организмов и обеспечивать клонирование (размножение) и экспрессию встроенного в нее искусственно какого-либо гена

Слайд 17

Слайд 18

Плазмидные векторы

Слайд 19

ПЛАЗМИДЫ

Слайд 20

Плазмидный вектор pBR322 создатели - Боливар Ф., Родригес Р.

Слайд 21

Технология рекомбинации ДНК с применением плазмидного вектора
клеток E. Coli или др.

реципиентов

Слайд 22

ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗОВАВШИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHI
Фрагменты ДНК плазмиды
Фрагменты

донорной ДНК

рекДНК

Слайд 23

Модификации плазмидных векторов
Для всех рутинных процедур молекулярного клонирования широко используют E.coli

в качестве клетки-хозяина. Но часто могут выступать и другие бактерии, например Bacillus subtilis. Клетки, способные воспринять чужеродную ДНК, называются компетентными.
Часто в векторы, которые функционируют в кишечной палочке, встраивают второй сайт ORIGIN, который инициирует их репликацию в других клетках (не в кишечной палочке). Эти так называемые ЧЕЛНОЧНЫЕ ВЕКТОРЫ позволяют сначала проводить внедрение рекДНК в клетки кишечной палочки, а затем в клетки других бактерий.
Созданы плазмидные вектора, которые содержат универсальный сайт origin для широкого спектра хозяев. Их можно использовать для работы с разными микроорганизмами.
С помощью плазмидных векторов можно клонировать фрагменты ДНК длиной до 10 т.п.н. Однако часто приходится работать с более крупными фрагментами.

Слайд 24

Векторы на основе бактериофага

Слайд 25

Структура бактериофага λ Escherichia coli. Схема

Слайд 26

Бактериофаг λ Escherichia coli
«Портрет» электронномикроскопический

Слайд 27

Инфицирование фагом λ клетки E.coli
После адсорбции фага на поверхности клетки белковый

отросток (чехол) сокращается, проталкивая стержень внутрь клетки. Через стержень фаговая ДНК проникает внутрь клетки. Процесс облегчается благодаря местному повреждению клеточной стенки фаговым лизоцимом. Некоторые вирусы впрыскивают в клетку свою ДНК, другие проникают в нее сами.

ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАции ДНК МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ или ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ

Содержание

Herbert Boyer Courtesy Genentech Stanley Cohen, Stanford University professor Показали, что

Общий принцип рекомбинации ДНК

ОСНОВНЫЕ СТАДИИ ТЕХНОЛОГИИ РЕКДНК в биотехнологическом производстве ЛС

Ферменты, используемые в технологии рекомбинации ДНКРЕСТРИЦИРУЮЩИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ (рестриктазы) ДНК-лигаза БАКТЕРИОФАГА Т4

ТАТАТТGACТАССайт-промоторСайт-терминацииИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ АТТ АТСПри молекулярном клонировании важно, чтобы расщепление

Расщепление ДНК рестриказой EcoRI Образование «липких» концовEcoRIEcoRIгуанин

Рестриктазы и расщепляемые ими последовательности ДНКкрупнощепящаякрупнощепящаякрупнощепящаямелкощепящаямелкощепящая

Расщепление ДНК рестриказой Hind IIHind IIHind II«т у п ы е»

ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHIФрагменты ДНК «слона»Фрагменты