Векторы на основе бактериофага

ФАГОВ

концы соединяются и образуется кольцевая молекула, подобная плазмиде, которая способна реплицироваться автономно за счет эксплуатации ферментов и нуклеотидов клетки-хозяина.

Схема строения фаговой ДНК

сos-Сайт

ФАГА

для размножения фага, отв. за встраивание в ДНК клетки-хозяина (т.е. за путь лизогении) = 20 т.п.н.

сегмент I/E
integration/excision

Bam HI

20 т.п.н.

которая несущественна для размножения фага (I/E) фрагментом донорной ДНК, кодирующей синтез полезных БАВ.
Условие: донорная ДНК должна иметь размер, эквивалентный размеру исключенного участка ДНК, т.е. 20 тпн.

чашку Петри с плотной питательной средой на основе агара.
Инкубация
Клетки, не содержащие ДНК фага, размножаются на агаре и дают мутный "газон", заполняющий всю поверхность чашки.
В тех точках, куда попали бактерии с ДНК фага, остаются прозрачные просветы - бляшки (негативные колонии).
Образование бляшек связано с тем, что ДНК фага реплицируется в клетке и дает зрелые фаговые частицы. Затем фаговые частицы попадают в среду, заражают окружающие клетки и разрушают их. В результате каждая бляшка состоит из потомков фагов, содержащих одну и ту же ДНК - копию ДНК, попавшей в клетку.
Негативные колонии, образованные «рекомбинантными» фагами, идентифицируют и выделяют с помощью методов иммунологического скрининга, радиоавтографии и др. (см. ниже)