Изучение гидролиза крахмала

шаг 2, шаг 3шаг 1, шаг 2, шаг 3, шаг 4)
Результаты измерений
Расчеты
Итоговый график
Выводы
Список литературы

Главный слайд

остатков глюкозы. Он синтезируется растениями и откладывается в них в качестве запасного питательного вещества.

Химическая формула крахмала: (C6H10O5)n

Содержание

результате специальной обработки с целью получения заданных свойств.
Модификация позволяет получать жидкокипящие, набухающие и экструзионные крахмалы.

 α-амилаза – это фермент поджелудочной железы, который гидролизует крахмал в желудочно-кишечном тракте. При разложении крахмала образуются более простые углеводы – мальтоза и глюкоза.

Крахмалу свойственно набухание – это способность медленно и в определенной мере впитывать холодную воду, не растворяясь в ней.

Содержание

и субстрата

расчет конечной концентрации глюкозы в зависимости от времени гидролиза крахмала

Цели и задачи

Содержание

соотношение подбиралось таким образом, чтобы при скпетрофотометрическом определении данные попадали в пределы от 0,2 до 0,6-0,8. В этих пределах значения прибора (спектрофотометра) содержат наименьшую вероятность ошибки.
Крахмал: модифицированный, хладонабухающий «Прежефло» Е1422 (от «Милорадо») из восковой кукурузы. Точная навеска в эксперименте:
m крахмала = 4,000г на 100мл дистиллированной воды. С крахмала = 40мг/мл. Раствор крахмала готовится при непрерывном помешивании с помощью магнитной мешалки. Магнитную мешалку помещаем в стакан со 100 мл дистиллированной воды и медленно, маленькими порциями, равномерно добавляем в него крахмал.
Фермент: α-Amylase from hog pancreas, Mr 50000, активность 57U.
Точная навеска в эксперименте: m фермента = 0,501г на 4,998 мл воды. С фермента = 100мг/мл. После разведения фермент фильтруется.

Содержание

содержащие буферную смесь, предназначенную для приготовления рабочего раствора, в состав которого входят: трис-бициновый буфер 0,1М, n-фенолсульфонат 20мМ, 4-аминоантипирин 1,2 мМ. Каждый флакон рассчитан на приготовление 50 мл буферного раствора.
Реагент 2. 4 флакона, содержащие смесь лиофилизированных ферментов: глюкозооксидазы, активность в конечном растворе 20000 Е/л, и пероксидазы, активность в конечном растворе 10000 Е/л. Каждый флакон рассчитан на приготовление 50 мл основного реагента. Реагент 1 перенести в мерную колбу емкостью 50 мл и довести до 50 мл дистиллированной водой. Затем Реагент 2 растворить в 50 мл раствора Реагента 1. Раствор должен быть прозрачным.
Виала - сосуд объемом 20 мл, используемый в эксперименте.
Глюкоза-моногидрат: Mr = 198,17, чистота 99,5%;
Точная навеска в эксперименте: m глюкозы-моногидрата = 40,5 мг доводим водой до 40,5мл. С глюкозы = (40,5мг/40,5мл)*(180/198) = 0,9091мг/мл – концентрация чистой глюкозы.

Содержание

в присутствии фермента (панкреатическая панкреатическая αпанкреатическая α-амилаза). В эксперименте использовался модифицированный хладонабухающий крахмал с концентрацией С = 40 мг/мл.
Расчет концентраций разведений матричного р-ра фермента
(0,5 мг на 5 мл воды, С = 100 мг/мл.):

Содержание

взять
24 виалы с 5 мл раствора реагента в каждой.

Возьмём 4 пробы
фермента различных концентраций, в каждой ставим по 3 параллели

Для гидролиза
к 5 мл крахмала добавим 0,35 мл фермента.

Измерения оптической плотности проведем
в 2 точках: 20 и 40 минут – время инкубации смеси крахмал/фермент.

Содержание

опытной пробы относительно калибровочной. Расчет в каждой серии проводится по формуле:
 Еоп/ Екп*С(глюкозы в растворе) = содержание глюкозы в образце (ммоль/л), где:
Еоп – поглощение опытной пробы,
Екп – поглощение калибровочной пробы.
Приготовление калибровочного раствора:
Взвешиваем в колбе или стаканчике 0,05 г моногидрат глюкозы, доводим дистиллированной водой до 50 мл.
В эксперименте была поставлена промежуточная задача – оценить
влияние беспрерывного помешивания инкубируемой смеси на степень
гидролиза крахмала.
Ставим ещё одну параллель с концентрацией фермента 100 мг/мл (без перемешивания во время инкубации), для нее также берем точки 20 и 40 минут.

Содержание

в каждую) и добавляем в них по 0,35 мл фермента с различными концентрациями (40,60,80 и 100мг/мл). Все сосуды перемешиваем в одном ритме на протяжении всего инкубационного периода, а одну виалу (с концентрацией 100мг/мл) - только в момент добавления фермента.
Предварительно разлив во все виалы по 5 мл рабочего реагента, на 20-ой минуте после начала инкубации добавляем по 50 мкл смеси крахмал/фермент в раствор реагента и отставляем для развития окраски на 1 час.
То же самое повторяем
на 40-ой минуте.

Содержание

поглощение/оптическая плотность опытной и калибровочной проб

Содержание

= (D1 + D2 + D3)/3

С об. = D оп. /D калибр. *С глюкозы

Содержание

одной и той же концентрации фермента видно, что на малых временных отрезках они отличаются незначительно.
При измерении оптической плотности инкубационной смеси, добавленной на 20-ой минуте, даже спустя час значительного изменения окраски растворов не происходит. Поэтому время инкубации может быть определено не столь строго, так как это мало влияет на величину оптической плотности.
С увеличением концентрации фермента растет оптическая плотность растворов опытных образцов и, соответственно, количество глюкозы в полученных образцах.

Содержание

практике, которая проводилась на базе НИИ Питания РАМН в лаборатории «Обмена веществ и энергии» под руководством к.м.н, старшего научного сотрудника Соколова А.И.

Презентация выполнена
студенткой 4-го курса
отделения биохимии МБФ (группа 482)
Федосеевой Евгенией Сергеевной.
e-mail: dorigen@mail.ru

В ходе работы был проведен ряд экспериментов, раскрывающих особенности гидролиза крахмала.
Моя презентация посвящена проблеме влияния различных концентраций фермента на субстрат и нахождения оптимального соотношение фермента и субстрата.

Содержание