Культивирование и выделение чистых культур анаэробов

Содержание

Слайд 2

РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ МО

РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ МО

Слайд 3

РОСТ МО НА ЖИДКИХ СРЕДАХ 1, 4 – пленочный рост 2

РОСТ МО НА ЖИДКИХ СРЕДАХ

1, 4 – пленочный рост
2 – придонный

рост
3 – пристеночный рост
5 – диффузный рост
Слайд 4

РОСТ МО НА ПОЛУЖИДКИХ СРЕДАХ Рост в виде воронки, чулка, сталактита, гвоздя…

РОСТ МО НА ПОЛУЖИДКИХ СРЕДАХ

Рост в виде воронки, чулка, сталактита, гвоздя…

Слайд 5

РОСТ МО НА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ Колония – видимое, изолированное скопление

РОСТ МО НА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

Колония – видимое, изолированное скопление МО,

образующееся в результате размножения одной материнской клетки-предшественницы на плотной питательной среде.
Чистая культура – популяция бактерий одного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде
Слайд 6

Слайд 7

ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ 1. Получение изолированных колоний из исследуемого материала Готовят

ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ

1. Получение изолированных колоний из исследуемого материала
Готовят мазок, окрашивают

его по Граму, микроскопируют. Если бактерий много, то исследуемый материал разводят в пробирке со стериальным изотоническим раствором NaCl. Исследуемый материал засевают в чашку Петри на плотную питательную среду и помещают в термостат (37 град.) на 18-24 ч.
Слайд 8

2. Пересев материала с целью накопления чистой культуры На этом этапе

2. Пересев материала с целью накопления чистой культуры
На этом этапе изучают

культуральные свойства бактерий. Для этого просматривают чашки и изучают изолированные колонии, обращая внимание на их форму, величину, консистенцию и другие признаки. Для определения морфологии клеток и их тинкториальных свойств готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют.
Слайд 9

3. Идентификация чистой культуры Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Чистая

3. Идентификация чистой культуры
Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Чистая культура

характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нем обнаруживаются морфологические и тинкториальные однородные клетки.
Слайд 10

К ОСНОВНЫМ ВИДОВЫМ ПРИЗНАКАМ БАКТЕРИЙ ОТНОСЯТСЯ: Морфология микробной клетки; Тинкториальные свойства

К ОСНОВНЫМ ВИДОВЫМ ПРИЗНАКАМ БАКТЕРИЙ ОТНОСЯТСЯ:

Морфология микробной клетки;
Тинкториальные свойства – особенности

окрашивания с помощью простых и сложных методов окраски;
Культуральные признаки – особенности роста МО на питательных средах;
Биохимические признаки – наличие у бактерий ферментов, необходимых для синтеза или расщепления различных химических соединений.
Слайд 11

К ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМ ПРИЗНАКАМ, ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ОТНОСТЯТСЯ: Наличие видоспецифических АГ;

К ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМ ПРИЗНАКАМ, ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ОТНОСТЯТСЯ:

Наличие видоспецифических АГ;
Чувствительность в

видоспецифическим бактериофагам;
Видовая резистентность к определенным АБ;
Для патогенных бактерий – продукция определенных факторов вирулентности.
Слайд 12

СОЗДАНИЕ АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЙ Учитывая, что свободный молекулярный кислород является токсичным для

СОЗДАНИЕ АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЙ

Учитывая, что свободный молекулярный кислород является токсичным для облигатно-анаэробных

бактерий, обязательным условием культивирования таких микроорганизмов является ограничение его доступа. Существует ряд методов (механических, физических, биологических), которые позволяют это обеспечить.
Слайд 13

ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Для удаления растворенного в питательных средах кислорода используют их

ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Для удаления растворенного в питательных средах кислорода используют их регенерацию

путем кипячения в течение 15-20 минут на водяной бане с последующим быстрым охлаждением до 50 градусов. После посева поверхность среды заливают парафином или вазелиновым маслом. Так же, возможен посев в столбик плотной или полужидкой среды на глубину 10-12см. кислород с воздуха диффундирует на 1,5-2см, а в глубине создаются благоприятные условия.
Применение анаэростатов и анаэробных боксов.
Слайд 14

ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Для поглощения кислорода из замкнутого пространства можно использовать гидросульфит

ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Для поглощения кислорода из замкнутого пространства можно использовать гидросульфит натрия.

Для связывания кислорода в 1л объема используют 100мл свежеприготовленного 20% Na2S2O4 и 16мл 50% КОН.
Для связывания остатков кислорода используют вещества-редуценты, к которым относится тиогликолевая кислота или тиогликолят натрия, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и цистеин, муравьинокислый натрий и т.д.
Слайд 15

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Совместно выращивание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). При нем

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Совместно выращивание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). При нем на

одну половину чашку засевают исследуемый материал, а на другую – культуру аэробного или факультативно-анаэробного микроба, способного энергично поглощать кислород.
Помещают в среду кусочки печени, почек, мозга. При этом тканевые клетки активно поглощают и адсорбируют кислород, а в среде создаются анаэробные условия.