Морфологическое исследование мазков крови

Содержание

Слайд 2

Слайд 3

Слайд 4

Гистологический препарат любой формы должен отвечать следующим требованиям: сохранять прижизненное состояние

Гистологический препарат любой формы должен отвечать следующим требованиям:

сохранять прижизненное состояние структур;
быть

достаточно тонким и прозрачным для изучения его под микроскопом в проходящем свете;
быть контрастным, то есть изучаемые структуры должны под микроскопом четко определяться;
препараты для световой микроскопии должны долго сохраняться и использоваться для повторного изучения.
Слайд 5

Приготовление мазков крови Мазки готовить из свежей, нативной крови. Из цитратной

Приготовление мазков крови

Мазки готовить из свежей, нативной крови.
Из цитратной

и оксалатной крови мазки можно приготовить до 6 ч после ее взятия, из гепаринизированной — до 24 ч.
Мазки крови готовят на предметных стеклах, которые нужно соответствующим образом подготовить.
Слайд 6

Техника приготовления мазков Предметное стекло берут между большим и указательным пальцами

Техника приготовления мазков

Предметное стекло берут между большим и указательным пальцами левой

руки. Отступя на 1 см от края стекла, лежащего ближе к указательному пальцу, наносят небольшую (диаметром 2 — 3 мм) каплю крови - путем прикосновения поверхностью предметного стекла к капле крови на месте ее появления после прокола кожи. 
Слайд 7

Техника приготовления мазков при изготовлении мазков из крови, взятой в пробирки,

Техника приготовления мазков

при изготовлении мазков из крови, взятой в пробирки, каплю

ее наносят с помощью глазной или пастеровской пипетки или краем пробки.
правой рукой устанавливают вблизи от капли крови шлифованное стекло под углом 30 — 45° и осторожно продвигают его до соприкосновения края стекла с каплей крови. После этого, плавно и не очень быстро, продвигая, справа, налево шлифованное стекло по предметному, приготовляют мазок.
Слайд 8

Слайд 9

Мазок должен начинаться на 1 — 1,5 см от края предметного

Мазок

должен начинаться на 1 — 1,5 см от края предметного стекла

и заканчиваться в 1 — 3 см от другого его края, составляя примерно 2/3 — 3/4 длины стекла.
мазок должен быть уже предметного стекла, с боков на стекле должны оставаться свободные поля шириной около 1 см.
хороший мазок не имеет перерывов, пустот, на всем протяжении одинаковый по толщине.
на высушенном мазке в начальной его части карандашом пишут порядковый номер записи исследуемых пациентов и дату взятия крови.
Слайд 10

Фиксация мазков Мазки крови необходимо в течение 2 дней после изготовления

Фиксация мазков

 Мазки крови необходимо в течение 2 дней после изготовления или

зафиксировать, или окрасить. Нефиксированные мазки через месяц теряют способность правильно окрашиваться.
Для фиксации мазки погружают в метиловый спирт (5 мин), этиловый спирт (30 мин), этиловый спирт и этиловый эфир поровну (30 мин) или денатурированный спирт (30 мин). Мазки помещают в кюветы с фиксатором и закрывают крышкой. Мазки не должны соприкасаться. После фиксации мазки высушивают на воздухе.
Слайд 11

Классические методы окраски мазков крови Мазки крови, высушенные на воздухе, окрашиваются

Классические методы окраски мазков крови

Мазки крови, высушенные на воздухе, окрашиваются специальными красителями

с целью идентификации цитоморфологически важных структур в клетках крови.
Кислые вещества клетки (выглядят базофильными) связывают основные красители.  
Основные клеточные субстанции (ацидофильные) окрашиваются кислыми красками.  
Нейтральные компоненты клетки визуализируются при помощи нейтральных растворов-красителей.
Слайд 12

Слайд 13

Слайд 14

Слайд 15

Окраска по Романовскому-Гимзе Краситель: щелочная часть (азур II - ярко-синий цвет),

Окраска по Романовскому-Гимзе

Краситель: щелочная часть (азур II - ярко-синий цвет),

кислая часть (эозин - розово-красный цвет).
В настоящее время используется готовый краситель Романовского-Гимзе, из которого перед началом работы готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды.
Высохший фиксированный мазок помещается в кювету с рабочим раствором краски на 20-30 минут (конкретное время устанавливается опытным путем для каждой партии красителя). Продолжительность окраски зависит от окружающей температуры (чем холоднее, тем продолжительнее окраска) и качества красителя.
Слайд 16

Окраска по Романовскому-Гимзе Ядра клеток - красно-фиолетовые; Эозинофильные гранулы - красновато-коричневые;

Окраска по Романовскому-Гимзе

Ядра клеток - красно-фиолетовые;
Эозинофильные гранулы - красновато-коричневые;
Базофильные гранулы -

синие;
Нейтрофильные гранулы - фиолетовые;
Цитоплазма лимфоцитов - голубая;
Эритроциты - бледно-красные;
Тромбоциты - наружная часть синяя (более светлая); внутренняя - фиолетовая (более темная).
Слайд 17

Окраска по Май-Грюнвальду Данный метод очень удобен для визуализации гранулоцитов. Для

Окраска по Май-Грюнвальду

Данный метод очень удобен для визуализации гранулоцитов.
Для окрашивания применяется

готовый раствор эозин-метиленового синего по Маю-Грюнвальду. Мазок без предварительной фиксации заливают красителем, через 5 минут промывают и высушивают.
Лимфоциты - ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: голубая;
Моноциты - ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: серо-голубая;
Гранулоциты - ядра: сине-фиолетовые; гранулы: красные, фиолетовые, темно-синие (зависит от типа);
Тромбоциты - наружная часть голубая; внутренняя - фиолетовая;
Эритроциты - розовые.
Слайд 18

Окраска по Паппенгейму комбинация двух предыдущих методов. сухие нефиксированные мазки помещаются

Окраска по Паппенгейму

комбинация двух предыдущих методов.
сухие нефиксированные мазки помещаются в кювету

с раствором Мая-Грюнвальда на 3-5 минут.
контейнер с мазками ополаскивается дистиллированной водой
мазки помещаются в кювету с разведенным раствором Романовского-Гимзы на 20-30 минут.
мазки промываются проточной водой и высушиваются.
Слайд 19

Окраска по Паппенгейму Ядра клеток - красно-фиолетовые; Цитоплазма лимфоидных клеток -

Окраска по Паппенгейму

Ядра клеток - красно-фиолетовые;
Цитоплазма лимфоидных клеток - светло-синяя;
Лимфоидная азурная

грануляция - ярко-синяя;
Миелоидная азурная грануляция - фиолетовая;
Нейтрофильные гранулы - светло-фиолетовые;
Эозинофильные гранулы - красные, красно-коричневые;
Базофильные гранулы - темно-фиолетовые, черные;
Эритроциты - розовые (полихроматофильные эритроциты - синеватые);
Тельца Жолли - красновато-фиолетовые;
Тельца Ауэра - ярко-красные.
Слайд 20

После этих последовательно проведенных процедур препарат может изучаться под световым микроскопом.

После этих последовательно проведенных процедур препарат может изучаться под световым микроскопом.

Слайд 21

Микроскопирование Основной метод исследования биологических объектов, используемым в гистологии, т. е. изучение гистологических препаратов под микроскопом.

Микроскопирование

Основной метод исследования
 биологических объектов, используемым в гистологии, т. е. изучение гистологических препаратов под

микроскопом.
Слайд 22

Виды микроскопии: световая микроскопия (разрешающая способность 0,2 мкм) наиболее распространенный вид

Виды микроскопии:

световая микроскопия (разрешающая способность 0,2 мкм) наиболее распространенный вид микроскопии;
ультрафиолетовая

микроскопия (разрешающая способность 0,1 мкм);
люминесцентная (флюоресцентная) микроскопия для определения химических веществ в рассматриваемых структурах;
фазово-контрастная микроскопия для изучения структур в неокрашенных гистологических препаратов;
Слайд 23

Виды микроскопии: поляризационная микроскопия для изучения, волокнистых структур; микроскопия в темном

Виды микроскопии:

поляризационная микроскопия для изучения, волокнистых структур;
микроскопия в темном поле для

изучения живых объектов;
микроскопия в падающем свете для изучения толстых объектов;
электронная микроскопия (разрешающая способность до 0,1–0,7 нм), две ее разновидности просвечивающая (трансмиссионная) электронная микроскопия и сканирующая или растровая микроскопии дает отображение поверхности ультраструктур.
Слайд 24

Основное отличие световой и электронной микроскопии препарат для световой микроскопии может

Основное отличие световой и электронной микроскопии

препарат для световой микроскопии может длительно

храниться и многократно использоваться.
Срезы для электронной микроскопии используются однократно. При этом вначале интересующие объекты препарата фотографируются, а изучение структур производится уже на электронограммах.
Слайд 25

Выведение лейкограммы (лейкоцитарной формулы). Окрашенные мазки крови исследуют под микроскопом с

Выведение лейкограммы (лейкоцитарной формулы).

Окрашенные мазки крови исследуют под микроскопом с иммерсией

- используют объектив х 90 и иммерсионное масло, которое после исследования удаляют с препарата.
В окрашенных мазках крови определяют величину, форму, характер окраски и структуру ядра, цитоплазмы и включений в нее, соотношение между различными формами отдельных видов клеток крови.
Слайд 26

Слайд 27

Методы дифференциального подсчета лейкоцитов Лейкограмму выводят по окрашенным мазкам крови путём

Методы дифференциального подсчета лейкоцитов

Лейкограмму выводят по окрашенным мазкам крови путём дифференциального

подсчёта под иммерсионной системой микроскопа 100 лейкоцитов.
Слайд 28

Лейкограмма (лейкоцитарная формула) - это процентное соотношение различных видов лейкоцитов: нейтрофилы лимфоциты эозинофилы моноциты базофилы

Лейкограмма (лейкоцитарная формула)
- это процентное соотношение различных видов лейкоцитов:
нейтрофилы
лимфоциты
 эозинофилы
моноциты
 базофилы

Слайд 29

Слайд 30

Четырехпольный метод. с каждой стороны мазка в начале и конце его

Четырехпольный метод.

с каждой стороны мазка в начале и конце его (т.

е. на 4 исследуемых участках) определяют по 25 лейкоцитов (всего 100 клеток).
от края мазка углубляются на 3 — 4 поля зрения, затем продвигаются на 2 — 3 поля вдоль мазка и возвращаются к его краю.
количество каждого вида лейкоцитов, обнаруженных при исследовании, регистрируют на 11-клавишном счетчике.
Слайд 31

Трехпольный метод. лейкоциты подсчитывают в 3 участках, расположенных поперек мазка (от

Трехпольный метод.

лейкоциты подсчитывают в 3 участках, расположенных поперек мазка (от

одного края до другого).
в начале мазка подсчитывают 35 клеток, в середине — 30 и в конце — 35 клеток.
Слайд 32

Однопольный метод. Лейкоцитарную формулу определяют в средней части мазка, где, проходя

Однопольный метод.

Лейкоцитарную формулу определяют в средней части мазка, где, проходя

поперек его от одного края до другого и обратно, подсчитывают 100 лейкоцитов.
Слайд 33

Методика вычисления абсолютного количества отдельных видов лейкоцитов в 1 мкл крови

Методика вычисления абсолютного количества отдельных видов лейкоцитов в 1 мкл крови 

подсчитать

количество лейкоцитов и вывести лейкограмму.
число лейкоцитов умножают последовательно на процент каждого вида клеток лейкограммы и делят на 100, получая абсолютное число отдельных форм белых кровяных телец в 1 мкл крови.
Слайд 34

Слайд 35

Современный метод определения: проточная цитометрия с лазерной детекцией (автоматический гематологический анализатор)

Современный метод определения:    проточная цитометрия с лазерной детекцией (автоматический гематологический анализатор)

выдает результаты

в виде процентного содержания нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов.
Слайд 36

Исследование лейкоцитарной формулы имеет большое значение: - в диагностике гематологических, инфекционных,

Исследование лейкоцитарной формулы

имеет большое значение:
- в диагностике гематологических, инфекционных, воспалительных

заболеваний,
- оценке тяжести состояния и эффективности проводимой терапии.
изменения лейкоцитарной формулы не являются специфичными:
- могут иметь сходный характер при разных заболеваниях или
- могут встречаться непохожие изменения при одной и той же патологии у разных больных 
Слайд 37

Лейкоцитарная формула имеет возрастные особенности ее сдвиги должны оцениваться с позиции

Лейкоцитарная формула

имеет возрастные особенности
ее сдвиги должны оцениваться с позиции

возрастной нормы
(особенно важно при обследовании детей). 
Слайд 38

отклонения от нормы просмотр мазка крови под микроскопом врачом с дополнительным

отклонения от нормы
просмотр мазка крови под микроскопом врачом с дополнительным уточнением

лейкоцитарной формулы и описанием морфологии клеток:
дополнительно оценивается содержание палочкоядерных нейтрофилов;
при выявлении других, реже встречающихся, типов лейкоцитарных клеток, их общее процентное содержание выдается под названием "другие" с описанием выявленных клеточных типов в комментарии к результату