Морфология микроорганизмов. Методы окраски

и стекло, поэтому они невидимы при микроскопическом исследовании.
Окраска микроорганизмов позволяет изучить морфологические особенности микробов

Основные виды красителей, которые применяются в микробиологической практике:

клеток

Сложные методы

Несколько этапов
2 красителя
Протравы
Дифференцирующие вещества
Позволяют отличить одну группу бактерий от другой или выявить определенные структуры бактериальной клетки

Стрептококки -это кокки, расположенные цепочками

Грамположительные (фиолетовые) кокки и грамотрицательные (красные) палочки

микробов. Уплотняя цитоплаз­му, они могут делать окраску более прочной, или усиливать красящие свойства красителя, или разрыхлять оболочки клеток, спор, способствуя проникновению краски в клетку.
Протравами обрабатывают мазок:
а) перед окрашиванием – воздействуя раствором НCl при окраске спор у бактерий в методе Ожешки,
б) в момент окраски – фенол и высокая температура (подогревание препарата) в методе Циля-Нильсена;
в) после нанесения краски для ее закрепления – раствор Люголя в методе Грама.
Дифференцирующие вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие. Например: этиловый спирт в окраске по Граму, серная кислота в методах Циль-Нильсена и Ожешки.

предметное стекло наносят бактериальной петлей маленькую каплю исследуемой жидкости; воды или стерильного физиологического раствора и бактериологической петлей переносят в нее небольшое количество исследуемого материала.
Полученную суспензию равномерно распределяют тонким слоем на площади 1 – 2 см петлей. 
Препарат высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.
Высушенный мазок фиксируют в пламени горелки.
Фиксация мазка является обязательной процедурой, в результате которой микробы погибают, прочно прикреп­ляются к стеклу и значительно лучше воспринимают окраску.

пламени го­релки (фиксация жаром): предметное стекло в положении мазком вверх 3 раза проводят через пламя горелки.
применяют также различные жидкие фиксаторы, оказывающие более щадящее действие, например: этиловый или метиловый спирт, ацетон, формалин и др. Существуют также жидкие фиксаторы, представляющие собой смесь нескольких веществ, например, по Никифорову (смесь этилового спирта и эфира 1:1).
Выбор способа фиксации зависит от окрашиваемого объекта: в жидких фиксаторах фиксируют мазки из крови, гноя, мокроты и т.п. и метода окраски.

важный таксономический признак
Метод Циля-Нильсена – дифференцирует кислотоустойчивые и некислотоустойчивые бактерии – принципиальное значение в диагностике туберкулеза

Выявляющие структуры бактериальной клетки

Метод Ожешко – споры
Метод Бурри-Гинса – капсула
Метод Нейссера – включения волютина
Метод Пешкова – клеточная стенка
Метод Романовского-Гимзы – универсальный – окраска нуклеоида, риккетсий, хламидий, спирохет

этом случае видны только эндоспоры как бесцветные образования в клетке
Эндоспоры в теле клетки может располагаться:
1. центрально — возбудитель сибирской язвы Вacillus anthracis;
2. терминально — на конце палочки (возбудитель столбняка Clostridium Tetani);
3. субтерминально — ближе к концу (возбудитель ботулизма, Clostridium botulinum).
Способность бактерий образовывать споры, различающиеся по форме размерам и локализации в клетке, является таксономическим признаком, который используется для их дифференцировки

2. Clostridium Tetani

3. Clostridium Вotulinum

1. Вacillus anthracis

клеток , так и отдельные споры

Вегетативные клетки синие

чаще всего применяют методы негативного контрастирования
Капсула выявляется при любом методе окраски в виде неокрашенной зоны между окрашенными телом бактерий и субстратом. 
При простом методе и методе Грама достаточно не промывать мазок на последнем этапе окраски

Методы выявления капсул

Str.pneumoniae
Простой метод (фуксин)

Грамположительные палочки рода Bacillus
Окраска по Граму

Метод Бурри-Гинса: на фоне туши видны красные палочки, окруженные бесцветной капсулой

синего, который наносят на 3 - 5 мин на фиксированный мазок, после чего смывают водой, мазок высушивают и микроскопируют.
Протоплазма бактерий окрашивается в голубой цвет, волютиновые зерна -в темно-синий.

Включения волютина постоянно имеют возбудитель дифтерии-Corynebacterium diphtheriae, дрожжеподобные грибы рода Candida, что является таксономическим признаком

C.diphtheriae окраска по Леффлеру: на полюсах палочек утолщения – зерна волютина

C.diphtheriae окраска по Нейссеру

Сandida albicans окраска по Леффлеру: в голубой цитоплазме видны глыбки волютина

окрашивается более интенсивно