Содержание
- 2. Принципи ПЛР. Перший раунд.
- 3. Принципи ПЛР. Другий раунд.
- 4. Стадії ПЛР Денатурація (94°C): Розділення ниток матриці ДНК; Гібридизація (відпал) праймерів на матриці (40-65°C): Праймери є
- 5. СХЕМА ЦИКЛІВ ПЛР
- 6. Основні принципи ПЛР: Узагальнення Ампліфікація необхідного фрагмента ДНК відбувається між двома праймерами (праймери входять до складу
- 7. Кінетика накопичення продукту ПЛР-реакції характеризується виходом на «плато»
- 8. Основні причини виходу ПЛР на «плато» Виснаження субстратів (дНТФ і праймерів); Зниження активності полімерази; Накопичення інгібіторів
- 9. Режим ампліфікації в методичному посібнику до лабораторної роботи
- 10. Режим ампліфікації лабораторної роботи
- 11. Cклад реакційної суміші для проведення ПЛР [Каталог фірми ,,Fermentas” (life sciences; molecular biology) за 2008-2009 рр.]
- 12. Полімерази в ПЛР
- 13. Полімерази в ПЛР
- 14. Вимоги до будови праймерів Довжина праймерів 18-30 нуклеотидів (за виключенням праймерів для клонування); GC-склад 40-60%, близький
- 15. Праймери для клонування
- 16. Праймери для клонування
- 17. Універсальні праймери Якщо використовуються праймери з наукових статей – часто необхідно оптимізувати умови ПЛР під наявні
- 18. Оптимізація ПЛР Температурний профіль реакції; Тривалість окремих етапів реакції (в окремих випадках – збільшення тривалості відпалу
- 19. Підбір концентрації іонів магнію Оптимізація ПЛР Підбір температури відпалу
- 20. Види детекції продуктів ПЛР. Детекція продуктів ПЛР методом електрофорезу в агарозному гелі.
- 21. Детекція ПЛР продукту впродовж ампліфікації під час ПЛР в реальному часі
- 22. ПЛР в реальному часі (Real-time PCR) За допомогою інтеркалюючих барвників (SYBR Green тощо); За допомогою гібридизаційних
- 23. ПЛР в реальному часі. Низькоспецифічна детекція результатів ПЛР за допомогою інтеркалюючого барвника SYBR Green.
- 24. ПЛР в реальному часі. Детекція накопичення продукту за допомогою флюоресцентних міток ковалентно зв’язаних з праймерами.
- 25. ПЛР в реальному часі. Проба Taqman
- 26. Детекція ПЛР продукту за ,,кінцевою точкою”
- 27. Детекція продуктів ПЛР за ,,кінцевою точкою”. Флюоресцентні барвники Fam i Hex. Внутрішній контроль в діагностичній ПЛР.
- 28. Внутрішній контроль в ПЛР: РЕЗУЛЬТАТ ДІАГНОСТИКИ ЦИТОМЕГАЛОВІРУСУ (CMV)
- 29. Види ПЛР ПЛР з «гарячим» стартом (hot-start PCR); Touchdown ПЛР; Мультиплексна ПЛР; Гніздова, або вкладена (nested)
- 30. Види ПЛР ПЛР з «гарячим» стартом (hot-start PCR) (ПІДВИЩУЄ СПЕЦИФІЧНІСТЬ РЕАКЦІЇ): Внесення полімерази після попередньої денатурації;
- 32. Скачать презентацию