ИФА диагностикасы

Июль 24, 2022

Главная
Медицина
ИФА диагностикасы

Содержание

2. Жоспар ИФА-ны жүргізу әдісі Иммуннды реакция механизмі ИФА сатылары Қолданылатын конъюгат құрамы Әдістің сезімталдығы. ИФА классификациясы
3. ИФА жүргізу әдісі Серодиагностика үшін 96полистирольды айтәрізді планшеттер қолданылады, табақшалардың қабырғаларында алдын-ала антиген адсорбирленіп алынады.
4. Иммуннды реакция механизмі Алғашқы реакция анықталып жатқан Ig (Ab) және қоздырғыштың тазартылған антигенінің арасында болады, ол
7. Конъюгат – бұл ферментті белгімен белгіленген антиген немесе антидене. Сенімді конъюгат келесі қасиеттерге ие болуы керек:
8. ИФА-ның сезімталдылығы Әдістің сезімталдылығы ( антиген және антидене санының минимальды анықталуы) келесі факторлармен анықталады: ∙ антиденелер
9. ИФА классификациясы 1. ИФА-ның бірінші сатысында кездесетін реагенттер типі бойынша, конкурентті және конкурентті емес әдістер. А)
10. 2. ИФА-ның барлық әдістері гомогенді және гетерогенді болып бөлінеді. Гомогенді ИФА негізіне , төмен молекулярлы субстанцияларды
11. 3. Тестіленетін затты анықтау принципі бойынша: А) Заттың концентрациясын (антигена или антидене) тікелей анықтау бірге әсер
13. Қаттыфазалы ИФА Қатты фаза ретінде ИФА –ны жүргізу үшін әртүрлі материалдарды қолдануға болады: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен
14. ИФА-ның тікелей әдісі 5. Реакцияны көру.Алдымен реакция нәтижесін көзбен бағалайды. Боялу интенсивтілігіне байланысты нақты нәтижені бағалау
15. Тікелей емес ИФА ИФА-ның бұл нұсқасы спецификалық антиденелерді анықтау үшін қолданылады. Тақтайша лункаларында стандартты антиген адсорбирленеді
16. Сэндвич-әдіс ИФА-ның бұл түрімен анықталатын антигендер, антиденені байланыстыратын бірнеше эпитоптардан тұрады. Антидене ферменттері антидене байланыстыратын бірнеше
17. Конкурентті ИФА Анализдің бұл варианты конъюгат және зерттелетін антидененің қатты фазада адсорбирленген антигенмен байланысы үшін бәсекелестігі.
18. Ингибиторлы ИФА ИФА-ның бұл нұсқасында зерттелеетін үлгіде болатын антиген фертментті белгімен белгіленетін моноклональды антиденелермен байланысады және
19. Иммуноферментті дақ әдісі Бұл әдіс клеткалар санын, секретирлеуші антигенді бағалауға қолданылады. 5
20. Нәтижені есептеу Реакция тоқтаған соң арнайы құралдардың көмегімен лункаларға фотометрлеу жүргізіледі. Нәтижені есептеу үшін арнайы құрылғы
22. ИФА-ның тәжірибеде қолданылуы • Инфекциялық аурулап диагностикасы үшін (әртүрлі спецификалық антигендер немесе антиденелердіанықтау үшін); • Биологиялық
23. ИФА көмегімен анықталатын инфекциялар. Сифилис диагностикасы үшін қолданылады (басқа реакциялармен бірге), ВИЧ-инфекциясы, вирусты гепатиттер. Хламидия инфекциясының
24. Қорытынды ИФА басқа әдістермен салыстырғанда антиген және антидене детекциясы мына қасиеттерге ие. 0,05 нг/мл концентрацияны анықтау
26. Скачать презентацию

Слайд 2

Жоспар
ИФА-ны жүргізу әдісі
Иммуннды реакция механизмі
ИФА сатылары
Қолданылатын конъюгат құрамы
Әдістің сезімталдығы.
ИФА классификациясы
Қатты

фазалы ИФА
ИФА тікелей әдісі
Тікелей емес ИФА
Сэндвич- әдіс
Конкурентті ИФА
Ингибиторный ИФА
Иммуноферментті дақ әдісі
Нәтижені есептеу
ИФА-ның тәжірибеде қолданылуы
ИФА көмегімен анықталатын инфекциялар
Қорытынды

Слайд 3

ИФА жүргізу әдісі
Серодиагностика үшін 96полистирольды айтәрізді планшеттер қолданылады, табақшалардың қабырғаларында алдын-ала

антиген адсорбирленіп алынады.

Слайд 4

Иммуннды реакция механизмі
Алғашқы реакция анықталып жатқан Ig (Ab) және қоздырғыштың тазартылған

антигенінің арасында болады, ол иммунологиялық планшеттің лункасының беткейіне бекітіледі.
Пайда болған иммунды комплекстерді анықтау үшін екінші иммунологиялық реакция жүргізіледі, бұл кезде антиген ретінде байланысқан спецификалық Ig, ал антидене ретінде – конъюгат алынады.
Әрі қарай конъюгат молекуласының ферментті бөлігімен катализирленетін ферментативті реакция жүреді. Бұл реакцияның субстраты түссіз зат - хромоген , реакция барысында боялған затқа айналады. Лункадағы боялу интенсивтілігі иммуноглобулин сынамасының құрамындағының санына байланысты.

Слайд 5

Слайд 6

Слайд 7

Конъюгат – бұл ферментті белгімен белгіленген антиген немесе антидене.
Сенімді конъюгат келесі

қасиеттерге ие болуы керек:
- үлкен ерітіндіде қолдану үшін, жоғары антидене титрімен және жоғары антигенге ұқсастыққа ие , сондықтан ол спецификалық емес байланысты төмендетеді.
- Ертінді спецификалылығы жеткілікті болу керек;
- Мономерлі түрі полмерліден басымболуы крек,
- Фермент пен антидене арасында оптимальды молярлы қатынас болады (оптимальды қатынасы 1:1);
- Конъгаттың жеткіліңті ферментативті активтілігі.

Слайд 8

ИФА-ның сезімталдылығы
Әдістің сезімталдылығы ( антиген және антидене санының минимальды анықталуы) келесі

факторлармен анықталады:
∙ антиденелер ұқсастығы, моноклональды антиденелерді пайдалану ;
∙ ферменттің спецификалық активтілігі ;
∙ сигналдың интенсивтілігі;
∙ сигналды ескру сезімталдығы.
ИФА ның орташа сезімталдығы – 10-9 – 10-12 моль.

Слайд 9

ИФА классификациясы
1. ИФА-ның бірінші сатысында кездесетін реагенттер типі бойынша, конкурентті және

конкурентті емес әдістер.
А) Конкурентті ИФА-да бірінші сатыда жүйеде бір уақытта талданып жатқан байланыс және оның аналогы болады.
Б) Конкурентті емес әдіс үшін бірінші сатыда тек талданып жатқан байланыс және спецификалық байланысу орталығы тән.

Слайд 10

2. ИФА-ның барлық әдістері гомогенді және гетерогенді болып бөлінеді.
Гомогенді ИФА

негізіне , төмен молекулярлы субстанцияларды анықтау үшін қолданылатын, антиген немесе антиденемен байланысатын ферменттің белсенділігінің ингибирленуі жатады. Ферменттің белсенділігі антиген-антидене реакциясының қорытындысы негізінде қалпына келеді.
Гетерогенді әдіс үшін анализді екіфазалы жүйеде қатты фазалы- тасымалдаушы қатысуымен жүргізу тән.Міндетті сатысы иммунды комплексті әсер көрсетпеген компоненттен бөлу. Иммунды комплекстің бірінші сатыда түзілуі қатты фазада жүреді – қатты фазалы әдіс деп аталады.

Слайд 11

3. Тестіленетін затты анықтау принципі бойынша:
А) Заттың концентрациясын (антигена

или антидене) тікелей анықтау бірге әсер ететін байланыс орталықтарымен қатар жүреді. Бұл жағдайда ферментті белгі пайда болған спецификалық АГ-АД комплексте болады. Анықталып отырған заттың концентрациясы тіркелген сигналға тікелей пропорционал болады.
Б) Байланысу орындарының жалпы санының әртүрлілігі және қалған бос байланысу орталықтарына байланысты заттың концентрациясын анықтау.Бұл кезде анықталатын заттың концентрациясы өседі, тіркелетін сигнал төмендейді.

Слайд 12

Слайд 13

Қаттыфазалы ИФА
Қатты фаза ретінде ИФА –ны жүргізу үшін әртүрлі материалдарды

қолдануға болады: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен және т.б. Қатты фаза ретінде пробирка қабырғасы, 96-ай тәрізді және басқа. планшеттер, шариктер, нитроцеллюлозды және басқа мембраналар.
Осы фазада антиген және антидененің иммобилизациясы 3 жолмен жүреді:
– пассивті адсорбция, белоктар және синтетикалық беткеймен қатты гидрофобты әсерге негізделген;
– қатты фазаға ковалентті байланыс;
– иммунохимиялық . (коваленті емес және адсорбционды емес байланыс).

Слайд 14

ИФА-ның тікелей әдісі
5. Реакцияны көру.Алдымен реакция нәтижесін көзбен бағалайды. Боялу

интенсивтілігіне байланысты нақты нәтижені бағалау ИФАда сәйкес светофильтрмен бағаланады. Жүргізілген анализ қорытындысы бойынша ,концентрациясынан оптикалық тығыздық графигі тұрғызылыды.

Слайд 15

Тікелей емес ИФА
ИФА-ның бұл нұсқасы спецификалық антиденелерді анықтау үшін қолданылады.

Тақтайша лункаларында стандартты антиген адсорбирленеді және науқастан алынған сарысу немесе басқа биологиялық материал үлгісі (жұлын сұйықтығы, сілекей және т.б)инкубацияланады.
Қатты фазада антигенмен байланысқан спецификалық антиденені конъюгаттың антиглобулині көмегімен анықталады.

Слайд 16

Сэндвич-әдіс
ИФА-ның бұл түрімен анықталатын антигендер, антиденені байланыстыратын бірнеше эпитоптардан тұрады. Антидене

ферменттері антидене байланыстыратын бірнеше эпитоптардан тұрады.
ИФА-ның бұл түрін жүргізгенде жоғарыспецификалық поли немесе моноклоналды антиденелер қатты фазада келесідй инкубирленеді.

Шаю процедурасынан кейін лункаларға ферментпен белгіленген антиденені қосады, ары қарай антигенге реакцияның барлық қалған этаптарын жүргізеді. Спецификалық комплекстің эффективтілігінің түзілуі анализдің әр деңгейінде антиген –антидене реакциясын байланыстыратын константаға байланысты.

Слайд 17

Конкурентті ИФА
Анализдің бұл варианты конъюгат және зерттелетін антидененің қатты фазада адсорбирленген

антигенмен байланысы үшін бәсекелестігі.
Қатты фазаға байланысқан ферменттің саны қосындыда бос антидене болуына байланысты пропорциональды төмендейді..

Антигенді анықтау үшінсол нұсқа қолданылады,бірақ бұл жағдайда қалған антиген стандартты антигенмен антидене байланысы үшін бәсекелеседі.

Слайд 18

Ингибиторлы ИФА
ИФА-ның бұл нұсқасында зерттелеетін үлгіде болатын антиген фертментті белгімен белгіленетін

моноклональды антиденелермен байланысады және иммобилизирленген қатты фазада олардың стандартты антигенімен әсерін ингибирлейді.
Конъюгатқа спецификалы антигеннің үлгіде аз бөлігінің болуының өзі белгіленген антидененің иммобилизирленген антигенмен байланысын ингибирлейді.
Ингибирлену деңгейі ерітінді құрамындағы антигенге тікелей пропорциональды.Сан анализін жасау үшін калибрленген қисық сызықты құрады.

Слайд 19

Иммуноферментті дақ әдісі
Бұл әдіс клеткалар санын, секретирлеуші антигенді бағалауға қолданылады.
5

Слайд 20

Нәтижені есептеу
Реакция тоқтаған соң арнайы құралдардың көмегімен лункаларға фотометрлеу

жүргізіледі.
Нәтижені есептеу үшін арнайы құрылғы қолданады.
Бақылау сынамаларының оптикалық тығыздығын салыстыру үшін анализ нәтижесіне математикалық есеп жүргізіледі.
Ұяшықтағы оптикалық тығыздық артқан сайын ,сынамады спецификалық антидене саны арта түседі.

Слайд 21

Слайд 22

ИФА-ның тәжірибеде қолданылуы
• Инфекциялық аурулап диагностикасы үшін (әртүрлі спецификалық

антигендер немесе антиденелердіанықтау үшін);
• Биологиялық үлгілерден гормондарды және дәрілік препараттарды анықтау;
• Антигене қарсы антидене изотиптерін анықтау;
• Иммунды комплекстерді анықтау;
• Онкомаркерлерді анықтау;
• Қан сарысуынан белокты анықтау (ферритин, фибронектин);
• Жалпы IgE және спецификалық IgE антиденелерін анықтау;
• Моноклональды антиденелер скринингі;
• Биологиялық сұйықтықтан цитокиндерді анықтау.

Слайд 23

ИФА көмегімен анықталатын инфекциялар.
Сифилис диагностикасы үшін қолданылады (басқа реакциялармен бірге),

ВИЧ-инфекциясы, вирусты гепатиттер.
Хламидия инфекциясының диагностикасы үшін , цитомегаловирусты инфекция және басқа герпестік инфекциялар.
Қанда антидене деңгейін анықтау біріншілік жыныс жолдарымен берілетін инфекция диагностикасы үшін қажет емес.
ИФА нәтижесі бойынша микропреципитация реакциясымен бірге сифилисты таниды.

Слайд 24

Қорытынды
ИФА басқа әдістермен салыстырғанда антиген және антидене детекциясы мына қасиеттерге ие.

0,05 нг/мл концентрацияны анықтау үшін жоғары сезімталдыққа ие. Зерттелетін заттардың минимальды көлемін қолдануға болады. ИФА-ны жүргізу үшін керекті ингридиенттерді сақтауда тұрақты. Реакцияны жүргізу ыңғайлы. Реакцияның барлық этаптарының автоматизациясы. Диагностикалық құралдардың төмен бағада болуы. Өзінің жоғары емес бағасына байланысты және экологиялық қауіпсіздігіне байланысты ИФА барлық «рутинді» анализдерді артқа қалдырды.

ИФА диагностикасы

Содержание

Жоспар ИФА-ны жүргізу әдісіИммуннды реакция механизміИФА сатыларыҚолданылатын конъюгат құрамыӘдістің сезімталдығы.ИФА классификациясыҚатты

ИФА жүргізу әдісіСеродиагностика үшін 96полистирольды айтәрізді планшеттер қолданылады, табақшалардың қабырғаларында алдын-ала

Иммуннды реакция механизміАлғашқы реакция анықталып жатқан Ig (Ab) және қоздырғыштың тазартылған

Конъюгат – бұл ферментті белгімен белгіленген антиген немесе антидене.Сенімді конъюгат келесі

ИФА-ның сезімталдылығыӘдістің сезімталдылығы ( антиген және антидене санының минимальды анықталуы) келесі

ИФА классификациясы1. ИФА-ның бірінші сатысында кездесетін реагенттер типі бойынша, конкурентті және

2. ИФА-ның барлық әдістері гомогенді және гетерогенді болып бөлінеді.Гомогенді ИФА

3. Тестіленетін затты анықтау принципі бойынша:А) Заттың концентрациясын (антигена

Қаттыфазалы ИФА Қатты фаза ретінде ИФА –ны жүргізу үшін әртүрлі материалдарды

ИФА-ның тікелей әдісі5. Реакцияны көру.Алдымен реакция нәтижесін көзбен бағалайды. Боялу

Тікелей емес ИФА ИФА-ның бұл нұсқасы спецификалық антиденелерді анықтау үшін қолданылады.

Сэндвич-әдісИФА-ның бұл түрімен анықталатын антигендер, антиденені байланыстыратын бірнеше эпитоптардан тұрады. Антидене

Конкурентті ИФААнализдің бұл варианты конъюгат және зерттелетін антидененің қатты фазада адсорбирленген

Ингибиторлы ИФАИФА-ның бұл нұсқасында зерттелеетін үлгіде болатын антиген фертментті белгімен белгіленетін

Иммуноферментті дақ әдісі Бұл әдіс клеткалар санын, секретирлеуші антигенді бағалауға қолданылады.5

Нәтижені есептеу Реакция тоқтаған соң арнайы құралдардың көмегімен лункаларға фотометрлеу

ИФА-ның тәжірибеде қолданылуы • Инфекциялық аурулап диагностикасы үшін (әртүрлі спецификалық

ИФА көмегімен анықталатын инфекциялар. Сифилис диагностикасы үшін қолданылады (басқа реакциялармен бірге),

ҚорытындыИФА басқа әдістермен салыстырғанда антиген және антидене детекциясы мына қасиеттерге ие.

Похожие презентации