днк-диагностика

ДНК – технологии

ДНК – технологии используются в медицине для диагностики

 
Выделения ДНК (Получение нативной ДНК).
1. быстрый лизис клеток,
2.

7. определение взаимного расположения фрагментов ДНК и локализации в хромосомах.
8.

Специфические рестриктазы –
(ферменты разрушающие ДНК) –
рестрикционные эндонуклеазы
бактериальных клеток.

Рестриктазы

узнают специфические последовательности состоящие из 4 – 6 или реже из

C

T

T

A

A

G

G

T

C

G

A

A

T

T

G

A

C

C

5’

3’

3’ 5’

Действие рестриктаз 1 –го типа, образование слепых концов

Действие рестриктаз 2 – го типа, образование липких концов

C

T

T

A

A

G

G

T

C

G

A

A

T

T

G

A

C

C

5’

3’

3’

ДНК – идентификация специфических последовательностей.
Идентификация осуществляется путём гибридизации с меченными

ДНК – зонд (ДНК – чип)
фрагменты однонитевой ДНК длиной от

Метод гибридизации по Саузерену –
используется для визуализации фрагментов ДНК.

Методики Нозерн – блоттинга и Вестерн – блоттинга для визуализации соответственно

Метод блотт – гибридизации:

Полученные в ходе рестриктазных реакций фрагменты ДНК

Гибридизация с ДНК или РНК – зондом, содержащим метку.
Определение положения

Серповидно – клеточная анемия.

Миссенс – мутация связана с заменой в

 
1,3 килобазы
1,1 килобазы

 
Пример радиоавтограммы после гибридизации
с зондом к В –

Секвенирование

Установление первичной структуры ДНК
Методы секвенирования:
Химические
- Ферментативные

  Методика дидезоксисеквенирования: реакционные пробы ставятся в 4- х кюветах и

Дидезоксисеквенирование

Дидезоксисеквенирование

Получение рекомбинантных ДНК и их амплификация.
1. фрагментирование 2- х

Клонирование ДНК.
Клон – это популяция идентичных молекул.
Клонирование - встраивание

Геномная библиотека - содержит все гены данного генома
готовится из тотальной

"Геном человека" ("Human Genome Project") .
Основной задачей программы является построение исчерпывающих

Генетические карты сцепления - одномерные схемы взаимного расположения генетических маркеров на

Физические карты генома отражают реальное расстояние между маркерами, выражаемое в парах

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Этот метод позволяет подвергать специфической амплификации in vitro

Объекты исследования ПЦР

Материалы из тканей, содержащие антигены различных инфекционных возбудителей (например:

Контроль качества лечения – пример хронизация процесса или латентное носительство,.
ПЦР

ПЦР проводится в специальных приборах, которые называются амплификаторы ДНК.
Обычно с

Участок исследуемой ДНК гибридизуют с 2 – мя искусствено синтезированными праймерами

Один цикл ПЦР включает 3 этапа:
1.  Плавление
2.     Гибридизация ДНК с

ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
ЦИКЛ 2
ЦЕПЬ 1 3’
ЦЕПЬ 2 5’
ЦЕПЬ 1 3’
ЦЕПЬ

Специальная программа
Genotyper-tm
позволяет автоматически соотносить информацию о

ПДРФ – Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов.
∙        гемофилия А, талассемия, ретинобластома

Принцип метода основан на
изменении деятельности известных рестриктаз.

ПДРФ - анализ проводится в три этапа:
1    1. Выделение геномной

1.     Отсутствие рестрикции фрагмента ДНК с образованием более крупного фрагмента

2.     При наличии рестрикции в полиморфном участке на электрофореграмме будет присутствовать

Генная терапия.
Заболевания вызванные функциональной недостаточностью продукта того или иного гена, можно