ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Измерение флуоресценции зондов

Влияние препаратов на спектры флуоресценции пирена в мембранах эритроцитов

СПИНОВЫЕ ЗОНДЫ

НИТРОКСИЛЬНЫЕ РАДИКАЛЫ
устойчивы в широком интервале температур (до 100-200 СС)

СПИНОВЫЙ ЗОНД ТЕМПО

Химическая "прививка" метки к макромолекулам с реакционно способными группами

Реакции макромолекул с бирадикалами и спиновыми ловушками.
Спиновая ловушка - соединение, образующее

Спектры ЭПР

Спектры ЭПР нитроксильных радикалов в вязких средах при временах корреляции

ИЗМЕНЕНИЕ СПЕКТРА ЭПР ПРИ УМЕНЬШЕНИИ МИКРОВЯЗКОСТИ η

Н

Н

I

ДВА СПОСОБА ПРИКРЕПЛЕНИЯ СПИНОВОЙ МЕТКИ К МОЛЕКУЛЕ ФОСФОЛИПИДА И РАЗЛИЧИЕ СПЕКТРОВ

Спектры 2Н-ЯМР
димиристоилфофатидилхолина,
дейтерированного по разным
положениям ацильной цепи

ЯМР

Величины подвижности Т1 для различных атомов углерода в молекуле фосфатидилхолина в

БЕЛКИ МЕМБРАН

1.СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКОВ В МЕМБРАНЕ
2. КЛАССИФИКАЦИЯ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ
3. ПОДВИЖНОСТЬ БЕЛКОВ В МЕМБРАНЕ
4.

СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКОВ В МЕМБРАНАХ

МЕМБРАНЫ СОДЕРЖАТ ОТ 20 ДО 80% БЕЛКА ПО

КЛАССИФИКАЦИЯ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ

основана на прочности взаимодействия белка с мембраной

Топологическая классификация

Биохимическая

ТОПОЛОГИЧЕСКАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ БЕЛКОВ

А- МОНОТОПИЧЕСКИЕ БЕЛКИ
Б – БИТОПИЧЕСКИЕ
В - ПОЛИТОПИЧЕСКИЕ

Связывание белков с мембраной за счёт

единичной трансмембранной альфа-спирали

множественных трансмембранных альфа-спиралей

бета-складчатой

БЕЛКИ МЕМБРАН

ИНТЕГРАЛЬНЫЕ

ПЕРИФЕРИЧЕСКИЕ

БИОХИМИЧЕСКАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ

МЕНЯЮТ СВОЙ СТАТУС, ПРИКРЕПЛЯЯСЬ К МЕМБРАНЕ НА ОПРЕДЕЛЕННОЕ

ДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ НА ИНТЕГРАЛЬНЫЕ И ПЕРИФЕРИЧЕСКИЕ ОПРЕДЕЛЯЕТСЯ
СТРУКТУРОЙ
КОЛИЧЕСТВОМ И РАСПОЛОЖЕНИЕ ГИДРОФОБНЫХ ОСТАТКОВ

МЕМБРАННЫЕ БЕЛКИ СОСТОЯТ ИЗ ДВУХ ЧАСТЕЙ:
УЧАСТКИ, БОГАТЫЕ ПОЛЯРНЫМИ АМИНОКИСЛОТНЫМИ ОСТАТКАМИ, ОБРАЩЕННЫЕ

ИНТЕГРАЛЬНЫЕ БЕЛКИ

1- ГЛИКОФОРИН,
2 – РЕЦЕПТОР АДРЕНАЛИНА

ПРИМЕРЫ ИНТЕГРАЛЬНЫХ БЕЛКОВ, СОДЕРЖАЩИХ ОТ 1 ДО 12 ТРАНСМЕМБРАННЫХ ДОМЕНОВ

С БИСЛОЕМ

1. КОЛИЧЕСТВО ГИДРОФИЛЬНЫХ АМИНОКИСЛОТ ПРИМЕРНО ТАКОЕ ЖЕ, КАК И В ОБЫЧНЫХ

2. В СТРУКТУРЕ ИНТЕГРАЛЬНЫХ БЕЛКОВ ЧЕТКО ВЫДЕЛЯЮТСЯ УЧАСТКИ, ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЗА ИХ

амфипатической альфа-спирали, параллельной плоскости мембраны
гидрофобной петли (ЦИТОХРОМ b5)
ковалентно соединённого

5 – БЕЛКИ, СВЯЗАННЫЕ С ИНТЕГРАЛЬНЫМИ БЕЛКАМИ,

СИЛЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БЕЛКОВ С ЛИПИДНЫМ БИСЛОЕМ

ЭЛЕКТРОСТАТИЧЕСКИЕ – НА УРОВНЕ ГОЛОВОК ЛИПИДОВ

ГИДРОФОБНЫЕ

ПОДВИЖНОСТЬ БЕЛКОВ В БИСЛОЕ

I - ЛАТЕРАЛЬНАЯ ПОДВИЖНОСТЬ БЕЛКОВЫХ МОЛЕКУЛ
II –

Латеральная подвижность мембранных белков, демонстрируемая в эксперименте

ПОДВИЖНОСТЬ БЕЛКОВ В БИСЛОЕ И ИХ ВЛИЯНИЕ НА ЛИПИДЫ МЕМБРАН

БОЛЕЕ ПОДВИЖНЫМИ

ЛАТЕРАЛЬНАЯ ДИФФУЗИЯ ИНТЕГРАЛЬНЫХ БЕЛКОВ ОГРАНИЧЕНА ИХ РАЗМЕРАМИ, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕМ С ДРУГИМИ БЕЛКАМИ

ИНТЕГРАЛЬНЫЕ БЕЛКИ СИЛЬНО ОГРАНИЧИВАЮТ ПОДВИЖНОСТЬ АННУЛЯРНЫХ ЛИПИДОВ. ПО СВОЕЙ ПОДВИЖНОСТИ ОНИ

Фазовый переход приводит к увеличению подвижности ацильных цепей в бислое, увеличению

МОДИФИКАЦИЯ БИСЛОЯ БЕЛКАМИ

ВЫДЕЛЯЮТ 4 ОСНОВНЫХ ТИПА БЕЛОК-ЛИПИДНЫХ КОНТАКТОВ

ЛОКАЛЬНОЕ ВОЗРАСТАНИЕ УПОРЯДОЧЕННОСТИ БИСЛОЯ

ЭЛАСТИЧЕСКАЯ ДЕФОРМАЦИЯ ОДНОЙ СТОРОНЫ БИСЛОЯ

РЕЗКОЕ ИЗМЕНЕНИЕ ГРАДИЕНТА КРИВИЗНЫ И ДЕФОРМАЦИЯ БИСЛОЯ

ИЗМЕНЕНИЕ ГЕОМЕТРИИ БИСЛОЯ ВСЛЕДСТВИЕ НЕСОВПАДЕНИЯ ДЛИНЫ ГИДРОФОБНЫХ УЧАСТКОВ ЛИПИДНЫХ МОЛЕКУЛ И