Метод генетики соматических клеток Основу метода составляет культивирование отдельных соматических клеток человека и получе
Содержание
- 2. Соматические клетки обладают рядом особенностей: быстро размножаются на питательных средах; легко клонируются и дают генетически однородное
- 3. Метод генетики соматических клеток Соматические клетки человека получают из разных органов — кожи, костного мозга, крови,
- 4. В 1960 г. было показано, что совместно культивируемые клетки различных линий могут сливаться, образуя гибриды, содержащие
- 5. Наряду с внутривидовыми получены и межвидовые гибриды, например, между клетками человека и мыши, мыши и хомячка,
- 6. Метод генетики соматических клеток При гибридизации соматических клеток двух разных линий образуются гетерокарионы — клетки, которые
- 7. В течение первых делений гибридной клетки, не ясно почему, происходит потеря хромосом одного из видов. Так,
- 8. Гибридные клетки человека и мыши имеют 43 пары хромосом: 23 от человека и 20 от мыши.
- 9. Функционирующие в гибридных клетках хромосомы синтезируют определенные белки. Фенотипически хромосомы мыши и человека отличаются. Нетрудно определить,
- 10. Гибридомы Гибридо́ма — гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния клеток двух видов: способных к образованию
- 11. Гибридомы Слиянием B-лимфоцитов (голубого цвета) с раковыми клетками миеломы (оранжевого цвета) получают гибридомы (фиолетового цвета), способные
- 12. Биохимические методы Наследственные заболевания, которые обусловлены генными мутациями, изменяющими структуру или скорость синтеза белков, обычно сопровождаются
- 13. Биохимические методы Использование современных биохимических методов (электрофореза, хроматографии, спектроскопии и др.) позволяют определять любые метаболиты, специфические
- 14. Биохимические методы Кроме выявления гомозиготных носителей мутантных генов существуют методы выявления гетерозиготных носителей некоторых рецессивных генов,
- 15. Молекулярно-генетические методы В основе лежат современные методики работы с ДНК или РНК. - позволяют анализировать фрагменты
- 16. Молекулярно-генетические методы Начальным этапом любого молекулярно-генетического анализа является получение образцов ДНК или РНК. Для этого используют
- 17. Полимеразная цепная реакция Для получения достаточного количества фрагментов ДНК используется полимеразная цепная реакция (ПЦР) - метод
- 18. Кари Б. Мюллис (Kary B. Mullis) – изобретатель полимеразной цепной реакции (ПЦР) Американский биохимик 1944 г.р.
- 19. Метод ПЦР Методом ПЦР можно синтезировать фрагмент ДНК in vitro и получить его как химически чистое
- 20. Принцип ПЦР. Синим и красным цветом обозначены две нити участка ДНК, который необходимо копировать.
- 21. Рестрикция ДНК Анализировать огромные молекулы ДНК в том виде, в котором они существуют в клетке, невозможно.
- 22. Электрофорез ДНК Фракционирование (т.е. разделение) фрагментов ДНК по размеру и длине проводится с помощью электрофореза на
- 23. Электрофорез ДНК После разделения (иногда краситель вносят в расплавленную агарозу) фрагменты ДНК разной длины визуализируют при
- 24. Визуализация гелей с результатами электрофореза ДНК Для ДНК электрофореза обычно используют агарозные (для относительно длинных молекул
- 25. Визуализация гелей с результатами электрофореза ДНК Результат электрофоретического разделения продуктов ПЦР-реакции. Агарозный гель окрашен бромистым этидием.
- 26. Блот-гибридизация Для выявления специфических фрагментов ДНК используется метод блот-гибридизации по Саузерну. Эта методика состоит из следующих
- 27. Блот-гибридизация для визуального выявления нужных фрагментов проводят гибридизацию исследуемого образца со специфическим по нуклеотидной последовательности меченным
- 28. Блот-гибридизация С помощью метода Саузерна можно составить рестрикционную карту генома в участке исследуемого гена и установить,
- 29. Секвенирование ДНК определение первичной нуклеотидной последовательности (от англ. sequence — последовательность). В результате секвенирования получается линейное
- 30. Секвенирование ДНК Для секвенирования применяются методы Эдмана, Сэнжера и другие; в настоящее время для секвенирования нуклеиновых
- 31. Секвенирование ДНК по Сэнжеру Методология секвенирования была разработана в конце 1970-х гг. английским биохимиком Фредериком Сэнжером.
- 32. Секвенирование ДНК по Сэнжеру Перед секвенированием молекулу ДНК разрезают на фрагменты и клонируют в Escherichia coli.
- 33. Секвенирование ДНК по Сэнжеру Раствор с одноцепочечными фрагментами и праймерами распределяют по четырём пробиркам, в каждую
- 34. Секвенирование ДНК по Сэнжеру Фрагменты разделяют по размеру с помощью капиллярного электрофореза. Когда фрагменты определённой длины
- 35. Автоматическое секвенирование ДНК Особенно перспективным для массового секвенирования в автоматическом режиме оказалось применение меченых различными флуорохромами
- 36. Технология пиросеквенирования Во время работы автоматического секвенатора нуклеотиды проходят последовательно, в определенном порядке, через миллион микроскопических
- 37. Технология пиросеквенирования При прохождении нуклеотидов происходит одновременное секвенирование уникальных одноцепочечных ДНК на каждой частице, в каждой
- 39. Скачать презентацию