Методы исследования аминокислот и белков

Сентябрь 3, 2022

Главная
Алгебра
Методы исследования аминокислот и белков

Содержание

2. Методы выделения и очистки белков 1. дробление биологического материала и разрушение клеточных мембран; 2. фракционирование органелл,
3. Методы разрушения тканей и экстракции белков Гомогенизация биологического материала Метод замораживания и оттаивания ткани Вскрытие ультразвуком
4. Гомогенизация биологического материала Ткань, находящуюся в буферном растворе с определённым значением рН и концентрацией солей, помещают
5. Метод замораживания и оттаивания ткани В результате попеременного замораживания и оттаивания образующиеся кристаллы льда разрушают оболочки
6. Вскрытие ультразвуком Возможно вскрытие клеток ультразвуком, но в этом случае возникает реальная опасность дробления крупных молекул
7. Экстракция белков, связанных с мембранами, и разрушение олигомерных белков на протомеры В раствор добавляют детергенты; чаще
8. ДИАЛИЗ Принцип метода: низкомолекулярные вещества удаляются из раствора белка и замещаются буфером.
9. Методы очистки белков. Гель-фильтрация Сефадексы (separation, pharmacia, dextran) – это поперечносшитые декстраны сзаданными размерами пор. Биогели
10. Гель-фильтрация
11. Гель-электрофорез
12. Гель-электрофорез Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются
13. Аффинная хроматография (хроматография по сродству) Аффинная хроматография отличается высокой избирательностью и помогает очистить выделяемый белок в
14. Ультрацентрифугирование Метод разделения основан на различии в молекулярных массах белков.
15. Ультрацентрифугирование
16. Рентгеновский эксперимент. И как же он ставится? Исследуемый объект помещают в пучок рентгеновских лучей и измеряют
17. Кристаллизация кристалл – это такой образец исследуемого вещества, в котором много (~1012) идентичных молекул находятся в
18. Кристаллизация Способа получения перенасыщенного раствора: 1) Заключается в постепенном удалении растворителя обычным испарением. 2) связан с
19. Кристаллизация Различные модификации кристаллов белка куриного яйца лизоцима: 1 – тетрагональная модификация, 2 – моноклинная, 3
20. Кристаллизация Синхротронный ускоритель. Станция рентгено-флуорисцентного элементного анализа «Байкал» Сибирского центра синхротронного излучения Гигавольтный синхротронный ускоритель. Звеньевые
22. Скачать презентацию

Слайд 2

Методы выделения и очистки белков
1. дробление биологического материала и разрушение

клеточных мембран;
2. фракционирование органелл, содержащих те или иные белки;
3. экстракцию белков (перевод их в растворённое состояние);
4. разделение смеси белков на индивидуальные белки

Слайд 3

Методы разрушения тканей и экстракции белков
Гомогенизация биологического материала
Метод замораживания

и оттаивания ткани
Вскрытие ультразвуком
Экстракция белков, связанных с мембранами, и разрушение олигомерных белков на протомеры

Слайд 4

Гомогенизация биологического материала
Ткань, находящуюся в буферном растворе с определённым значением

рН и концентрацией солей, помещают в стеклянный сосуд (гомогенизатор) с пестиком. Вращающийся пестик измельчает и растирает ткань о притёртые стенки сосуда.

Слайд 5

Метод замораживания и оттаивания ткани
В результате попеременного замораживания и

оттаивания образующиеся кристаллы льда разрушают оболочки клеток.

Слайд 6

Вскрытие ультразвуком
Возможно вскрытие клеток ультразвуком, но в этом случае возникает реальная

опасность дробления крупных молекул ДНК и белков.

Слайд 7

Экстракция белков, связанных с мембранами, и разрушение олигомерных белков на протомеры
В

раствор добавляют детергенты; чаще всего используют тритон Х-100 или додецилсульфат натрия. При действии детергентов обычно разрушаются и гидрофобные взаимодействия между протомерами в олигомерных белках.

Слайд 8

ДИАЛИЗ
Принцип метода: низкомолекулярные вещества
удаляются из раствора белка и замещаются буфером.

Слайд 9

Методы очистки белков. Гель-фильтрация
Сефадексы (separation, pharmacia, dextran) – это поперечносшитые декстраны

сзаданными размерами пор.
Биогели
Сефароза-поперечносшитая агароза

Слайд 10

Гель-фильтрация

Слайд 11

Гель-электрофорез

Слайд 12

Гель-электрофорез
Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной

силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду (+), а положительно заряженные белки - к катоду (-).

Слайд 13

Аффинная хроматография (хроматография по сродству)
Аффинная хроматография отличается высокой избирательностью

и помогает очистить выделяемый белок в тысячи раз.

Слайд 14

Ультрацентрифугирование
Метод разделения основан на различии в молекулярных массах белков.

Слайд 15

Ультрацентрифугирование

Слайд 16

Рентгеновский эксперимент. И как же он ставится?
Исследуемый объект помещают в пучок

рентгеновских лучей и измеряют интенсивность рассеянного в различных направлениях излучения.

На входе мы имеем неизвестный объект, на выходе дифракционную картину.

Метод основан на дифракции рентгеновских лучей на кристаллической решетке и поэтому применим только к веществам в кристаллическом состоянии.

Слайд 17

Кристаллизация
кристалл – это такой образец исследуемого вещества, в котором много (~1012)

идентичных молекул находятся в одинаковой ориентации и их центры образуют правильную трехмерную решетку.
Наличие пересыщенного раствора – необходимое условие кристаллизации

Слайд 18

Кристаллизация
Способа получения перенасыщенного раствора:
1) Заключается в постепенном удалении растворителя обычным испарением.
2)

связан с использованием зависимости растворимости от температуры.
3) связан с введением в раствор какого-либо вещества, вызывающего понижение растворимости(соли,орг.соединения)

Слайд 19

Кристаллизация
Различные модификации кристаллов белка куриного яйца лизоцима: 1 – тетрагональная модификация,

2 – моноклинная, 3 - триклинная, 4 – игольчатые кристаллы, 5 – кристаллы неизвестных модификаций. Кристаллы получены в одном растворе при смешении солей-осадителей. Изображение получено с помощью микроскопа фазового контраста.

Слайд 20

Кристаллизация
Синхротронный ускоритель.
Станция рентгено-флуорисцентного элементного анализа «Байкал» Сибирского центра синхротронного излучения
Гигавольтный

синхротронный ускоритель. Звеньевые хомуты KF с быстро прижимными Al уплотнениями

Методы исследования аминокислот и белков

Содержание

Методы выделения и очистки белков 1. дробление биологического материала и разрушение

Методы разрушения тканей и экстракции белков Гомогенизация биологического материала Метод замораживания

Гомогенизация биологического материала Ткань, находящуюся в буферном растворе с определённым значением

Метод замораживания и оттаивания ткани В результате попеременного замораживания и

Вскрытие ультразвуком Возможно вскрытие клеток ультразвуком, но в этом случае возникает реальная

Экстракция белков, связанных с мембранами, и разрушение олигомерных белков на протомеры В

ДИАЛИЗПринцип метода: низкомолекулярные вещества удаляются из раствора белка и замещаются буфером.

Методы очистки белков. Гель-фильтрацияСефадексы (separation, pharmacia, dextran) – это поперечносшитые декстраны

Гель-фильтрация

Гель-электрофорез

Гель-электрофорезМетод основан на том, что при определённом значении рН и ионной

Аффинная хроматография (хроматография по сродству) Аффинная хроматография отличается высокой избирательностью

Ультрацентрифугирование Метод разделения основан на различии в молекулярных массах белков.