Лекции3 Генная Инженерия 2 курс Био Маги

Июль 28, 2022

Главная
Биология
Лекции3 Генная Инженерия 2 курс Био Маги

Содержание

2. 25-30 мышиных яйцеклеток с чужеродным геном после микроинъекции имплантируются в псевдобеоременную самку, которая была предварительно спарена
3. Использование вирусов для переноса генов Вирусные частицы имеют природное свойство адсорбироваться на поверхности клеток и внедрять
4. Преимущества вирусных векторов Большая емкость для чужеродной ДНК У вируса нет цитотоксического эффекта, так как некоторые
5. Адено-ассоциированные вирусы (AAV) Эти вирусы генетически не ролдственны аденовирусам, но называются так, потому что впервые были
6. Зависимость AAV от гетерологичного вируса-помощника, например, аденовируса, обеспечивает высокий уровень контроля над вирусной репликацией, делая AAV
7. Геном AAV является мальньким (5 тыс.п.о.) и включает центральный район, содержащий ген rep (репликаза) и cap
8. Созданы новые векторы с делецией генов rep и cap genes и использующие только повторяющиеся элементы, необходимые
9. Бакуловирусные векторы (BV) Бакуловирусы обеспечивают высокий уровень экспрессии трансгена в клетках насекомых, однако их можно использовать
10. Одна из проблем экспрессии белков млекопитающих в клетках насекомых – различный тип гликозилирования белков. Одним из
11. Протокол для получения трансгенных телят Сбор ооцитов с мясокомбината (забой коров); in vitro созревание этих ооцитов;
12. Цели получения трансгенных коров Изменить состав молока. Например, получать молока с желательными аллелями по гену каппа-казеина.
13. Трансгенная птица Птичьи яйцеклетки обычно оплодотворяются через 30 минут после овуляции. Деление клеток происходит в яйцеводе
14. Протокол для птицы Бластодермальные клетки удаляют из донорного яйца. Эти клетки трансфицируют катионными липидами (липосомами) с
15. Цели получения трансгенной птицы Улучшить генетику существующих линий птицы в отношении: Устойчивость к птичьим вирусным и
16. Методы получения трансгенных растений
17. Агробактерии - природные геномодификаторы По мнению древних ученых-философов, ни один человек не способен придумать что-либо, чего
18. АГРОБАКТЕРИИ Род грамотрицательных аэробных бактерий. 4 вида, обитают в почве, главным образом в ризосфере. Способны вызывать
19. Клетки растений можно обработать лизоцимом для удаления клеточной стенки с получением протопластов, которые осторожно центрифугируют, наслаивая
20. Получив такой подарок, клетки начинают бурно делиться, превращаясь в разрастание рыхлой ткани — корончатый галл, и
21. Генетическая колонизация растения 1- агробактерии существуют в ризосфере; 2 - строение A. tumefaciens; 3 – встраивание
22. Локализация корончатого галла на шейке корней растений. Опины (необычное для растений соединение) синтезируются трансформированными растениями. Не
23. Корневой рак плодовых культур.
26. Скачать презентацию

Слайд 2

25-30 мышиных яйцеклеток с чужеродным геном после микроинъекции имплантируются в псевдобеоременную

самку, которая была предварительно спарена с вазектомированным самцом. Таким образом, ни одна яйцеклетка самки не может быть оплодотворена. Самка произведет на свет мышат из имплантированных яйцеклеток через 3 недели.
После рождения присутствие чужеродной ДНК можно подтвердить ДНК –гибридизацией или ПЦР-анализом.
Трансгенная мышь может быть спарена с другой трансгенной мышью чтобы получить гомозиготные трансгенные мыши.

Слайд 3

Использование вирусов для переноса генов
Вирусные частицы имеют природное свойство адсорбироваться на

поверхности клеток и внедрять ДНК в цитоплазму. Это можно использовать для введения рекомбинантной ДНК в клетки животных.
Несколько классов вирусов применяли для генной терапии и, по крайней мере,8 из них дошли до клинических испытаний. Трансген можно ввести в вирус либо в интактный геном, либо с заменой одного или нескольких вирусных генов. Провдится лигирование или гомологичная рекомбинация.

Слайд 4

Преимущества вирусных векторов
Большая емкость для чужеродной ДНК
У вируса нет цитотоксического эффекта,

так как некоторые гены удалены.
Аденовирус
Это вирусы с линейной двуцепочечной ДНК примерно в 36 тыс.п.о. имеют следующие приемущества:
стабильность
Высокая емкость для чужеродной ДНК
Широкий спектр хозяев, включая не делящиеся клетки
Способность давать высокий титр вплоть до 1011 pfu/ml.

Слайд 5

Адено-ассоциированные вирусы (AAV)
Эти вирусы генетически не ролдственны аденовирусам, но называются так,

потому что впервые были открыты как контаминанты фденовирусов.
AAV являются одноцепочечными ДНК-содержащими вирусами и принадлежат к семейству парвовирусов.
Они являются дефектными прирепликации. Т.е. не могут реплицироваться и завершить инфекционный цикл без другого вируса, такого как аденовирус. AAV реплицируется по литическому пути и производит тысячи вирионов.

Слайд 6

Зависимость AAV от гетерологичного вируса-помощника, например, аденовируса, обеспечивает высокий уровень контроля

над вирусной репликацией, делая AAV одним из самых безопасных векторов для генной терапии.
Другим преимуществом этого вирусного вектора является широкий спектр хозяев и не делящиеся клетки.

Слайд 7

Геном AAV является мальньким (5 тыс.п.о.) и включает центральный район, содержащий

ген rep (репликаза) и cap (капсида), фланкируемыми инвертированными терминальными повторами в 145 п.о.
Чужеродная ДНК замещает район гена сар и экспрессируется с помощью локального вирусного промотора. Однако, rep белок может мешать экспрессии и иметь некоторый цитотоксический эффект.

Слайд 8

Созданы новые векторы с делецией генов rep и cap genes и

использующие только повторяющиеся элементы, необходимые для репликации, транскрипции и интеграции провируса.
AAV векторы используются для эффективного введения генов во многие клетки, включая печень, мышцы и нейроны.

Слайд 9

Бакуловирусные векторы (BV)
Бакуловирусы обеспечивают высокий уровень экспрессии трансгена в клетках насекомых,

однако их можно использовать и на клетках млекопитающих.
Бакуловирусы имеют палочковидную форму капсида с большой двуцепочечной молекулой ДНК. Они эффективно инфицируют насекомых.

Слайд 10

Одна из проблем экспрессии белков млекопитающих в клетках насекомых – различный

тип гликозилирования белков. Одним из решений является использование большой емкости BV векторов для ко-экспрессии различных трансгенов, таким образом можно модифицировать процесс гликозирования в клетках хозяев путем экспрессии соответствующих ферментов гликозилирования одновременно с экспрессией трансгена.

Слайд 11

Протокол для получения трансгенных телят
Сбор ооцитов с мясокомбината (забой коров);
in vitro

созревание этих ооцитов;
in vitro оплодотворение ооцитов спермой быков;
Центрифугирование оплодотворенных ооцитов для лучшей визуализации пронуклеусов;
Микроинъекция ДНК в мужской пронуклеус;
in vitro развитие эмбриона;
Транспалантация эмбриона в корову-реципиент;
Скрининг на присутствие трансгена у новорожденных телят;
С этой процедурой только 2 трансгенных теленка полоучено с использованием 2470 ооцитов, т.е. процедура возможна, но не очень эффективна.

Слайд 12

Цели получения трансгенных коров
Изменить состав молока. Например, получать молока с желательными

аллелями по гену каппа-казеина. При этом можно повысить выход и качество производимого из этого молока сыра.
Получение трансгенных коров, производящих молоко, свободное от лактозы.
Получение трансгенных коров генетически устойчивых к бактериальным, вирусным инфекциям, например, возбудителям мастита.

Слайд 13

Трансгенная птица
Птичьи яйцеклетки обычно оплодотворяются через 30 минут после овуляции. Деление

клеток происходит в яйцеводе в течение 20 часов до яйцекладки. За это время эмбрион состоит из приблизительно 60,000 плюрипотентных клеток, называемых бластодермом.
Наличие желтка и множества пронуклеусов делает метод микроинъекции ДНК непрактичным.

Слайд 14

Протокол для птицы
Бластодермальные клетки удаляют из донорного яйца.
Эти клетки

трансфицируют катионными липидами (липосомами) с чужеродной ДНК (липофекция).
Затем клетки снова вводят в в эмбрионы свежеснесенных реципиентных яиц.
Часть потомства будет состоять из смеси клеток (донора и реципиента), т.е. будут химерами.

Слайд 15

Цели получения трансгенной птицы
Улучшить генетику существующих линий птицы в

отношении:
Устойчивость к птичьим вирусным и кокцидиальным инфекциям;
Улучшить конверсию корма;
Понизить содержание жира и холестерина в яйце.

Слайд 16

Методы получения трансгенных растений

Слайд 17

Агробактерии - природные геномодификаторы
По мнению древних ученых-философов, ни один человек не

способен придумать что-либо, чего в природе не существует. Людям отведена лишь роль первооткрывателей или (в худшем случае) исказителей идей и явлений самой природы.
В отношении ГМО эта теория оправдана на все сто процентов.

Слайд 18

АГРОБАКТЕРИИ
Род грамотрицательных аэробных бактерий. 4 вида, обитают в почве, главным

образом в ризосфере. Способны вызывать образование галлов (опухолей) у многих растений. Патогенность агробактерий обусловлена наличием в их клетках плазмид.
На основе этих плазмид создают векторы, которые используются в генетической инженерии для введения чужеродных генов в клетки растений.

Слайд 19

Клетки растений можно обработать лизоцимом для удаления клеточной стенки с получением

протопластов, которые осторожно центрифугируют, наслаивая на монослой клеток млекопитающих для содействрия их слиянию в присутствии полиэтиленгликоля.
Использование липосом (липофекция) является эффективным инструментом, приводя к трансформации 90% клеток.

Слайд 20

Получив такой подарок, клетки начинают бурно делиться, превращаясь в разрастание

рыхлой ткани — корончатый галл, и вырабатывать ряд экзотических веществ, которыми и питаются трансформировавшие их бактерии.

Корончатые галлы, образуемые на корнях

Agrobacterium tumefaciens поражает стебли и листья некоторых растений, причем ее Ti-плазмиды умеют встраивать часть своей ДНК в хромосому растительной клетки.

Слайд 21

Генетическая колонизация растения
1- агробактерии существуют в ризосфере; 2 - строение

A. tumefaciens;
3 – встраивание Т-ДНК в геном;
4 – образование опухоли

Слайд 22

Локализация корончатого галла на шейке корней растений.
Опины (необычное для растений соединение)

синтезируются трансформированными растениями.

Не обнаруживаются в нетрансформированных растительных тканях.

Слайд 23

Корневой рак плодовых культур.

Слайд 24

Лекции3 Генная Инженерия 2 курс Био Маги

Содержание

25-30 мышиных яйцеклеток с чужеродным геном после микроинъекции имплантируются в псевдобеоременную

Использование вирусов для переноса геновВирусные частицы имеют природное свойство адсорбироваться на

Преимущества вирусных векторовБольшая емкость для чужеродной ДНКУ вируса нет цитотоксического эффекта,

Адено-ассоциированные вирусы (AAV)Эти вирусы генетически не ролдственны аденовирусам, но называются так,

Зависимость AAV от гетерологичного вируса-помощника, например, аденовируса, обеспечивает высокий уровень контроля

Геном AAV является мальньким (5 тыс.п.о.) и включает центральный район, содержащий

Созданы новые векторы с делецией генов rep и cap genes и

Бакуловирусные векторы (BV)Бакуловирусы обеспечивают высокий уровень экспрессии трансгена в клетках насекомых,

Одна из проблем экспрессии белков млекопитающих в клетках насекомых – различный

Протокол для получения трансгенных телятСбор ооцитов с мясокомбината (забой коров);in vitro

Цели получения трансгенных коровИзменить состав молока. Например, получать молока с желательными

Трансгенная птицаПтичьи яйцеклетки обычно оплодотворяются через 30 минут после овуляции. Деление

Протокол для птицыБластодермальные клетки удаляют из донорного яйца.Эти клетки

Цели получения трансгенной птицыУлучшить генетику существующих линий птицы в