ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ ТРАНСГЕНЕЗ. ЖИВОТНЫЕ. Лекция 7

Август 30, 2022

Главная
Биология
ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ ТРАНСГЕНЕЗ. ЖИВОТНЫЕ. Лекция 7

Содержание

2. Словарь Зигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и сперматозоида) Бластоциста –
3. Что означает термин «трансгенные животные»?
4. humbio.ru Трофобласт – наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации и формировании плаценты Синцитиотрафобласт
5. 1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота) 2. Зигота делится надвое 3-4. Митотическое деление продолжается 5. Через 5-6 дней
6. Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции) Создание и амплификация rДНК (кассета экспрессии+вектор) Выбор
7. В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой рядом сидели две мыши. Одна из
8. Схемы получения трансгенных животных Микроинъекция в зиготу микроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку (зиготу) 1. Создание
9. 1. встроился ли трансген в геном? 2. несут ли трансген гаметы? 3. экспрессируется ли трансген? Основные
10. Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью микроинъекций MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости
11. Схемы получения трансгенных животных Реконструкция эмбрионов с использованием ЭСК (эмбриональных стволовых клеток) микроинъекция чужеродной ДНК в
12. http://www.stemcells.ox.ac.uk Инъекция в бластоцисту http://www.tankonyvtar.hu/
13. Способы введения днк в культивируемые клетки животных Рекомбинантные РНК-вирусы Клетка с помощью рецепторов опознает вирусную оболочку.
14. Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных рисунок из книги Л.И. Патрушева Экспрессия генов, 2004
15. Способы введения днк в культивируемые клетки животных Перенос генов, опосредованный клеточными рецепторами основан на интернализации рецепторов
16. Способы введения днк в культивируемые клетки животных Электропорация. Кратковременное (10 мксек-100 мсек) воздействие электрическим полем высокой
17. Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику. Создание новых животных, с улучшенными качественными и количественными
18. Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых компонентов (например, в Великобритании существует стадо
19. Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки (например, сообщалось о получении свиней, способных продуцировать интерферон
20. Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов. (например, из стволовых эмбриональных клеток животных вырастили глаза
21. Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по отдельным «томам» рекомбинантных молекул плазмид или
22. Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика
23. Схема получения библиотеки кДНК
24. ДНК-зонды alko-mir.ru ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем или иным образом и использующийся
25. ДНК-зонды. Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons) Зонды с резонансным переносом энергии (LightCycler assay) Концевые
26. Схема получения кДНК. http://bannikov.narod.ru/
27. Генная терапия в генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе: лентивирусов аденовирусов аденоассоциированных вирусов
28. Сравнение свойств генотерапевтических векторных систем http://supotnitskiy.webspecialist.ru/
29. Словарь Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной рекомбинации последовательностей, находящихся в хромосоме,
30. Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов 1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного вектора в клетках
31. Методы модификации вирусов физический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей ее природный тропизм и
32. http://www.mun.ca
34. Скачать презентацию

Слайд 2

Словарь
Зигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и

сперматозоида)
Бластоциста – зародышевый пузырек, ранняя (преимплантационная) стадия развития зародыша млекопитающих (в том числе человека

Слайд 3

Что означает термин «трансгенные животные»?

Слайд 4

humbio.ru
Трофобласт –
наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации

и формировании плаценты

Синцитиотрафобласт – выполняет функцию всасывания питательных веществ из крови матери, вырабатывает ферменты, способствующие внедрению ворсин хориона в ткани матки

Слайд 5

1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота) 2. Зигота делится надвое 3-4. Митотическое деление продолжается 5. Через 5-6 дней образуется бластоциста 6. Внутреннюю

часть бластоцисты (ВКМ) помещают на питательную среду для получения стволовых клеток

http://www.vokrugsveta.ru

Слайд 6

Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)
Создание и амплификация rДНК

(кассета экспрессии+вектор)
Выбор и подготовка клеток-реципиентов для трансформации
Встраивание трансгена в геном клетки-реципиента
Отбор трансгенных организмов
Отбор трансгенных организмов, образующих трансгенные гаметы
Получение чистых линий
Оценка экспрессии гена

Слайд 7

В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой рядом

сидели две мыши. Одна из них была трансгенной, в ее ДНК встроили ген гормона роста крысы, другая была обычной мышкой.

Металлотионеин - белок, способный связывать двухвалентные металлы. Регулирует концентрацию в клетке микроэлементов (цинк и медь).

Слайд 8

Схемы получения трансгенных животных
Микроинъекция в зиготу
микроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку

(зиготу)

1. Создание и клонирование кассеты экспрессии составе вектора клонируется в E. Coli
2. Получение одноклеточных зигот
3. Выделяние rДНК, переведение в линеарную форму, инъецирование в пронуклеус зиготы.
4. пересадка эмбрионов самкам-реципиентам
5. отбор трансгенных животных, продуцирующих трансгенные
гаметы

http://www.transgen.ru

Слайд 9

1. встроился ли трансген в геном?
2. несут ли трансген гаметы?
3. экспрессируется

ли трансген?

Основные проблемы

Слайд 10

Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью микроинъекций

MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости

Слайд 11

Схемы получения трансгенных животных
Реконструкция эмбрионов с использованием
ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)
микроинъекция

чужеродной ДНК в ЭСК

1. Получение культуры ЭСК
2. Введение в ЭСК rДНК с селективных маркером (с помощью ретровирусов, электропорации, липосом)
3. Получение бластоцист для микроинъекции
4. Конструирование химерных эмбрионов
5. Пересадка эмбрионов самкам-реципиентам
6. отбор трансгенных животных, продуцирующих трансгенные
гаметы

http://rudocs.exdat.com

Слайд 12

http://www.stemcells.ox.ac.uk
Инъекция в бластоцисту
http://www.tankonyvtar.hu/

Слайд 13

Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Рекомбинантные РНК-вирусы
Клетка с помощью

рецепторов опознает вирусную оболочку.
Вирус внедряет в клетку РНК.
В клетке РНК с помощью ревертазы переписывается в ДНК
ДНК проникает в ядро соматической клетки.
ДНК встраивается в ДНК клетки.
Клетка синтезирует копии обновленного генома и мРНК.
Белки транслируются
РНК вируса одеваются вирусной оболочкой
выходят из клетки, заражая новые поколения клеток.

moikompas.ru

Перенос генов с помощью вирусов
(Эффективные векторы созданы на основе ретровирусов, вирусов SV40, аденовирусов, аденоассоциированных вирусов, вируса осповакцины, вируса герпеса и др.)

Слайд 14

Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных
рисунок из книги Л.И. Патрушева

Экспрессия генов, 2004

Слайд 15

Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Перенос генов, опосредованный клеточными рецепторами
основан

на интернализации рецепторов в процессе эндоцитоза

Слайд 16

Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Электропорация.
Кратковременное (10 мксек-100 мсек)

воздействие электрическим полем высокой напряженности (50-1500 V/см), вызывает локальное нарушение целостности мембран с образованием микропор (диаметр 20-120 нм), через которые заряженные молекулы, в том числе и ДНК, как линейная, так и суперскрученная, проникают внутрь клеток

Слайд 17

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.
Создание новых животных, с

улучшенными качественными и количественными характеристиками
(лосось с трансгеном гормона роста)

Слайд 18

Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых компонентов

(например, в Великобритании существует стадо коров, молоко которых подходит для приготовления сыра чеддер).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Слайд 19

Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки
(например, сообщалось

о получении свиней, способных продуцировать интерферон человека).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Слайд 20

Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов.
(например, из

стволовых эмбриональных клеток животных вырастили глаза и уши лягушки).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Слайд 21

Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по отдельным

«томам» рекомбинантных молекул плазмид или фаговых частиц «в суперобложке» бактерии E.coli.

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Слайд 22

Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика

Слайд 23

Схема получения библиотеки кДНК

Слайд 24

ДНК-зонды
alko-mir.ru
ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем

или иным образом и использующийся для гибридизации со специфическим участком молекулы ДНК. Позволяет идентифицировать комплементарные ему нуклеотидные последовательности.

Слайд 25

ДНК-зонды.
Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)
Зонды с резонансным переносом

энергии (LightCycler assay)

Концевые последовательности зонда комплементарны и образуют шпильки, что гасит свечение. Зонды, которые отжигаются на матрицу, разворачиваются, и флуоресцентная метка и гаситель расходятся в разные стороны - увеличивается свечение.

Принцип метода в переносе энергии от одного флуорофора (на 3` конце первого зонда), ко второму флуорофору (на 5` конце второго зонда). При связывании зондов с ДНК матрицей испускаемое первым флуорофором излучение передается на второй флуорофор, а его излучение детектируется прибором.

http://www.interlabservice.ru/

Слайд 26

Схема получения кДНК.
http://bannikov.narod.ru/

Слайд 27

Генная терапия
в генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе:
лентивирусов
аденовирусов
аденоассоциированных

вирусов
ортопоксвирусов
герпесвирусов
РНК-вирусов, не относящихся к ретровирусам

http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Слайд 28

Сравнение свойств генотерапевтических векторных систем
http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Слайд 29

Словарь
Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной

рекомбинации последовательностей, находящихся в хромосоме, с искусственно введенными в клетку последовательностями ДНК
Упаковывающая клетка – линия клеток, созданная для продуцирования (упаковки) вирусных частиц, не содержащих инфекционных нуклеиновых кислот.

Слайд 30

Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов
1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного

вектора в клетках E.coli.
2. Перенос ДНК ретровирусного вектора в упаковывающие клетки.
3.Формирование ретровирусных частиц и их выход в культу ральную среду.
4. Трансдукция гена в составе ретровирусного вектора в клетки-мишени.

http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Слайд 31

Методы модификации вирусов
физический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей

ее природный тропизм и делающей ее неузнаваемой для иммунной системы человека
генетическая модификация вируса – модификация белков оболочки вектора
транскрипциональный таргетинг – введение в трансген-экспрессирующую кассету специфических для данных тканей промоторных последовательностей.

Слайд 32

ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ ТРАНСГЕНЕЗ. ЖИВОТНЫЕ. Лекция 7

Содержание

СловарьЗигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и

Что означает термин «трансгенные животные»?

humbio.ruТрофобласт – наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации

1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота) 2. Зигота делится надвое 3-4. Митотическое деление продолжается 5. Через 5-6 дней образуется бластоциста 6. Внутреннюю

Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)Создание и амплификация rДНК

В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой рядом

Схемы получения трансгенных животныхМикроинъекция в зиготумикроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку

1. встроился ли трансген в геном?2. несут ли трансген гаметы?3. экспрессируется

Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью микроинъекций

Схемы получения трансгенных животныхРеконструкция эмбрионов с использованием ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)микроинъекция

http://www.stemcells.ox.ac.ukИнъекция в бластоцистуhttp://www.tankonyvtar.hu/

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхРекомбинантные РНК-вирусы Клетка с помощью

Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животныхрисунок из книги Л.И. Патрушева

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхПеренос генов, опосредованный клеточными рецепторамиоснован

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхЭлектропорация. Кратковременное (10 мксек-100 мсек)

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.Создание новых животных, с

Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых компонентов

Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки (например, сообщалось

Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов. (например, из

Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по отдельным

Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика

Схема получения библиотеки кДНК

ДНК-зонды alko-mir.ru ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем

ДНК-зонды. Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)Зонды с резонансным переносом

Схема получения кДНК. http://bannikov.narod.ru/

Генная терапияв генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе:лентивирусоваденовирусоваденоассоциированных

Сравнение свойств генотерапевтических векторных системhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Словарь Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной

Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного

Методы модификации вирусовфизический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей

http://www.mun.ca

Похожие презентации

Словарь
Зигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и

humbio.ru
Трофобласт –
наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации

Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)
Создание и амплификация rДНК

Схемы получения трансгенных животных
Микроинъекция в зиготу
микроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку

1. встроился ли трансген в геном?
2. несут ли трансген гаметы?
3. экспрессируется

Схемы получения трансгенных животных
Реконструкция эмбрионов с использованием
ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)
микроинъекция

http://www.stemcells.ox.ac.uk
Инъекция в бластоцисту
http://www.tankonyvtar.hu/

Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Рекомбинантные РНК-вирусы
Клетка с помощью

Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных
рисунок из книги Л.И. Патрушева

Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Перенос генов, опосредованный клеточными рецепторами
основан

Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Электропорация.
Кратковременное (10 мксек-100 мсек)

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.
Создание новых животных, с

Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки
(например, сообщалось

Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов.
(например, из

ДНК-зонды
alko-mir.ru
ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем

ДНК-зонды.
Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)
Зонды с резонансным переносом

Схема получения кДНК.
http://bannikov.narod.ru/

Генная терапия
в генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе:
лентивирусов
аденовирусов
аденоассоциированных

Сравнение свойств генотерапевтических векторных систем
http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Словарь
Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной

Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов
1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного

Методы модификации вирусов
физический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей