Взаимодействие электромагнитных излучений с живыми системами. Фотохимические процессы, люминесценция

Июль 28, 2022

Главная
Биология
Взаимодействие электромагнитных излучений с живыми системами. Фотохимические процессы, люминесценция

Содержание

2. 1.Взаимодействие электромагнитных излучений с живыми системами. При прохождении световой волны часть энергии волны затрачивается на возбуждение
3. Поглощение света биосистемами При прохождении монохроматического света через раствор поглощающего свет вещества степень поглощения света прямо
4. С С С С С С ἐ λ, нм С С С С С С λ,
5. Спектры фотобиологического действия Спектром фотобиологического действия называют зависимость фотобиологического эффекта от длины волны действующего света. Количественной
6. Пусть в кювете находится разбавленный раствор какого-то вещества в концентрации n молекул в см3, l-толщина кюветы,
7. Электронные переходы в молекулах при поглощении квантов эми Согласно теории молекулярных орбиталей (МО), в молекуле существует
8. + hν + hν флюоресценции +Q Фотохимическая реакция + hν фосфоресценции +Q Фотохимическая реакция Люминесценция тушение
9. Хемилюминесценция Или сверхслабое свечение, сопровождающее химические реакции. Его впервые зарегистрировал Гурвич в 1934 году как УФ
10. Интенсивность люминесценции (Iл), как и интенсивность всякого света (плотностью потока световой энергии) называют отношение энергии, переносимой
11. Использование люминесценции. Для определения конкретных веществ. Если квантовый выход люминесценции больше 1%, то такие соединения легко
12. Использование люминесценции. Для определения вязкости среды. Степень поляризации флюоресценции (доля поляризованного света в общей суммарной интенсивности
13. Использование люминесценции. Для определения активности нейтрофилов и макрофагов. Различными исследователями обнаружено, что активированные нейтрофилы и макрофаги
14. Использование люминесценции. Люминесцентная микроскопия. Источник света УФ Светофильтр, пропускающий возбуждающий свет объект Светофильтр, пропускающий только свет
15. Использование люминесценции. Иммуноферментный анализ. - антиген - антитело -антитело, меченое флюоресцентной меткой
16. Фотобиологические процессы. К фотобиологическим процессам относятся процессы, начинающиеся поглощением света одним из биологически важных соединений и
17. Рассмотрим фотобиологический процесс на примере Фотоси́нтеза — процесса образования органического вещества из углекислого газа и воды
18. 1.Поглощение кванта света Поглощение квантов ЭМИ светового диапазона происходит в мембранах тилакоидов. Светособирающий комплекс включает хлорофилл,
19. Межмолекулярный перенос энергии возбужденного состояния (миграция энергии) Хлорофилл выполняет две функции: поглощения и передачу энергии. Более
20. Механизм передачи энергии Механизм индуктивного резонанса (Фёрстеровский перенос энергии или FRET от англ. Förster resonance energy
21. Механизм передачи энергии Передача энергии идёт резонансным путём (механизм Фёрстера) и занимает для одной пары молекул
22. Фотосистема — совокупность ССК, фотохимического реакционного центра и переносчиков электрона. Светособирающий комплекс II содержит 200 молекул
23. Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы II П680 восстанавливает феофитин, в дальнейшем электрон переносится на хиноны, входящие
24. Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы II Заполнение электронной вакансии в молекуле П680 происходит за счёт воды.
25. Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы I Светособирающий комплекс I содержит примерно 200 молекул хлорофилла. В реакционном
26. Действие УФ-излучения на белковые системы. O2 AH + hν → AH+ + e → A● +
28. Скачать презентацию

Слайд 2

1.Взаимодействие электромагнитных излучений с живыми системами.
При прохождении световой волны часть энергии

волны затрачивается на возбуждение колебаний электронов. Частично эта энергия переходит в энергию движения атомов (тепло), часть энергии может тратиться на перевод молекулы в возбужденное состояние, в котором она способна вступать в химическую (фотохимическую) реакцию, частично возвращается в виде излучения, порождаемого электронами (флуоресценция).

hν

тепло

люминесценция

Фотохимическая
реакция

Слайд 3

Поглощение света биосистемами
При прохождении монохроматического света через раствор поглощающего свет вещества

степень поглощения света прямо пропорциональна концентрации поглощающего вещества и толщине раствора (длине оптического пути). Эти закономерности выражаются законом Ламберта-Бугера-Бера:
D=lg(I0/I)=ἐcl, где D-т.н. оптическая плотность, I0 и I – интенсивности падающего и прошедшего через объект света, l-толщина раствора (см.), с-концентрация вещества в растворе (М/л), ἐ- молярный коэффициент поглощения (М-1см-1).
Если заменить десятичный логарифм на натуральный, а молярную концентрацию – на число молекул в см3, то вместо ἐ используют поперечное сечение поглощения s=3,8●10-21 ἐ (см2). Смысл (s) – воображаемое эффективное сечение молекулы, при попадании в которое происходит поглощение фотона данной длины волны.
График зависимости D, ἐ или s от длины волны называются спектром поглощения. Чем длиннее система сопряженных двойных связей и чем более делокализованы по молекуле р-электроны, тем максимум погощения находится в более длинноволновой области.

l, см

D=lg(I0/I)=ἐcl

с-концентрация вещества в растворе (М/л),
ἐ- молярный коэффициент поглощения (М-1см-1).

s=3,8●10-21 ἐ (см2)

λ, нм

Слайд 4

С
С
С
С
С
С
ἐ
λ, нм
С
С
С
С
С
С
λ, нм
ἐ
Чем длиннее система сопряженных двойных связей и чем более

делокализованы по молекуле р-электроны, тем максимум погощения находится в более длинноволновой области.

Слайд 5

Спектры фотобиологического действия
Спектром фотобиологического действия называют зависимость фотобиологического эффекта от длины

волны действующего света. Количественной характеристикой эффективности действующего света может служить величина, называемая поперечным сечением фотохимической реакции (ϭ) – не путать с поперечным сечением поглощения.

Слайд 6

Пусть в кювете находится разбавленный раствор какого-то вещества в концентрации n

молекул в см3, l-толщина кюветы, см, I0 и I – интенсивности падающего и прошедшего через объект света. Каждую секунду раствор поглощает (I0 - I) квантов на квадратный сантиметр и при этом в растворе разрушается – (dn/dt)●l молекул.

– (dn/dt)●l = φ(I0 - I)
φ -квантовый выход процесса: число поглощенных фотонов/общее число фотонов.
Также I/I0=e-snl
I0 – I=I0●(1- e-snl)
– (dn/dt)●l = φI0●(1- e-snl)

при snl≤0,1 выражение (1- e-snl) приблизительно равно snl.
Следовательно, – (dn/dt)●l = φ I0 snl
Тогда , – (dn/dt)=φ I0 sn
– (dn/n)=φ I0 sdt
При интегрировании получаем:
In (n0/nt)= φ I0 st=Д ϭ, где Д= I0t – доза облучения, а ϭ= φ s – поперечное сечение фотохимической реакции.

Слайд 7

Электронные переходы в молекулах при поглощении квантов эми
Согласно теории молекулярных орбиталей

(МО), в молекуле существует система молекулярных энергетических уровней, и на каждом из них по два электрона с противоположными спинами. Для химических и оптических свойств молекулы важны самые верхние уровни (именно их электроны принимают участие в химических процессах). Важны таким образом верхняя заполненная молекулярная орбиталь (ВЗМО) и нижняя свободная молекулярная орбиталь (НСМО). Чем выше энергия ВЗМО, тем ниже энергия ионизации, то есть энергия, которую надо затратить, чтобы вырвать электрон из молекулы. Энергия НМСО определяет акцепторные свойства молекулы: чем ниже НМСО, тем более эффективно молекула присоединит электрон. Окислительно-восстановительная реакция будет происходить в том случае, если энергия ВЗМО донора выше энергии НСМО акцептора.

ВЗМО

НСМО

Донор

Акцептор

энергия

Слайд 8

+ hν
+ hν флюоресценции
+Q
Фотохимическая
реакция
+ hν фосфоресценции
+Q
Фотохимическая
реакция
Люминесценция
тушение
тушение

Слайд 9

Хемилюминесценция
Или сверхслабое свечение, сопровождающее химические реакции. Его впервые зарегистрировал Гурвич в

1934 году как УФ излучение, испускаемое животными и растительными клетками. В дальнейшем было показано, что источником этого свечения является рекомбинация перекисных свободных радикалов.

RO2●+ RO2●→продукты*→продукты + hν

Слайд 10

Интенсивность люминесценции (Iл), как и интенсивность всякого света (плотностью потока световой

энергии) называют отношение энергии, переносимой светом через площадь, перпендикулярную световому лучу, к продолжительности времени переноса и к размеру площади. Измеряется либо в Вт/кв.м, либо в эйнштейнах/кв.м с, где эйнштейн (Э) – число фотонов, равное числу Авогадро. Она будет возрастать с увеличением интенсивности падающего света, способности вещества поглощать падающий свет, квантового выхода люминесценции (φ).
Длина волны кванта люминесценции всегда больше, чем кванта возбуждающего света, поскольку часть энергии возбуждения переходит в тепло (Стоксов сдвиг).

Слайд 11

Использование люминесценции. Для определения конкретных веществ.
Если квантовый выход люминесценции больше 1%, то

такие соединения легко обнаруживаются люминесцентным методом.
Высоким квантовым выходом обладает триптофан (мах 350нм), флавины, НАД●Н и НАДф●Н, витамины А, В6, Е, некоторые лекарственные вещества – хинин, некоторые канцерогены: бензпирен, дибензантрацен.

При возбуждении ближним ультрафиолетом (365нм) обнаруживаются грибковые инфекции волос по желто-зеленой флюоресценции. Дерматомикозы у животных. Некоторые соединения, исходно не обладающие флюоресценцией, после химической обработки дают соединения, обладающие высоким квантовым выходом. Таковы героин, морфин, витамины С, В, В12. Чувствительность таких методов – до 10-8 грамма (или примерно до 10-10 М).

Слайд 12

Использование люминесценции. Для определения вязкости среды.
Степень поляризации флюоресценции (доля поляризованного света в

общей суммарной интенсивности флюоресценции) – важный показатель для исследования вязкости среды, содержащей флюоресцирующую молекулу. Если возбуждающий свет поляризован, то и флюоресценция будет поляризована. Но если за время жизни молекулы в возбужденном состоянии (τ) молекула успеет повернуться, то степень поляризации будет ниже, чем в случае, когда она оставалась неподвижной.

Слайд 13

Использование люминесценции. Для определения активности нейтрофилов и макрофагов.
Различными исследователями обнаружено, что активированные

нейтрофилы и макрофаги продуцируют супероксидный радикал О2-(обнаружено по восстановлению цитохрома С, а также по индуцированной люминолом хемилюминесценции). У неактивированных клеток продукция активных форм кислорода не зафиксирована.
Супероксид претерпевает следующие превращения с образованием мощных окислителей:
2Н++О2-+ О2-→Н2О2+О2
Н2О2+Fe2+ → OH●+OH-+Fe3+
NO+ О2-→NOO-
Н2О2+Cl-→ Н2О+ClO-
Обнаружение супероксидов проводится при помощи люминол-зависимой хемилюминесценции.

неактивированный

активированный

О2-

люм

люм*

О2

люм +hν

Слайд 14

Использование люминесценции. Люминесцентная микроскопия.
Источник света
УФ
Светофильтр,
пропускающий
возбуждающий свет
объект
Светофильтр,
пропускающий
только свет
люминесценции
о
объектив
окуляр
При люминесцентной микроскопии можно

изучать первичную (ткани и органы человека и животных имеют нерезкую белесую, голубую или синюю люминесценцию) и вторичную люминесценцию клеток и тканей. Изучение вторичной люминесценции живых и фиксированных клеток и тканей (после их «окраски» флюорохромами) получило широкое распространение. При изучении живых клеток флюоресцирующие вещества применяют в очень малых количествах, не вызывающих токсического действия. В цитологических исследованиях Л. м. применяют при диагностике злокачественных новообразований в соскобах, пунктатах, мокроте, промывных водах. Этот метод позволяет быстро получить ярко окрашенный препарат, в котором атипичные клетки выделяются ярким свечением, оттенками цвета и структурой. Л. м. применяется и в гистохимии. Использование акридинового оранжевого позволяет выявить нуклеиновые кислоты, при этом ДНК дает зеленую, а РНК — красную флюоресценцию. Тот же флюорохром в нефиксированных срезах помогает выявить мукополисахариды, а при модификации этого метода — муцины. Фосфин 3R, родамин В, бензпирен и др. выявляют в срезах липиды.

Слайд 15

Использование люминесценции. Иммуноферментный анализ.
- антиген
- антитело
-антитело, меченое флюоресцентной меткой

Слайд 16

Фотобиологические процессы.
К фотобиологическим процессам относятся процессы, начинающиеся поглощением света одним из

биологически важных соединений и заканчивающиеся определенной физиологической реакцией организма.

Обобщенная схема фотобиологического процесса;
Обязательными стадиями этого процесса будут следующие:
1.Поглощение кванта света;
2.Внутримолекулярные процессы размена энергии;
3.Межмолекулярный перенос энергии возбужденного состояния (миграция энергии);
4.Первичный фотохимический акт;
5.Темновые превращения первичных фотохимических продуктов, завершающиеся образованием стабильных продуктов;
6.Биохимические реакции с участием фотопродуктов;
7.Общефизиологический ответ на действие света

Слайд 17

Рассмотрим фотобиологический процесс на примере Фотоси́нтеза —
процесса образования органического вещества

из углекислого газа и воды на свету при участии фотосинтетических пигментов (хлорофилл у растений, бактериохлорофилл и бактериородопсин у бактерий).

Слайд 18

1.Поглощение кванта света
Поглощение квантов ЭМИ светового диапазона происходит в мембранах тилакоидов.

Светособирающий комплекс включает хлорофилл, каротиноиды.

Структура хлорофилла c1 и c2

Хлорофилл имеет два уровня возбуждения (с этим связано наличие двух максимумов на спектре его поглощения): первый связан с переходом на более высокий энергетический уровень электрона системы сопряжённых двойных связей, второй — с возбуждением неспаренных электронов азота и кислорода порфиринового ядра. При неизменном спине электрона формируются синглетные первое и второе возбуждённое состояние, при изменённом — триплетное первое и второе.

Слайд 19

Межмолекулярный перенос энергии возбужденного состояния (миграция энергии)
Хлорофилл выполняет две функции: поглощения

и передачу энергии. Более 90 % всего хлорофилла хлоропластов входит в состав светособирающих комплексов (ССК), выполняющих роль антенны, передающей энергию к реакционному центру фотосистем I или II. Помимо хлорофилла в ССК имеются каротиноиды, а у некоторых водорослей и цианобактерий — фикобилины, роль которых заключается в поглощении света тех длин волн, которые хлорофилл поглощает сравнительно слабо.

Центр
фотосистемы I

hν

Центр
фотосистемы II

hν

Слайд 20

Механизм передачи энергии
Механизм индуктивного резонанса (Фёрстеровский перенос энергии или FRET от

англ. Förster resonance energy transfer) был предложен в 1948 году Т. Фёрстером. Данный механизм передачи энергии не предполагает переноса электрона или излучения фотонов и последующего поглощения, т.е. является безызлучательным]. Поскольку в возбужденном состоянии электрон представляет собой осциллирующий диполь, создающий переменное электрическое поле, то при выполнении условий резонанса и индукции, он может вызывать аналогичные колебания электрона в соседней молекуле. Условие резонанса заключается в равенстве энергий между основным и возбуждённым состоянием соседних молекул, т.е. необходимо перекрывание спектров поглощения и флуоресценции этих молекул. Также для успешной индукции необходимо близкое расположение взаимодействующих молекул (не более 10 нм). Известно, что межмолекулярное расстояние в ССК составляет от 2 до 3 нм; а существование серии различных нативных форм пигментов обеспечивает хорошее перекрывание их спектров. Всё это создает хорошие условия для передачи энергии по механизму индуктивного резонанса. Скорость передачи энергии при Фёрстеровском переносе находится диапазоне 10-9-10-12 с[6], что связано с передачей энергии последовательно от пигмента-донора к пигменту-акцептору[7]

Слайд 21

Механизм передачи энергии
Передача энергии идёт резонансным путём (механизм Фёрстера) и занимает

для одной пары молекул 10-10-10-12 сек., расстояние на которое осуществляется перенос составляет около 1 нм. Передача сопровождается некоторыми потерями энергии (10 % от хлорофилла a к хлорофиллу b, 60 % от каратиноидов к хлорофиллу), из-за чего возможна только от пигмента с максимумом поглощения при меньшей длине волны к пигменту с большей. Именно в таком порядке взаимно локализуются пигменты ССК, причём наиболее длинноволновые хлорофиллы находятся в реакционных центрах. Обратный переход энергии невозможен.

Слайд 22

Фотосистема — совокупность ССК, фотохимического реакционного центра и переносчиков электрона. Светособирающий

комплекс II содержит 200 молекул хлорофилла a, 100 молекул хлорофилла b, 50 молекул каротиноидов и 2 молекулы феофитина. Реакционный центр фотосистемы II представляет собой пигмент-белковый комплекс, расположенный в тилакоидных мембранах и окружённый ССК. В нём находится димер хлорофилла a с максимумом поглощения при 680 нм (П680). На него в конечном счёте передаётся энергия кванта света из ССК, в результате чего один из электронов переходит на более высокое энергетическое состояние, связь его с ядром ослабляется и возбуждённая молекула П680 становится сильным восстановителем (E0=-0,7 В).

Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы II

Х-л а

hν

П680

ССК

(E0= -0,7 В)

Слайд 23

Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы II
П680 восстанавливает феофитин, в дальнейшем электрон

переносится на хиноны, входящие в состав ФС II и далее на пластохиноны. Одна молекула пластохинона переносит 2 электрона и 2 протона, которые берутся из стромы.

П680

феофитин

хиноны
П680+

(E0= -0,7 В)

Слайд 24

Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы II
Заполнение электронной вакансии в молекуле П680 происходит

за счёт воды. В состав ФС II входит водоокисляющий комплекс, содержащий в активном центре ионы марганца в количестве 4 штук. Для образования одной молекулы кислорода требуется две молекулы воды, дающие 4 электрона. Поэтому процесс проводится в 4 такта и для его полного осуществления требуется 4 кванта света. Комплекс находится со стороны внутритилакоидного пространства и полученные 4 протона выбрасываются в него.
Таким образом, суммарный результат работы ФС II — это окисление 2 молекул воды с помощью 4 квантов света с образованием 4 протонов во внутритилакоидном пространстве и 2 восстановленных пластохинонов в мембране.
П680+

Водоокисляющий комплекс

2H2O = O2 + 4H++4e (E=1,228 B)

Слайд 25

Первичный фотохимический акт. Центр фотосистемы I
Светособирающий комплекс I содержит примерно 200 молекул

хлорофилла.
В реакционном центре первой фотосистемы находится димер хлорофилла a с максимумом поглощения при 700 нм (П700). После возбуждения квантом света он восстанавливает первичный акцептор — хлорофилл a, тот — вторичный (витамин K1 или филлохинон), после чего электрон передаётся на ферредоксин, который и восстанавливает НАДФ с помощью фермента ферредоксин-НАДФ-редуктазы.

hν

Х-л а

П770

Первичный
акцептор

НАДФ+ + e = HAДФ

Слайд 26

Действие УФ-излучения на белковые системы.
O2
AH + hν → AH+ + e

→ A● + е + H+ → AO2

Рекомбинация и ХЛ

Димеры А-А

Нарушение конформации, повреждение активного центра

RS-SR+hν→RS●

Энергия УФ кванта не достаточна для фотолиза воды, но достаточна, для выбивания электронов из ароматических аминокислот и гомолитического расщепления цистина

Взаимодействие электромагнитных излучений с живыми системами. Фотохимические процессы, люминесценция

Содержание

1.Взаимодействие электромагнитных излучений с живыми системами. При прохождении световой волны часть энергии

Поглощение света биосистемамиПри прохождении монохроматического света через раствор поглощающего свет вещества

ССССССἐλ, нмССССССλ, нмἐЧем длиннее система сопряженных двойных связей и чем более

Спектры фотобиологического действияСпектром фотобиологического действия называют зависимость фотобиологического эффекта от длины

Пусть в кювете находится разбавленный раствор какого-то вещества в концентрации n

Электронные переходы в молекулах при поглощении квантов эмиСогласно теории молекулярных орбиталей

+ hν+ hν флюоресценции+QФотохимическаяреакция+ hν фосфоресценции+QФотохимическаяреакцияЛюминесценциятушениетушение

ХемилюминесценцияИли сверхслабое свечение, сопровождающее химические реакции. Его впервые зарегистрировал Гурвич в

Интенсивность люминесценции (Iл), как и интенсивность всякого света (плотностью потока световой

Использование люминесценции. Для определения конкретных веществ.Если квантовый выход люминесценции больше 1%, то

Использование люминесценции. Для определения вязкости среды.Степень поляризации флюоресценции (доля поляризованного света в

Использование люминесценции. Для определения активности нейтрофилов и макрофагов.Различными исследователями обнаружено, что активированные

Использование люминесценции. Иммуноферментный анализ.- антиген- антитело-антитело, меченое флюоресцентной меткой

Фотобиологические процессы.К фотобиологическим процессам относятся процессы, начинающиеся поглощением света одним из

Рассмотрим фотобиологический процесс на примере Фотоси́нтеза — процесса образования органического вещества

1.Поглощение кванта светаПоглощение квантов ЭМИ светового диапазона происходит в мембранах тилакоидов.

Межмолекулярный перенос энергии возбужденного состояния (миграция энергии)Хлорофилл выполняет две функции: поглощения

Механизм передачи энергииМеханизм индуктивного резонанса (Фёрстеровский перенос энергии или FRET от

Механизм передачи энергииПередача энергии идёт резонансным путём (механизм Фёрстера) и занимает