Технологии, используемые в исследованиях лаборатории механизмов нейрохимической модуляции

Август 9, 2022

Главная
Химия
Технологии, используемые в исследованиях лаборатории механизмов нейрохимической модуляции

Содержание

2. 1. Изменение активности серотониновых и дофаминовых структур мозга и локализованных в них медиаторных и опиоидных рецепторов.
3. EFFECT OF ELECTROLYTIC DESTRUCTION OF THE NIGROSTRIATAL AND MESOLIMBIC BRAIN STRUCTURES ON THE IMUNE RESPONSE А10
4. б). Фармакологический анализ с системным применением препаратов нового поколения и высокоизбирательного действия, активирующих или блокирующих пре-
5. Number of antibody-forming cells (AFC) in С57BL/6J mice, receiving 8-ОН- DPAT(2). Control (1). Primary and secondary
6. Activation of DAergic system in old C57BL/6J mice after stress exposure elevates the immune reaction to
7. Схематическое изображение серотонинергического нейрона с обозначением возможной локализации подтипов серотониновых рецепторов
8. Effect of activation and blockade of pre- and postsynaptic 5-HT1A receptors on the immune response 8-OH-DPAT
10. 2. Экспериментальное моделирование различных психоэмоциональных состояний - один из основных подходов для изучения патогенетических механизмов различных
11. I. АГРЕССИВНОЕ, СУБМИССИВНОЕ, ДЕПРЕССИВНО-ПОДОБНОЕ СОСТОЯНИЕ, СФОРМИРОВАННОЕ В РЕЗУЛЬТАТЕ СОЦИАЛЬНЫХ КОНФРОНТАЦИЙ (мыши линии СВА и С57BL/6J) 2
12. Экспериментальные модели II. НАСЛЕДСТВЕННО-ДЕТЕРМИНИРОВАННОЕ ДЕПРЕССИВНО- ПОДОБНОЕ СОСТОЯНИЕ (мыши линии ASC) Родительские линии без депрессивного поведения: СВА
13. Модели исследования: I. Агрессивность, индуцированная социальным стрессом Агрессия нападения «offensive» у мышей линий СВА и C57BL/6J
14. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К РАЗЛИЧНОМУ УРОВНЮ АГРЕССИВНОСТИ У КРЫС (70-75 поколение селекции диких серых крыс на отсутствие
15. 3. Оценка иммунологической реактивности а). лазерный проточный цитометр-«FACS Сalibur (Becton Dickinson, USA) с програмным обеспечением ”CellQuest
17. Возможности проточной цитометрии
18. Определение методом проточной цитофлюориметрии субпопуляции лимфоцитов меченных трёхцветными МАТ CD3+ CD4+ CD25+
19. * * CD4+ Т-хелперы CD8+ супрессорные/цитотоксические Т-клетки Периферическая кровь + ** * * * Селезенка Процентное
20. Изменение числа CD4+ и CD8+Т-клеток в костном мозге у агрессивных и субмиссивных неиммунизированных мышей линии C57BL/6J
21. Определение цитокинов методом проточной цитометрии (наборы и программа FlowCytomix)
22. На цитограмме флюоресценции отображаются три цитокина пула Р1 и два других цитокина пула Р2
23. Данные отчета FlowCytomix по содержанию цитокинов у крыс
24. Содержание IL-1альфа и MCP-1 (пг/мл) в периферической крови у агрессивных и ручных крыс Ручные крысы Агрессивные
25. б). Определение в селезенке числа IgM- и IgG-антителообразующих клеток по числу прямых и непрямых (при добавлении
26. б).
27. б). б).
29. Скачать презентацию

Слайд 2

1. Изменение активности серотониновых и дофаминовых структур мозга и локализованных в

них медиаторных и опиоидных рецепторов.
Для этого применяется
а). Стереотаксическая техника – двойной цифровой стереотаксис (Stoelting Co, USA) и микроинъекционный насос-310. Метод используется для выключения определенных структур мозга электролитическим разрушением или введением нейротоксинов.
Технология является общепринятой для изучения вклада структур мозга в регуляцию различных физиологических процессов, при этом данный стереотаксис отличается от других наличием электронных датчиков перемещения по трем осям координат, которые отслеживаются на экране. Прибор позволяет определять координаты мозга с точностью от 1 мм. до 10 мк.

Слайд 3

EFFECT OF ELECTROLYTIC DESTRUCTION OF THE NIGROSTRIATAL AND MESOLIMBIC BRAIN

STRUCTURES ON THE IMUNE RESPONSE

А10

AFC/106 ( %)

контроль

А9

n.cd

n.acc

* P<0,001 compared to the control

control

Слайд 4

б). Фармакологический анализ с системным применением препаратов нового поколения и высокоизбирательного

действия, активирующих или блокирующих пре- и постсинаптические рецепторы: серотониновые 1А , 2А, дофаминовые Д1 и Д2, опиоидные мю-, капп- и дельта- рецепторы.

Слайд 5

Number of antibody-forming cells (AFC)
in С57BL/6J mice,
receiving 8-ОН- DPAT(2).

Control (1).

Primary and secondary immune response in BALB/с mice, immunized with BSA (5 mg/kg), following 5-НТР administration (2). Control (1).

1 2

Pathways of realization of immune response suppression under activation of serotoninergic (5-НTergic) system (5-НТ, 5-НТР, sertraline, 8-ОН-DPAT, DOI, iprazid)

Increase of СD8+ Т-lymphocyte number in bone marrow under sertraline (2) administration. Control (1).

1 2

hypophysis

adrenals

Слайд 6

Activation of DAergic system in old C57BL/6J mice after stress exposure

elevates the immune reaction to its level in non-stressed young animals
Number of AFC in Wistar rats, receiving quinpirol (2). Control (1).

Pathways of realization of immune response stimulation under activation of dopaminergic (DAergic) system (L-DOPA, amantadine, bupropion, apomorphine, quinpirol, SKF-38393)

1 2

Increase of СD4+ Т-lymphocyte number in bone marrow under bupropione administration (2). Control (1).

2,0-2,5 года

2,0-2,5 месяца

stress+
apomorphine

thymus

Control

apomorphine

stress

1 2

hypophysis

Young mice
old mice

Слайд 7

Схематическое изображение серотонинергического нейрона с обозначением возможной локализации подтипов серотониновых рецепторов

Слайд 8

Effect of activation and blockade of pre- and postsynaptic 5-HT1A receptors

on the immune response

8-OH-DPAT 1.0 mg/kg

WAY-100635 1.0 mg/kg

WAY-100635 1.0 mg/kg+ 8-OH-DPAT 1.0 mg/kg

8-OH-DPAT 0.1 mg/kg

WAY-100635 0.1 mg/kg

WAY-100635 0.1 mg/kg + 8-OH-DPAT 0.1mg/kg

*p<0,01, **P<0,001 compared to the control

AFC per 106 cells

postsynaptic
5-HT1A receptors

presynaptic
5-HT1A receptors

Control

Слайд 9

Слайд 10

2. Экспериментальное моделирование различных психоэмоциональных состояний - один из основных подходов

для изучения патогенетических механизмов различных психоэмоциональных отклонений и поиска новых эффективных терапевтических средств их лечения.
а). Формирование агрессивного, субмиссивного и депрессивно-подобного поведения при воздействии хронического социального стресса (метод дистантного сенсорного контакта).
б). Использование моделей генетически детерминированного поведения - депрессивно-подобное поведение (мыши линии ASC-Antidepressant Sensitive Catalepsy), повышенная агрессивность или отсутствие агрессивности у крыс.

Слайд 11

I. АГРЕССИВНОЕ, СУБМИССИВНОЕ, ДЕПРЕССИВНО-ПОДОБНОЕ СОСТОЯНИЕ, СФОРМИРОВАННОЕ В РЕЗУЛЬТАТЕ СОЦИАЛЬНЫХ КОНФРОНТАЦИЙ (мыши

линии СВА и С57BL/6J)

2 дня сенсорного контакта

10 или 20 дней тестирования конфронтаций

Введение селективных препаратов или соответствующего растворителя

Иммунизация ЭБ (5х108)

Определение IgM-, IgG-АОК через 4-9 дней после введения антигена

Экспериментальные модели

Анализ CD4+, CD8+, CD16/32+

Слайд 12

Экспериментальные модели
II. НАСЛЕДСТВЕННО-ДЕТЕРМИНИРОВАННОЕ ДЕПРЕССИВНО- ПОДОБНОЕ СОСТОЯНИЕ (мыши линии ASC)
Родительские линии без

депрессивного поведения:
СВА (каталептическая линия) AKR (некаталептическая линия)
Мыши линии ASC (Antidepressant sensitive catalepsy)
с повышенной предрасположенностью к каталепсии и
ВЫРАЖЕННЫМ ДЕПРЕССИВНО-ПОДОБНЫМ ПОВЕДЕНИЕМ:
1. Увеличение времени неподвижности в тесте «принудительное плавание» (Базовкина и др., 2005);
2. Увеличение времени неподвижности в тесте «tail suspension» (Базовкина и др., 2005);
3. Снижение двигательной активности в тесте «открытое поле» (Базовкина и др., 2005);
4. Нарушение процесса угашения выработанной реакции пассивного избегания (Дубровина и др., 2008);
5. Чувствительность к антидепрессантам (имипрамину и флуоксетину) (Тихонова и др., 2005, 2009).

Слайд 13

Модели исследования:
I. Агрессивность, индуцированная социальным стрессом
Агрессия нападения «offensive» у мышей

линий СВА и C57BL/6J с различным опытом побед в течение длительных конфронтационных взаимодействий;
II. Наследственно детерминированная агрессия:
Защитно-оборонительная «defensive» агрессия у крыс, селектированных в течение 70-75 поколений на высокую агрессивность и ее отсутствие по отношению к человеку (агрессия , вызванная страхом)

Слайд 14

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К РАЗЛИЧНОМУ УРОВНЮ АГРЕССИВНОСТИ У КРЫС

(70-75 поколение селекции диких серых крыс на отсутствие и усиление агрессивности по отношению к человеку, ФГБУН «ИЦиГ» СО РАН)
Крысы c высокой агрессивностью характеризуются:
высокой межсамцовой агрессией, повышенным уровнем эмоциональности, тревожности и стресс-реактивности, пониженной исследовательской активностью и способностью к пространственному обучению в водном тесте Морриса (Plyusnina, Oskina, 1997; Albert et al., 2008; Konoshenko et al., 2013);
повышенным базальным уровнем адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортикостерона, а также реакцией гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы на стресс (Naumenko et al., 1989; Plyusnina, Oskina, 1997)
пониженным содержанием серотонина и его метаболита в среднем мозге и гипоталамусе, сниженной функциональной активностью 5-НТ1А- и 5-НТ1С – рецепторов, экспрессией генов 5-НТ1А - и 5-НТ1С- рецепторов и высоким уровнем дофамина в стриатуме и мезолимбической системе (Naumenko et al., 1989; Plyusnina, Oskina, 1997; Albert et al., 2008; Popova et al.,1998, 2010; Naumenko et al., 2009, 2013)

Слайд 15

3. Оценка иммунологической реактивности
а). лазерный проточный цитометр-«FACS Сalibur (Becton Dickinson, USA)

с програмным обеспечением ”CellQuest Pro” для анализа субпопуляционного состава клеток в иммунокомпетентных органах и периферической крови; для приготовления клеток используется счетчик форменных элементов крови «Пикоскель ПС-4м» (ООО НПФ «Лабовэй», Россия). В последние годы появились наборы, позволяющие методом проточной цитометрии определять и цитокины.

Слайд 16

Слайд 17

Возможности проточной цитометрии

Слайд 18

Определение методом проточной цитофлюориметрии субпопуляции лимфоцитов меченных трёхцветными МАТ CD3+ CD4+

CD25+

Слайд 19

*
*
CD4+ Т-хелперы
CD8+ супрессорные/цитотоксические
Т-клетки
Периферическая кровь
+
**
*
*
*
Селезенка
Процентное содержание CD4+, CD8+ Т-клеток и их

сооотношения (CD4+ /CD8+ ) в периферической крови и селезенке у неиммунизированных мышей линий CBA и ASC

CD4+ /CD8+

Слайд 20

Изменение числа CD4+ и CD8+Т-клеток в костном мозге у агрессивных и

субмиссивных неиммунизированных мышей линии C57BL/6J после 10-ти и 20-ти дневного тестирования конфронтаций

Агрессивные мыши

Субмиссивные мыши

* - Р<0,01 * * Р<0,001 по сравнению с контролем ;
о - Р<0,01 по сравнению с агрессивными животными 10-ти дневного теста
# - Р< 0,05 по сравнению с субмиссивными животными 10-ти дневного теста

Слайд 21

Определение цитокинов методом проточной цитометрии (наборы и программа FlowCytomix)

Слайд 22

На цитограмме флюоресценции отображаются три цитокина пула Р1 и два других

цитокина пула Р2

Слайд 23

Данные отчета FlowCytomix по содержанию цитокинов у крыс

Слайд 24

Содержание IL-1альфа и MCP-1 (пг/мл) в периферической крови у агрессивных и

ручных крыс

Ручные крысы

Агрессивные крысы

Слайд 25

б). Определение в селезенке числа IgM- и IgG-антителообразующих клеток по числу

прямых и непрямых (при добавлении анти-мышинных антител к иммуноглобулину G) бляшек.
Хотя метод предложен в конце 60 годов, он рассматривается и сегодня как «золотой стандарт» оценки числа антителообразующих клеток на введение Т-зависимого антигена (Ladics, 2007), по которому можно судить о продукции антиген-специфических антител, являющихся основным защитным механизмом гуморального иммунного ответа. Оборудование – микроскопы, термостаты, бифокальная лупа.

Слайд 26

б).

Слайд 27