Патогенные микобактерии

бугорок) – инфекционное заболевание
человека и животных, характеризуется образованием специфических
воспалительных изменений (бугорков) в различных органах, с преимущественной локализацией в легких и лимфатических узлах.
Наука о туберкулезе – фтизиатрия (от греч. phthisis –истощение, чахотка,
увядание).

Возбудители туберкулеза:
М. tuberculosis (бацилла Коха)
M. bovis
M. africanum
M. avium

“Современная клиническая бактериология начинается с открытия туберкулезной бациллы Р.Кохом” (Габричевский Г.Н.)

течение 3-5 минут карболовым фуксином Циля.

4. Докрашивают дополнительно метиленовым синим Леффлера.

Возбудитель туберкулеза

Возбудитель лепры

2. Окрашенный препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты.

3.Промывают водой.

митохондрии клеток зараженного макроорганизма, нарушает функцию дыхания

Жирные кислоты способствуют распаду клеточных элементов, творожистому перерождению тканей.

и др.;
контактные лица в семье, на производстве;
лица с посттуберкулезными изменениями в легких;
ВИЧ-инфицированные лица с пылевыми заболеваниями легких, сахарным диабетом и др.
лица, получающие цитостатики, лучевую терапию, кортикостероиды

Каждый год от туберкулеза умирают 3 миллиона землян. И заболевают 8 миллионов. Уже болеющие "старички" с новичками, пополняющими ряды больных, вместе составляют 15 миллионов человек. Пятая часть из них, увы, вскоре отправится в мир иной. Этот конвейер смерти медицина до сих пор не может остановить.

–легких, плевры, верхних
дыхательных путей
Внелегочный туберкулез – мозговых оболочек, глаз,
суставов и костей, кожи и подкожной клетчатки,
кишечника и брюшины, органов моче-половой системы

учеными Кальметтом и Гереном путем длительного культивирования (в течение 18 лет) вирулентного штамма M.bovis на картофельно-глицериновой среде с добавлением бычьей желчи.

аспираты, плевральная жидкость, ликвор, моча, костный мозг, гной, сыворотка крови и др. Мы рассмотрим на примере исследования мокроты.

А.Микроскопическое исследование: Является предварительным, т.к. не дает возможности гарантировано дифференцировать возбудителей туберкулеза от других микобактерий.
Существует несколько вариантов микроскопического исследования:
Прямая микроскопия исследуемого материала.
Готовят мазки, растирая гнойный комочек мокроты между предметными стеклами, и окрашивают их по способу Циль-Нильсена → под микроскопом видны рубиново-красные кислотоустойчивые микобактерии на общем голубом фоне мокроты; некислотоустойчивые бактерии и форменные элементы имеют синий цвет.
(Для положительного заключения необходимо просмотреть 100 полей зрения, указав количество обнаруженных в них кислото-устойчивых бактерий). Прямая микроскопия – это сравнительно малочувствительный метод, позволяющий обнаружить микобактерии при их содержании в мокроте не менее 100 тыс.кл/мл

из мокроты и их концентрации в малом объеме; используют методы гомогенизации и флотации.
А) Гомогенизация. В банку с мокротой, собранной в течение суток, + 1% NaOH и энергично встряхивают в шюттель-аппарате. Гомогенизированную мокроту центрифугируют при 3000 об/мин, осадок нейтрализуют, добавив 1-2 капли 10% HCI. Мазки из осадка окрашивают по Циль-Нильссену.
Б) Флотация. Гомогенизированную мокроту помещают в колбу + 1-2 мл ксилола (бензола) и встряхивают в течение 10 мин, доливают дистиллированную воду до горлышка колбы и дают отстояться. В горлышке колбы образуется сливкообразный слой, состоящий из всплывших мельчайших капелек ксилола с сорбированными на них микобактериями. Из этого слоя готовят мазки на предметном стекле путем повторного наслаивания и окрашивают их по Циль-Нильссену.
Методы обогащения повышают вероятность обнаружения микобактерий на 10%.

светиться в люминесцентном микроскопе.
Мазки, приготовленные из осадка гомогенизированной мокроты (или флотационные мазки), окрашивают водным раствором флюоресцентных красителей (ауромин + родамин С), микроскопируют в люминесцентном микроскопе с объективом х40.
Туберкулезные микобактерии светятся золотисто-желтым светом на темно-зеленом фоне, нетуберкулезные микобактерии дают зеленое свечение.
Люминесцентная микроскопия повышает вероятность выявления микобактерий на 17%, т.е. наиболее чувствительная из микроскопических методов.

бактериологического метода (предварительное микрокультивирование). Дает возможность выявить туберкулезные микобактерии при их малом содержании, а также наличие у них корд-фактора и тем самым доказать их вирулентность.
●Готовят мазки из осадка (центрифугата) гомогенизированной мокроты или флотационного слоя, выдерживают их 15 мин в 2% H2SO4 для уничтожения посторонней микрофлоры, промывают стерильной дистиллированной водой. Несколько стекол с мазками помещают в широкую пробирку с жидкой синтетической питательной средой (или разведенной цитратной кровью) и инкубируют при 37ºС.
●Через каждые 3-5 дней, последовательно, вынимают по одному мазку и окрашивают по Циль-Нильсену. Обычно через 6-10 дней на стеклах наблюдается рост микроколоний, выявляемых при микроскопии.

Результат: ▪ Вирулентные туберкулезные микобактерии, содержащие корд-фактор, образуют микроколонии из тесно слеенных между собой рубиново-красных палочек в виде изогнутых жгутов или кос.
▪ Микроколонии невирулентных туберкулез-ных микобактерий представляют собой беспорядочные рыхлые скопления бактери-альных клеток.

культуры возбудителя туберкулеза; для определения лекарственной устойчивости (степень ее чувствительности) к химиотерапевтическим препаратам. Этим методом удается выделять микобактерии при их концентрации от 2-100 живых бактерий в 1 мл клинического материала. NB – Основной недостаток – длительность исследования.
Последовательность исследования:
Исследуемый материал (мокроту) - для концентрации микобактерий и уничтожения посторонней микрофлоры - предварительно обрабатывают 2% NaОH или 10% H2SO4, подвергая встряхиванию и центрифугированию;
Полученный осадок нейтрализуют и засевают в несколько пробирок с яичной средой Левенштейна-Йенсена (рекомендована ВОЗ); среды: яичная среда Финна – II; карто-фельно-глицериновая; жидкая среда Сотона.
Засеянные пробирки плотно закупоривают во
избежание высыхания и инкубируют при 37ºС до
2-3 мес., еженедельно просматривая. Видимый
рост появляется, начиная с 10-12-14 дней и позже.
→ М.Т. образуют сухие, морщинистые грубые
колонии кремового цвета (R-формы).
M.bovis отличается более скудным и медленным
ростом.

этого ставят ниациновую пробу. Только М.Т. способны
синтезировать никотиновую кислоту (ниацин) при культиви-
ровании на яичных средах. Для выявления ниацина к вырос-
шей культуре добавляют растворы 10% цианистого бромида
и 4% анилина. В положительном случае появляется ярко-жел-
тое окрашивание.
2) Кроме того, у чистой культуры изучают скорость роста, обра
зование пигмента (на свету или в темноте), способность к рос-
ту при 20-25ºС и к росту на простых питательных средах, наличие каталазы и пероксидазной активности (см. табл)
Таблица. Дифференциальные признаки возбудителей туберкулеза

определяют степень лекарственной устойчивости к противотуберкулезным химиопрепаратам. Для этой цели культуру засевают в пробирки с яичной средой Левенштейна-Йенсена, в которые перед свертыванием были внесены различные концентрации химиопрепаратов. Окончательную оценку проводят после 3-х недель инкубации. Учитывают отсутствие роста или степень его интенсивности в присутствии различных концентраций химиопрепаратов.
Полученные результаты используют для назначения рациональной
химиотерапии.

чаще – при диагностике туберкулеза почек. Материалом от больного заражают лабораторных животных (морских свинок, чувствительных к М.Т.; кроликов – восприимчивых к М.Вovis.).
Наблюдают за животными в течение 1-2 мес до
их гибели. С 5-10 дня после заражения можно
исследовать пунктат лимфатических узлов.
Д. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Проводят для выявления АТ в сыворотках больных туберкулезом или микобактериозом, а также для обнаружения АГ-ов микобактерий в исследуемом материале. С этой целью ставят: РСК, РНГА, РИА, ИФА
Е. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД - ПЦР
Позволяет выявлять 1-10 микробных клеток в исследуемом образце

вакциной БЦЖ, инфицированных и больных туберкулезом. Осуществляется с помощью препаратов туберкулина, который вводят накожно или внутрикожно.
1. Проба Манту – внутрикожная проба – применяется как основной метод туберкулинодиагностики при массовых ежегодных обследованиях. Ее назначение: 1 – отбор контингентов лиц для ревакцинации БЦЖ; 2 – для диагностики туберкулеза, в том числе раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и подростков; 3 – для определения инфицирования микобактериями туберкулеза.

При постановке пробы Манту туберкулин вводят на внутреннюю поверхность предплечья
строго внутрикожно. Учитывают реакцию через 72 ч. Проба Манту считается
(-) при наличии только уколочной реакции (0-1 мм),
сомнительной при гиперемии без папулы или наличии папулы диаметром 2-4 мм;
(+) – при папуле диаметром 5 мм и более.

микобактерий. При введении его подкожно, организм че-
ловека реагирует на него, вызывая воспалительный аллергический
процесс в виде отечности и покраснения (папулы). Манту показывает,
встречался ли организм с туберкулином раньше ( это может быть заболевание, заражение, с
с которым организм справился самостоятельно или с помощью БЦЖ.
Диаскинтест – содержит синтетические АГ двух видов (CFP10 и ESAT6). Такие белки есть в возбудителях туберкулеза и при введении также вызывают аллергическую реакцию. Причем реакция на Диаскинтест возникает только в случае активного процесса в организме – заболева-ния или заражении, которое не всегда переходит в болезнь. Рез-ты теста определяют через 72 часа. В отличие от пробы Манту, реакция на Диаскинтест возникает, только если в организме есть активные микобактерии туберкулеза. Диаскентест
более специфичен и не реагирует на другие штаммы, не
вызывающие туберкулез. Не реагирует Диаскинтест так-
же и на прививку БЦЖ. Поэтому его часто назначают пос-
ле пробы Манту для проведения дифференциальной диаг –
ностики. В отличие от пробы М., которая может дать
+-реакцию, если есть в организме микобактерии, не
вызывающие болезни, Диаскинтест чувствителен толь-
ко к возбудителям туберкулеза.

методу Циль-Нильсена в красный
цвет.
M. leprae – строгий внутриклеточный
паразит, не культивируется на
искусственных питательных средах.
Скопления бактерий в клетках – в
виде шаров или палочек сигар.

Герхард Хансен

Лепра (от lepo – лущить) – проказа, болезнь Хансена –
антропонозный генерализованный микобактериоз с длительным
инкубационным периодом, протекает в виде хронической болезни
с поражением кожи, слизистых оболочек, периферической нервной
системы и внутренних органов.