ISTORIYa_IZUChENIYa_MEMBRAN.ppt

1851 Гуго МОЛЬ (1805—1872) ОПИСАЛ ПЛАЗМОЛИЗ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК, ПРЕДПОЛОЖИЛ, ЧТО КЛЕТКИ

1855 К. НАГЕЛИ: КЛЕТОЧНАЯ ПОВЕРХНОСТЬ – БАРЬЕР ДЛЯ ПРОНИКНОВЕНИЯ КРАСИТЕЛЯ В

Микроскопы XVIII века

Современный микроскоп

Микроскоп, 1876 год

Клеточная стенка

ЭКСПЕРИМЕНТЫ ОВЕРТОНА

Э.Овертон (1895 г.):
клеточная мембрана избирательно проницаема, т.к. через нее

МОНОСЛОЙ ЛИПИДОВ НА ПОВЕРХНОСТИ ВОДЫ

Э.ГОРТЕР И Ф.ГРЕНДЕЛ ЭКСТРАГИРОВАЛИ ЛИПИДЫ ИЗ МЕМБРАН

ЭКСПЕРИМЕНТ Э.ГОРТЕРА И Ф.ГРЕНДЕЛА

БИСЛОЙ ГОРТЕРА - ГРЕНДЕЛА

ЭЛЕКТРОННЫЙ МИКРОСКОП

ЭЛЕКТРОНЫ УСКОРЯЮТСЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКИМ ПОЛЕМ НАПРЯЖЕНИЕМ 105 В, ИХ СКОРОСТЬ 106

ТРЕХСЛОЙНОЕ ИЗОБРАЖЕНИЕ БИОМЕМБРАНЫ НА ЭЛЕКТРОНОГРАММЕ

ВНУТРИКЛЕТОЧНОЕ ПРОСТРАНСТВО

ВНЕКЛЕТОЧНОЕ ПРОСТРАНСТВО

МЕЖДУ ПАРОЙ ТЕМНЫХ ПОЛОС –

МОДЕЛИ МЕМБРАНЫ

Унитарная модель мембраны Робертсона

Модель Даниэлли - Давсона

Джеймс Дэвид Робертсон
(

МЕТОД ЗАМОРАЖИВАНИЯ - СКАЛЫВАНИЯ

Николсон и Сингер

СХЕМА ЖИДКОСТНО-МОЗАИЧНОЙ МОДЕЛИ МЕМБРАНЫ С.СИНГЕРА И

А скалывание образца
Б разделение двух половинок
В возгонка льда (травление)
Г напыление парами

МИКРОФОТОГРАФИЯ МЕМБРАНЫ, ПРИГОТОВЛЕННОЙ МЕТОДОМ ЗАМОРАЖИВАНИЯ – СКАЛЫВАНИЯ

ЭЛЕКТРОНОГРАММА ПОВЕРХНОСТЕЙ СКОЛА БИОМЕМБРАНЫ (МЕТОД ЗАМОРАЖИВАНИЯ - СКАЛЫВАНИЯ)

ВЫСТУПАМ (1- 5) НА

МОДЕЛЬ МЕМБРАНЫ ЭРИТРОЦИТА

МИЕЛИНОВАЯ ОБОЛОЧКА

ЭТАПЫ ИЗУЧЕНИЯ МЕМБРАН

ФУНКЦИИ МЕМБРАН

ИСКУССТВЕННЫЕ МЕМБРАНЫ

ИСКУССТВЕННЫЕ МЕМБРАНЫ - ЛИПОСОМЫ

Однослойные липосомы

Приготовление бимолекулярных липидных мембран (БЛМ)
1 -стеклянный стакан
2 - раствор

A - вносим с помощью капилляра (4) каплю раствора фосфолипида в

Самосборка фосфолипидных везикул в водном растворе

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕМБРАН

МЕТОДЫ

ВЫДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН
ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
ЭКСТРАКЦИЯ ЛИПИДОВ И БЕЛКОВ МЕМБРАН
РАЗДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ НА КЛАССЫ
ИДЕНТИФИКАЦИЯ

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ МЕМБРАН

НЕДЕСТРУКТИВНЫЕ ДЕСТРУКТИВНЫЕ

ПОЛУЧЕНИЕ ВЕЗИКУЛ, ОТДЕЛЯЮЩИХСЯ ОТ ПОВЕРХНОСТИ КЛЕТОК

ОСМОТИЧЕСКИЙ

НЕДЕСТРУКТИВНЫЕ МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ МЕМБРАН

ИНКУБАЦИЯ КЛЕТОК В СРЕДАХ
ОПРЕДЕЛЕННОГО СОСТАВА ПРИВОДИТ К

ДЕСТРУКТИВНЫЕ МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ МЕМБРАН

ГИПООСМОТИЧЕСКИЙ ШОК (ДЛЯ ЭРИТРОЦИТОВ)
ПОЛУЧЕНИЕ ТЕНЕЙ ЭРИТРОЦИТОВ

ЭРИТРОЦИТЫ

ТЕНИ ЭРИТРОЦИТОВ

РАЗДЕЛЕНИЕ МЕМБРАН НА ФРАКЦИИ ПУТЕМ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ (при постоянном

ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СУБКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ ИСПОЛЬЗУЮТ МЕТОД ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОГО ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ (при различном центробежном

ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ МЕМБРАННЫХ ПРЕПАРАТОВ (по маркерным ферментам)

ИЗУЧЕНИЕ МЕМБРАННЫХ ЛИПИДОВ И БЕЛКОВ

ВЫДЕЛЕНИЕ МЕМБРАННЫХ ЛИПИДОВ

ЭКСТРАКЦИЯ ЛИПИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СМЕСИ ПОЛЯРНЫХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ (МЕТАНОЛ, ХЛОРОФОРМ, ЭТАНОЛ)

ДЛЯ УДАЛЕНИЯ НЕЛИПИДНЫХ КОМПОНЕНТОВ ПРОМЫВАНИЕ СМЕСИ ЛИПИДОВ
ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
УДАЛЕНИЕ РАСТВОРИТЕЛЯ (ВЫСУШИВАНИЕ В ПОТОКЕ

РАЗДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ НА КЛАССЫ (фракционирование по растворимости, тонкослойная хроматография, жидкостная хроматография)

Разделение

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

ВЫДЕЛЕНИЕ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ

МЕМБРАННЫЕ БЕЛКИ СВЯЗАНЫ С ЛИПИДАМИ, ПОЭТОМУ ДЛЯ ИХ ВЫДЕЛЕНИЯ

ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БЕЛКОВ, ИМЕЮЩИХСЯ В МЕМБРАНАХ, ИСПОЛЬЗУЮТ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ В ПРИСУТСТВИИ ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТА НАТРИЯ

ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММА БЕЛКОВ ИЗ ТЕНЕЙ ЭРИТРОЦИТОВ

СПЕКТРИН
БЕЛОК ПОЛОСЫ 3
БЕЛКИ ПОЛОС 4.1 И 4.2
АКТИН

УДАЛЕНИЕ ДЕТЕРГЕНТА путем промывания
СОЗДАНИЕ ЛИПОСОМ
ВСТРАИВАНИЕ В НИХ БЕЛКОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ
АКТИВНОСТИ БЕЛКОВ

РЕКОНСТРКУЦИЯ

ЛИПОСОМЫ – ЛИПИДНЫЕ ВЕЗИКУЛЫ (ПУЗЫРЬКИ), ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ИЗ ФОСФОЛИПИДОВ В ВОДНОМ РАСТВОРЕ

ВКЛЮЧЕНИЕ БЕЛКОВ В ЗАРАНЕЕ СФОРМИРОВАННЫЕ ЛИПОСОМЫ

БЕЛКИ