Содержание
- 2. Природные Е, применяющиеся в биотехнологии, часто теряют активность и стабильность во время хранения или использования, тк
- 3. Рациональная инженерия Метод сайт-специфического мутагенеза - замена в исходном белке лишь одного аминокислотного остатка в строго
- 4. Рациональная инженерия в качестве исходного материала используют Е с установленной первичной и третичной стр-ми ↓ выбирают
- 5. Рациональная инженерия В процессе синтеза вместо в состав олигонуклеотида вводят другой триплет, который кодирует новый аминокислотный
- 6. Рациональная инженерия Что необходимо учитывать при создании таких белков Стабилизация гидрофобного ядра. 2) Уменьшение подвижности полипептидной
- 7. Рациональная инженерия Стабилизация гидрофобного ядра Глобулярные белки сохраняют свою структуру благодаря взаимодействию между гидрофобными остатками. Внутри
- 8. Рациональная инженерия Стабилизация гидрофобного ядра На первом этапе можно воспользоваться CAST web-сервером, который позволит идентифицировать белковые
- 9. Рациональная инженерия Уменьшение подвижности полипептидной цепи В развернутом состоянии полипептид имеет больше конформационных степеней свободы, а
- 10. Рациональная инженерия Уменьшение подвижности полипептидной цепи Один из алгоритмов сравнивают трехмерные структуры термофильных и мезофильных аналогов
- 11. Рациональная инженерия Уменьшение подвижности полипептидной цепи Примеры замен: Остатки глицина (определяющие разнообразие нативных конформаций вторичных структур),
- 12. Рациональная инженерия Уменьшение подвижности полипептидной цепи Примеры замен: Cоздание дисульфидных мостиков путем замены двух аминокислотных остатков
- 13. Рациональная инженерия Замена аминокислотных остатков в активном центре В состав моющих средств, входят ферментные добавки, например
- 14. Рациональная инженерия Замена аминокислотных остатков в активном центре Субтилизин расщепляет пептидные связи, в образовании которых принимают
- 15. Рациональная инженерия Замена аминокислотных остатков в активном центре В результате замены остатка глутаминовой кислоты (Glu-156) в
- 16. Направленная эволюция ферментов Знания, необходимые для рациональной инженерии белков, доступны лишь для незначительной части известных ферментов.
- 17. Направленная эволюция ферментов создают библиотеку мутированных генов Е ↓ затем гены экспрессируются в подходящем микробном хозяине
- 18. Направленная эволюция ферментов Библиотеку мутированных генов создают с помощью случайного мутагенеза путем рекомбинации фрагментов гена in
- 19. Направленная эволюция ферментов Рекомбинация фрагментов гена in vitro (перемешивание ДНК или сексуальная ПЦР (DNA-shuffling or sexual
- 20. Направленная эволюция ферментов Рекомбинация фрагментов гена in vitro Отличие от случайного мутагенеза Дает возможность одновременно улучшать
- 21. Направленная эволюция ферментов Рекомбинация фрагментов гена in vitro Отличие от случайного мутагенеза Данный методический прием позволяет
- 22. Направленная эволюция ферментов Необходимых условий успешной направленной эволюции фермента является доступность быстрого и чувствительного специфического теста,
- 23. Направленная эволюция ферментов Примеры успешного применения Повышение термостабильности С помощью случайного мутагенеза было установлено, что одиночные
- 24. Направленная эволюция ферментов Примеры успешного применения 2)повышение стабильности и активности в органических растворителях В результате направленной
- 25. ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНДУСТРИАЛЬНЫХ БИОКАТАЛИЗАТОРОВ Полусинтетические ферменты могут быть получены из других
- 26. Ковалентная модификация функциональных групп в активном центре путем присоединения аналогов коэнзима В данном случае эксплуатируется исходный
- 27. Удаление кофактора и использование образовавшейся полости в качестве активного центра. Активный центр полусинтетического фермента создается de
- 28. Основные требования для создания полусинтетических ферментов с помощью первых двух подходов: 1. Белок должен быть доступен
- 29. Конформационная модификация В изменении нативной конформации белка под воздействием различных физико-химических факторов и последующей фиксации индуцированных
- 30. Конформационная модификация Данный метод включает в себя несколько последовательных стадий: Выбор исходного белка. 2. Изменение нативной
- 31. АБЗИМЫ Черты структурно-функционального сходства антител и ферментов Сходства: 1) белки 2) обладают характерной пространственной структурой 3)
- 32. АБЗИМЫ Черты структурно-функционального сходства антител и ферментов Отличия: 1) активный центр антитела структурно соответствует лиганду (антигену),
- 33. АБЗИМЫ Типы антигенсвязывающих центров антител, напоминающие по структуре лигандсвязывающие центры ферментов: а) полости, характерные для центров,
- 34. Подходы к усовершенствованию каталитических св-в абзимов Введение в активный центр абзимов функциональных групп, присутствующих в активных
- 35. Подходы к усовершенствованию каталитических св-в абзимов “Доработка” свойств абзимов: 1) направленная модификация антигенсвязывающего участка абзимов на
- 36. Пример абзимов Феррохелатаза обеспечивает включение иона железа в состав протопорфирина IX и является конечным ферментом в
- 37. Применение АБЗИМОВ Перспективность использования абзимов прежде всего связана с тем, что они могут быть выработаны для
- 38. Применение АБЗИМОВ 1. В органическом синтезе: • увеличение специфичности катализа; • разделение энантиомеров; • катализ трудно
- 39. Использование ресурсов Internet в инженерной энзимологии См страницы 117-121
- 41. Скачать презентацию