Первичная структура белка

ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ БЕЛКА

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА (АМИНОКИСЛОТНЫЙ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ

МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ

3. ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ
4. УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ

Принцип
аминокислотного
анализа
Гидролиз в 5,7н HCl
при 1100C в вакууме
в течение

ФЕНИЛИЗОТИОЦИАНАТ
(ФИТЦ, PITC)

НИНГИДРИН (ТРИКЕТОГИДРИНДЕНГИДРАТ)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-КОНЦЕВЫХ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ

1. МЕТОД Ф.СЕНГЕРА (1945 г.)

2. ДАНСИЛЬНЫЙ МЕТОД (В.Р.ГРЕЙ, Б.С.ХАРТЛИ, 1963 г.)

3. МЕТОД ЭДМАНА (1956 г.)

ФЕНИЛИЗОТИОЦИАНАТ
(ФИТЦ, PITC,
РЕАГЕНТ ЭДМАНА)

4. ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ГИДРОЛИЗ АМИНОПЕПТИДАЗАМИ

ЛЕЙЦИНАМИНОПЕПТИДАЗА (С НАИБОЛЬШЕЙ СКОРОСТЬЮ ГИДРОЛИЗУЕТ СВЯЗИ Leu, Ile,

ОПРЕДЕЛЕНИЕ С-КОНЦЕВЫХ
АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ

МЕТОД ГИДРАЗИНОЛИЗА (Сиро АКАБОРИ, 1952 г.)
Безводный NH2-NH2, 1200C,

2. ОКСАЗОЛОНОВЫЙ МЕТОД
ПО МАТСУО ИЛИ МЕТОД ТРИТИЕВОЙ МЕТКИ
(Hisayuki MATSUO,

3. С-КОНЦЕВОЕ
АВТОМАТИЧЕСКОЕ
СЕКВЕНИРОВАНИЕ.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
С-КОНЦЕВЫХ ОСТАТКОВ В ВИДЕ ТИОГИДАНТОИНОВ

4. ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ГИДРОЛИЗ КАРБОКСИПЕПТИДАЗАМИ

ФРАГМЕНТАЦИЯ ПОЛИПЕПТИДНОЙ ЦЕПИ

ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАСЩЕПЛЕНИЯ

1. Расщепление по остаткам Met (Эрхард ГРОСС,

2. РАСЩЕПЛЕНИЕ ПО ОСТАТКУ Trp ПО МЕТОДУ А. ФОНТАНА
(1970 г.)

2-(2-нитрофенилсульфенил)-3-метил-3-броминдол

(скатол = 3-метилиндол)

3. РАСЩЕПЛЕНИЕ СВЯЗИ Asn-Gly

2-иминотиозолидинкарбоновая кислота

5. РАСЩЕПЛЕНИЕ ПО ОСТАТКАМ Cys
(А. ПАТЧОРНИК, 1974 г.)

2-нитро-5-тиоцианатбензойная кислота

ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МЕТОДЫ ФРАГМЕНТАЦИИ ПОЛИПЕПТИДНОЙ ЦЕПИ

ВЫСОКАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ
1. Трипсин pH 7,0-9,0
Lys—X Arg—X

ХИМОТРИПСИН

ТЕРМОЛИЗИН

pH 7,8 – 9,0

С МЕНЬШЕЙ СКОРОСТЬЮ

pH 7,0 – 9,0

С МЕНЬШЕЙ СКОРОСТЬЮ

ЛИЗИН-СПЕЦИФИЧЕСКАЯ
ПРОТЕАЗА ИЗ Armillaria mellea

pH 8,0

ЭНДОПРОТЕИНАЗА Lys-C ИЗ
Lysobacter ensymogenes

КЛОСТРИПАИН
ИЗ Clostridium histolyticum

pH