Морфологические, биохимические и поведенческие изменения у крыс

Содержание

Слайд 2

Актуальность исследования Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является одной из основных причин смертности,

Актуальность исследования

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является одной из основных причин смертности, инвалидизации

и неврологического дефицита у людей молодого возраста.
К отдалённым последствиям ЧМТ относят депрессию, когнитивные нарушения и посттравматическую эпилепсию (ПТЭ).
На сегодняшний момент не существует методик эффективной профилактики поздних осложнений ЧМТ.
Крысы линии SHR (Spontaneously Hypertensive Rats) с развитием спонтанной артериальной гипертензии обладают спектром поведенческих нарушений (гиперактивность, нарушение внимания, импульсивность и когнитивные нарушения и др.), а также повышенным базальным уровнем кортикостерона, что может частично обуславливать данные изменения.
Эффекты ЧМТ у крыс линии SHR на данный момент практически не изучены.
Слайд 3

Гипотеза исследования Кортикостерон-зависимые механизмы поздних посттравматических нарушений будут ярче выражены у

Гипотеза исследования

Кортикостерон-зависимые механизмы поздних посттравматических нарушений будут ярче выражены у крыс

линии SHR.
Механизмы коморбидности когнитивных нарушений, эпилепсии и артериальной гипертензии могут быть реализованы и при развитии посттравматической патологии.
Слайд 4

Цели и задачи исследования Целью является изучение динамики уровня кортикостерона и

Цели и задачи исследования

Целью является изучение динамики уровня кортикостерона и артериального

давления в течение 3 месяцев после ЧМТ, а также морфологические и поведенческие изменения в отдалённом периоде ЧМТ у крыс со спонтанной гипертензией.
Задачи:
Моделирование ЧМТ при помощи латерального гидродинамического удара у крыс и проведение ложной операции (n=25).
Измерить артериальное давление и пульс у крыс до ЧМТ, в остром и отдалённом периоде ЧМТ.
Измерить уровень кортикостерона (КС) до ЧМТ, в остром и отдаленном периоде ЧМТ.
Измерить уровень кортикостерона до и после стресс-теста (тест вынужденного плавания) через 3 мес. после ЧМТ.
Провести серию поведенческих тестов через 3 мес. после ЧМТ:
Тест открытое поле;
Крестообразный приподнятый лабиринт;
Тест распознавания нового и перемещённого объекта;
Тест Барнес.
Осуществить видео-ЭЭГ-регистрацию через 3 мес. после ЧМТ (дополнительная задача).
Гистологическая верификация повреждений в коре и гиппокампе:
Окрашивание по методу Ниссля;
Иммуногистохимическое окрашивание (маркер микроглии Iba, маркер астроглии GFAP).
Слайд 5

Схема эксперимента

Схема эксперимента

Слайд 6

Апробация результатов исследования Кострюков П.А., Комольцев И.Г., Гехаева З.К., Салып О.Ю.,

Апробация результатов исследования

Кострюков П.А., Комольцев И.Г., Гехаева З.К., Салып О.Ю., Башкатова

Д.А., Волкова А.А., Новикова М.Р., Гуляева Н.В. ДИНАМИКА СИСТОЛИЧЕСКОГО И ДИАСТОЛИЧЕСКОГО ДАВЛЕНИЯ И ЧАСТОТЫ ПУЛЬСА У КРЫС ЛИНИИ SHR В ТЕЧЕНИЕ ТРËХ МЕСЯЦЕВ ПОСЛЕ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ. Сборник трудов XXV научной школы-конференции молодых ученых по физиологии и высшей нервной деятельности и нейрофизиологии.
Слайд 7

Ожидаемые результаты исследования Будут получены данные об изменении уровня КС в

Ожидаемые результаты исследования

Будут получены данные об изменении уровня КС в остром

и отдалённом периоде ЧМТ у крыс линии SHR.
Будут проанализированы поздние поведенческие нарушения (тревожность и когнитивные нарушения) через 3 мес после ЧМТ.
Будут проанализированы гистологические последствия ЧМТ у крыс, в частности, будет охарактеризовано дистантное повреждение гиппокампа и сопоставлено с клинической классификацией склероза гиппокампа у человека.
Будут проанализированы электрофизиологические изменения в позднем периоде ЧМТ - эпилептиформная активность и эпилептические приступы (дополнительная задача).
Будет оценена роль динамики уровня кортикостерона и артериальной гипертензии в развитии отсроченных последствий черепно-мозговой травмы - поведенческих и гистологических изменений.
Слайд 8

Материалы и методы Исследование будет проведено на 25 крысах самцах со

Материалы и методы

Исследование будет проведено на 25 крысах самцах со спонтанной

гипертензией (SHR). Возраст крыс 6 месяцев. Масса 350 г. Животные будут разделены на 2 группы: ЧМТ (n=15) и ЛО (n=10).
Ход работы:
Хендлирование крыс в течение недели до всех манипуляций.
Измерение давления и пульса до и после ЧМТ (утреннее и вечернее измерение за 3 дня до нанесения ЧМТ и измерение давления и пульса на 3-й и 7-й дни после ЧМТ. А также измерение за 1-й, 2-й и 3-й месяцы после ЧМТ).
Взятие крови на уровень кортикостерона до и после ЧМТ (за 7 дней до ЧМТ; на 3-й и 7-й день после травмы и далее через 1 месяц и 3-ий месяц после травмы).
Нанесение гидродинамического удара в сенсомоторную область.
Имплантация электродов и регистрация ЭКоГ и ЛПП через 3 месяца после ЧМТ.
Проведение поведенческих тестов (Тест открытое поле, крестообразный приподнятый лабиринт, тест распознавания нового и перемещённого объекта, тест Барнес).
Кардиоперфузия и приготовление гистологических препаратов.
Гистология и иммуногистохимия (окрашивание по методу Ниссля, иммуногистохимическое окрашивание - маркер микроглии Iba, маркер астроглии GFAP).
Морфометрия в неокортексе и гиппокампе.

Дополнительные материалы