Культивирование

Содержание

Слайд 2

Клетки с конечным репликативным потенциалом могут быть иммортализованы. В некоторых типах

Клетки с конечным репликативным потенциалом могут быть иммортализованы.
В некоторых типах

клеток инактивация теломеразы, скомбинированная с поддержанием теломер, может вести к иммортализации клеток с потерей контроля роста, типичными для онкогентрансформированных клеток (in orange), тогда как экзогенная экспрессия только теломеразы (индуктором теломеразы) может увеличивать репликативный потенциал без онкогенной трансформации (in green).
Возможно, что еще неизвестные факторы могут вовлекать клетки в онкогенную трансформацию теломеразой - иммортализованые клетки.
Слайд 3

Одна из самых ранних культур клеток человека Получена от Генриетты Лакс,

Одна из самых ранних культур клеток человека

Получена от Генриетты Лакс, умершей

от рака шейки матки. Культура клеток HeLa окрашена по Хойсту. Измененные ядра окрашены в синий цвет
Слайд 4

Культуры клеток развитых и сложных эукариотов Первичные культуры клеток (I пассаж)

Культуры клеток развитых и сложных эукариотов
Первичные культуры клеток (I пассаж)
Вторичные

культуры:
Соматических клеток (лимит Хейфлика, ограниченное число пассажей)
Стволовых, половых и иммортальных клеток (длительное пассажирование , » 100 пассажей)
Слайд 5

КОНСЕРВИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР Добиваются резкого сокращения или полного прекращения

КОНСЕРВИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР

Добиваются резкого сокращения или полного прекращения клеточного

метаболизма. Охлаждение, замораживание или обезвоживание
Прокариоты и простые эукариоты хранят:
- замороженными при минус 1-5 до минус 20°С. Недопустимо повторное оттаивание и замораживание;
- лиофилизированными в ампулах. Срок хранения несколько лет
Культуры клеток млекопитающих, в т.ч. и человека хранят:
при минус 180°С в среде на основе жидкого инертного газа (азота и др.) и криопротекторов
Слайд 6

Процесс консервирования клеточных структур и клеточных линий Используют программированное замораживание с

Процесс консервирования клеточных структур и клеточных линий

Используют программированное замораживание с помощью

специальных криоустановок:
Охлаждение от -10 до -30°С со скоростью 1-3° в минуту
Охлаждение до -120°С со скоростью 10-30° в минуту
Объект помещают в жидкий азот (180-196°С)

К питательной среде перед замораживанием добавляют криопротекторы

Слайд 7

КРИОПРОТЕКТОРЫ ЗАЩИТНЫЕ СРЕДЫ. Сдерживают денатурацию белков, НК и других веществ клетки

КРИОПРОТЕКТОРЫ

ЗАЩИТНЫЕ СРЕДЫ.
Сдерживают денатурацию белков, НК и других веществ клетки на

стадии замораживания и при последующем хранении.
Компоненты сред:
ВМС (ПВП м.м. от 2600 до 6400, декстран, желатин, пептон)
НМ и буферные компоненты: глютамат, трисбуфер,
глицерин и ДМСО - 5-10%
Денатурирующее действие замораживания сдерживается изменением свойств самих защитных агентов. Эти вещества одновременно консервируют биопрепараты, предотвращая их микробную порчу, возможную при обычных условиях хранения
Слайд 8

Паспорт культуры Название культуры Штамм описание питательных сред Описание микро- и

Паспорт культуры

Название культуры
Штамм
описание питательных сред
Описание микро- и макроморфологических характеристик
Описание физиологических характеристик
Описание

условий для расконсервации
Описание условий выращивания
Срок хранения.
Слайд 9

Подготовка посевного материала для промышленной ферментации . ОБЩАЯ СХЕМА Объем посевного

Подготовка посевного материала для промышленной ферментации . ОБЩАЯ СХЕМА

Объем посевного

материала перед загрузкой в промышленный реактор обычно составляет 5-10% питательной среды.

Плотные среды

На всех этапах подготовки контролируют качество посевного материала по морфологическим признакам и продуктивности, отслеживают отсутствие в нем посторонней микробиоты.

Слайд 10

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ (ФЕРМЕНТАЦИЯ)

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ (ФЕРМЕНТАЦИЯ)

Слайд 11

Основные стадии биотехнологического процесса 1. приготовление и стерилизация питательных сред 2.

Основные стадии биотехнологического процесса

1. приготовление и стерилизация питательных сред
2. приготовление посевного

материала
3. культивирование
4. обработка культуральной жидкости
5. выделение и очистка биопрепарата
6. получение готовой продукции
Слайд 12

Промышленное культивирование продуцентов не сводится к пропорциональному увеличению масштаба лабораторного эксперимента:

Промышленное культивирование продуцентов не сводится к пропорциональному увеличению масштаба лабораторного эксперимента:


Оптимальные условия изменяются
при каждом десятикратном увеличении
объема биореактора
Слайд 13

Классификация процессов ферментации

Классификация процессов ферментации

Слайд 14

ПОВЕРХНОСТНАЯ ФЕРМЕНТАЦИЯ

ПОВЕРХНОСТНАЯ ФЕРМЕНТАЦИЯ

Слайд 15

Прикрепление эукариотических клеток к субстрату

Прикрепление эукариотических клеток к субстрату

Слайд 16

Слайд 17

Монослой эукариотических клеток Возобновление клеточных делений после нанесния «раны» клеточному монослою

Монослой эукариотических клеток

Возобновление клеточных делений после нанесния «раны» клеточному монослою

Слайд 18

Раковые (иммортальные) клетки продолжают расти и после того, как заполнят всю поверхность субстрата, образуя мультислой

Раковые (иммортальные) клетки продолжают расти и после того, как заполнят всю

поверхность субстрата, образуя мультислой
Слайд 19

Роллерные барабаны для культивирования клеточных тканей - инкубаторы клеточных культур

Роллерные барабаны для культивирования клеточных тканей - инкубаторы клеточных культур

Слайд 20


Слайд 21

Кинетика периодического культивирования без добавления питательного субстрата В ферментерах периодического действия:

Кинетика периодического культивирования без добавления питательного субстрата

В ферментерах периодического действия:

Состав культуральной среды, концентрация микроорганизмов (биомассы) изменчиво и зависит от фазы роста;
Количество продукта изменчиво и зависит от фазы роста;
используется только для культивирования микроорганизмов