Методы измерения PUR

Содержание

Слайд 2

Принципы детекции План презентации 01 03 03-1 03-2 02 Методы измерения

Принципы детекции

План презентации

01

03

03-1

03-2

02

Методы измерения
Percentage Detection Method
Rate Method

Алгоритмы измерения

VLin Integral Method

03-3

Слайд 3

01 Принципы детекции

01

Принципы детекции

Слайд 4

Мультиволновая светодиодная технология Оптическое волокно Фотодиод Источники света: 340 нм 405

Мультиволновая светодиодная технология

Оптическое волокно

Фотодиод

Источники света:
340 нм
405 нм
575 нм
660 нм
800 нм

Свет от

галогеновой лампы рассеивается на длинах волн: 405, 575, 660, 800 нм с помощью 4 видов фильтров.
Оптическое волокно переносит спектроскопический свет к детектору, через кювету с реакционной смесью.
Каждые 0,1 секунды фотодиод улавливает проходящий свет и преобразует его в электронные сигналы.
Микропроцессор преобразует эти сигналы в dOD/мин (дельта оптической плотности/мин) и время свертывания крови (в зависимости от метода измерения).

Галогеновая лампа

Слайд 5

Принцип измерения (подробное описание) Анализатор Sysmex CN-3000/6000 измеряет изменение проходящего света

Принцип измерения (подробное описание)

Анализатор Sysmex CN-3000/6000 измеряет изменение проходящего света через

реакционную кювету в процессе реакции. Свет от светодиодиода рассеивается на: 340, 405, 575, 660 и 800 нм с помощью пяти различных фильтров.
Спектроскопический свет передается от светодиода к кювете по оптическому волокну, где он проходит через реакционную смесь и регистрируется фотодиодом каждые 0,1 секунды преобразуясь в электрический сигнал и далее, микропроцессором, в dOD/мин (изменение оптической плотности) и время свертывания. Если кинетика анализа не будет соответствовать установленным критериям, анализатор выдаст флаги ошибок.
Проверка HIL (гемолиз, иктеричность и липемия) автоматически выполняется для каждого образца, если включен HIL детектор (исключение: микрорежим и контроля качества). Измерение поглощения при 405 нм (желтуха), 575 нм (гемолиз) и 660 нм (липемия), используется для определения уровня соответствующего интерферирующего вещества до начала измерения образца. Уровень интерференции (от 0 до 5) можно увидеть во вкладке с информацией об измерении. Если анализатор обнаружит интерферирующее вещество, анализатор продолжит работу с образцом, и при наличии соответствующих настроек пометит их (*) и «H, I или L» в рабочем листе.
Слайд 6

02 Методы измерения

02

Методы измерения

Слайд 7

Основан на определении времени образования сгустка. Измеряется изменение светопоглощения. Мутность изменяется,

Основан на определении времени образования сгустка.
Измеряется изменение светопоглощения.
Мутность изменяется, когда фибриноген

превращается в фибрин под действием тромбина.
Определяется активность отдельных звеньев системы свертывания и фибринолиза.

Клоттинговый метод

Слайд 8

Целью этих анализов является измерение концентрации определенной молекулы в плазме крови

Целью этих анализов является измерение концентрации определенной молекулы в плазме крови

пациента.
Реагенты содержат:
Активатор: активирует определенный фермент
Субстрат: является мишенью активированного фермента. После активации он изменяет цвет.
Фермент образует комплекс с искомым веществом, после чего происходит изменение интенсивности окраски, которая прямо пропорциональна концентрации искомого аналита.
Измеряется поглощение света.

28.03.2019


Хромогенный метод

Слайд 9

Плазма содержит антигены в неизвестной концентрации. Реагент содержит латекс, покрытый антителом.

Плазма содержит антигены в неизвестной концентрации.
Реагент содержит латекс, покрытый антителом.
Комплексы [АГ-АТ]

образуются в кювете и визуализируются латексом. Плазма становится более мутной с увеличением образования комплексов [АГ-АТ].
Измеряется поглощение света.

28.03.2019


Иммунотурбидиметрический метод

Слайд 10

03 Алгоритмы измерения

03

Алгоритмы измерения

Слайд 11

Алгоритмы измерения

Алгоритмы измерения

Слайд 12

Percentage detection method 28.03.2019 • Стабилизация реакционной смеси. Старт реакции. Определение

Percentage detection method

28.03.2019


Стабилизация реакционной смеси.
Старт реакции. Определение базовой линии- baseline

height, bH (0%).
Конец реакции. Определение времени полного свертывания сгустка, плато (100%).
Определение delta height, dH (0-100%).
Регистрация результата анализа в секундах (обычно, происходит на 50% реакции, т.к. величина A / D в единицу времени показывает наибольшее изменение и высокую скорость реакции полимеризации мономера фибрина)
Слайд 13

Percentage detection method Инициирование образования сгустка Регистрируемое пропускание света находится на

Percentage detection method

Инициирование образования сгустка
Регистрируемое пропускание света находится на самом высоком

уровне, поскольку бедная тромбоцитами плазма и диспергированные частицы фибрина пропускают свет. Стартовые реагенты добавляются для того, чтобы начать реакцию.
Образование сгустка
Регистрируемое светопропускание находится на самом низком уровне, так как фибриноген блокирует световой поток.
Слайд 14

Percentage detection method Анализ Отслеживание различий в интенсивности света останавливается, как

Percentage detection method


Анализ
Отслеживание различий в интенсивности света останавливается, как только

будет идентифицирована конечная точка реакции или после отсутствия изменений в интенсивности света.
В конце измерения фиксируется начальная точка реакции (= базовая линия, bH, 0%) и конечная точка реакции (= 100%).
Определение точки считывания для свертывания и времени свертывания крови по оси абсцисс.
Выдача результата в [с], или в других единицах, например, в %.
Слайд 15

Percentage detection method Данный метод используется для клоттинговых реакций. CN-3000/6000 анализирует

Percentage detection method

Данный метод используется для клоттинговых реакций.
CN-3000/6000 анализирует интенсивность света

каждые 8 секунд после добавления стартовых реагентов и запуска реакции
Прибор может заранее определять конечную точку и быстро выдать результат, по сравнению с CS, где время заложенное на реакцию строго фиксировано.

Время (с)

Светопропускание (%)

Слайд 16

Rate method Инициирование хромогенной реакции По истечении времени инкубации образца плазмы

Rate method

Инициирование хромогенной реакции
По истечении времени инкубации образца плазмы с низким

содержанием тромбоцитов и промежуточных реагентов, добавляют субстратный реагент. Субстрат расщепляется его ферментом (параметр измерения или продукт измеряемого параметра).
Хромогенная реакция
Когда субстрат расщепляется, раствор образца-реагента меняет цвет на желтый пропорционально объему расщепленного субстрата. Свет, попадающий в кювету, поглощается или рассеивается. Меньшее количество света достигает детектора и соответствует количеству расщепленного субстрата.
Слайд 17

Rate method Анализ Каждая комбинация тест-реагент имеет свой определенный диапазон измерения,

Rate method

Анализ
Каждая комбинация тест-реагент имеет свой определенный диапазон измерения, в котором

реакция является линейной. Эта область ограничена начальной и конечной точками. Анализатор вычисляет разницу в интенсивности света (оптической плотности) в определенном временном отрезке.
Разница (в dOD) переносится на калибровочную кривую и конвертируется в выдаваемые единицы измерения, такие как %.
Данный метод используется для оценки хромогенных и иммунологических тестов.

стартовая точка реакции

конечная точка реакции

Линейный участок

Время (секунды)

Светопропускание (%)

Слайд 18

Vlin integral method Добавление латексных частиц, покрытых антителами Латексные частицы, покрытые

Vlin integral method

Добавление латексных частиц, покрытых антителами
Латексные частицы, покрытые антителами добавляют

после инкубации образца плазмы бедной тромбоцитами с промежуточными реагентами. Множество мелких частиц практически полностью блокирует проходящий свет.
Формирование комплексов AГ-AТ
Антитела (AТ) из образца взаимодействуют с латексными частицами, покрытыми антигенами (AГ) и образуют комплексы AГ-AТ (AГ в избытке). Свет проходит между комплексами AГ-AТ и попадает на датчик.
Слайд 19

Vlin integral method Анализ Регистрация изменений в интенсивности света на протяжении

Vlin integral method

Анализ
Регистрация изменений в интенсивности света на протяжении всего заданного

времени измерения (=диапазон измерения).
Линейный диапазон кривой (зависит от образца и реагента) определяется с помощью касательной линии.
Определение начальной и конечной точки линейного диапазона.
Вычисление разницы в оптической плотности (dOD) измерения.

Измеряемый диапазон

Слайд 20

Vlin integral method Метод используется для оценки иммунологических анализов, таких как

Vlin integral method

Метод используется для оценки иммунологических анализов, таких как D-димер

и антиген фактора фон Виллебранда (vWFAg), а также агрегационных тестов.
Рассчитывается изменение светопоглощения.
Интеграл VLin — это динамический алгоритм, основанный на силе реакции.
После начала реакции алгоритм отслеживает и определяет, когда начинается увеличение поглощения.
Затем отслеживается наклон возрастающей кривой сигнала, выводится полиномиальная кривая.
Определяется линейный диапазон. Интегральная площадь между этим диапазоном используется для расчета поглощения/мин.