ИФА и ИХА тест-системы для диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний в ветеринарии

Содержание

Слайд 2

В современной ветеринарной практике большую роль играет лабораторная диагностика, как один

В современной ветеринарной практике большую роль играет лабораторная диагностика, как один

из основных инструментов постановки диагноза при инфекционных и паразитарных заболеваниях
Слайд 3

Быстрые тесты на заболевания Необходимость в любых условиях оперативно проводить исследования

Быстрые тесты на заболевания
Необходимость в любых условиях оперативно проводить исследования дала

толчок появлению быстрых тестов,
Современные быстрые тесты позволяют
Поставить анализ без дорогостоящего оборудования
Получить результат анализа сразу на приеме либо в течение часа
Не требуют обязательной отправки в лабораторию
Применяются врачами как на приеме так и на выездах и в полевых условиях
Слайд 4

Принципы работы быстрых тестов Иммунологический метод анализа основан на реакции между

Принципы работы быстрых тестов

Иммунологический метод анализа основан на реакции между антигеном и

соответствующим ему антителом (реакция антиген – антитело)
Антиген - это вещество, которое чужеродное для организма животного и которое может запустить иммунную систему (защитную реакцию).
Антитела - это белки, которые выделяются клетками организма животного при внедрении в него антигена
Слайд 5

Типы быстрых тестов В настоящее время применяемые в ветеринарии быстрые тесты

Типы быстрых тестов

В настоящее время применяемые в ветеринарии быстрые тесты на заболевания

подразделяются на:
Иммунохроматографические (ИХА) : много производителей
Иммуноферментные (ИФА): Idexx SNAP, Biogal ImmunoComb
Слайд 6

Экспресс-тесты – ИХА: внешний вид

Экспресс-тесты – ИХА: внешний вид

Слайд 7

Что такое экспресс-тест ИХА? В основе теста лежит метод иммунохроматографического анализа

Что такое экспресс-тест ИХА?

В основе теста лежит метод иммунохроматографического анализа (ИХА).

В результате теста происходит классическая реакция "антиген-антитело" с образованием иммунных комплексов, которые можно визуально обнаружить на тест-полоске.
Принцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно (прочно и родственно) связываются с анализируемым веществом.
Слайд 8

Основными преимуществами использования иммунохроматографических тестов являются: Быстрота: - Одношаговая процедура с

Основными преимуществами использования иммунохроматографических тестов являются:

Быстрота: - Одношаговая процедура с

получением результата обычно в течение 10-15-20 минут.
Удобство: - Простой в использовании и легкий в прочтении результатов
Слайд 9

Однако иммунохроматографические тест-полоски не лишены недостатков. Касается это, в первую очередь,

Однако иммунохроматографические тест-полоски не лишены недостатков.

Касается это, в первую очередь,

надежности и чувствительности тестов.
Надежность и чувствительность зависит, во-первых, от качества используемых в тесте реагентов и, во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале.
Качество используемых реагентов зависит от способов их получения, очистки и фиксации на полоске.
Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала.
Количество биоматериала особенно важно при использовании цельной крови.
Cущественную роль играет гематокрит, т.е. соотношение плазмы и форменных элементов. При высоком гематокрите снижается доля элементов антигена из плазмы по сравнению с форменными элементами
Слайд 10

Кроме того: ИХА-тесты обеспечивают только качественный результат (да - нет), измерение

Кроме того:

ИХА-тесты обеспечивают только качественный результат (да - нет), измерение концентрации

невозможно. При некоторых заболеваниях, они могут быть малоинформативными (например FIP).
Экспресс-тесты (антигенные) «работают» только в течение ~ 3-7 дней после заражения (только при первоначальном воздействии антигена на организм животного) ( вирусные заболевания).
Минимальная определяемая ИХА концентрация антигена или антител сильно выше, чем у ИФА, что может давать «ложноотрицательный» результат на ранней стадии, поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии.
Большой процент «ложноположительных» результатов, что мешает при исследовании животных на вирусоносительство.
Слайд 11

Что такое ИФА-анализ (ELISA) ? Основной отличительной чертой иммуноферментного анализа является

Что такое ИФА-анализ (ELISA) ?

Основной отличительной чертой иммуноферментного анализа является

то, что комплекс «антиген-антитело» выявляется с помощью субстрата, который расщепляется ферментом с появлением окрашивания (ферментативное окрашивание).
При ферментативном окрашивании для достижения окраски требуется меньшее количество комплексов антиген-антитело, так как каталитические свойства ферментов позволяют действовать им в качестве усилителей: одна молекула фермента может способствовать образованию более 1•105 молекул продукта каталитической реакции в минуту, что обуславливает высокую чувствительность ИФА.
Слайд 12

Основными преимуществами использования ИФА- тестов являются: Иммуноферментный анализ – более надежный

Основными преимуществами использования ИФА- тестов являются:

Иммуноферментный  анализ – более  надежный

и  чувствительный  метод  для поиска антител  и  антигенов и оценки их концентрации. 
Обеспечивает не только качественный, но и количественный результат.
Определяет относительный уровень титра - диагностирует болезнь, на гораздо более низком уровне титра, чем положительное пороговое значение в ИХА - тестах.
Позволяет подтверждать подозрительные случаи заболевания, за которыми в дальнейшем может быть изменение титра.
ИФА – анализ более точный в определении, он позволяет не только диагностировать заболевание , но и определить его стадию и отследить динамику развития болезни.
Слайд 13

Однако, у классического ИФА - анализа есть свои сложности и недостатки:

Однако, у классического ИФА - анализа есть свои сложности и недостатки:
Длительность

и сложность постановки по сравнению с ИХА – методом и невозможность количественного учета результатов без специального оборудования.
Необходимо большое количество образцов (8-96) для постановки анализа.
Требуется специальная подготовка специалистов
Высокая стоимость оборудования для оснащения лаборатории.
Слайд 14

Преимущество ИХА -тестов с классическим ИФА:

Преимущество ИХА -тестов с классическим ИФА:

Слайд 15

Преимущества классического ИФА Сравнение с ИХА тестами

Преимущества классического ИФА
Сравнение с ИХА тестами

Слайд 16

ImmunoComb®

ImmunoComb®

Слайд 17

Подведем итоги: Любой Ветеринарный врач ставит диагноз на основании анамнеза и

Подведем итоги:

Любой Ветеринарный врач ставит диагноз на основании анамнеза и клинических

признаков, которые могут изменяться от легких до тяжелых. При необходимости, в дополнении к ним, делаются анализы крови. А так же кала, мочи и др. в зависимости от предполагаемого заболевания.
Иммунологические исследования помогут ветеринарному врачу получить информацию об иммунном статусе животного. Они либо подтвердят либо опровергнут предполагаемый диагноз, а так же могут помочь различить (отдифференцировать) одно заболевание от другого заболевания, инфекционного или неинфекционного характера.
Не бывает правильных или неправильных тестов.
Всё зависит от того, какой случай рассматривается у животного (больно оно или же здорово) и то, какой ответ (для каких целей ставился тест) необходимо получить при его постановке.