Клонирование генов, создание геномных и кДНК-библиотек, искусственный синтез генов

Содержание

Слайд 2

ГЕН-МИШЕНЬ: ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА Геномная локализация (А), геномный контекст (Б)

ГЕН-МИШЕНЬ: ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА

Геномная локализация (А), геномный контекст (Б) и

структура (В) гена препроинсулина человека

А)

Б)

В)

Слайд 3

ГЕН-МИШЕНЬ: ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА Процессинг природного проинсулина человека (А) и

ГЕН-МИШЕНЬ: ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА

Процессинг природного проинсулина человека (А) и минимально

необходимая нуклеотидная последовательность для его эктопической экспрессии (Б)

А)

Б)

Слайд 4

ГЕН-МИШЕНЬ: ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА Схема синтеза двуцепочечной кДНК на мРНК-матрице

ГЕН-МИШЕНЬ: ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА

Схема синтеза двуцепочечной кДНК на мРНК-матрице (А),

выделенной из клеток панкреатических островков (Б).
Продукт амплификации кДНК гена препроинсулина человека (В)

1000
750
500
250

1 2

А)

Б)

В)

Слайд 5

СИНТЕЗ кДНК Праймирование при синтезе кДНК

СИНТЕЗ кДНК

Праймирование при синтезе кДНК

Слайд 6

Модификации oligo(dT) праймера СИНТЕЗ кДНК А) Б)

Модификации oligo(dT) праймера

СИНТЕЗ кДНК

А)

Б)

Слайд 7

Синтез полноразмерной кДНК СИНТЕЗ кДНК А) Б) В)

Синтез полноразмерной кДНК

СИНТЕЗ кДНК

А)

Б)

В)

Слайд 8

Синтез длинных фрагментов кДНК с помощью Maxima H Minus Reverse Transcriptase

Синтез длинных фрагментов кДНК с помощью Maxima H Minus Reverse Transcriptase

компании Thermo Scientific

СИНТЕЗ ДЛИННЫХ ФРАГМЕНТОВ кДНК

Слайд 9

Схема экзонной ПЦР (А) и ее использование для синтеза целевого гена

Схема экзонной ПЦР (А)
и ее использование для синтеза целевого гена (Б)

СИНТЕЗ

ГЕНА С ПОМОЩЬЮ ЭКЗОННОЙ ПЦР

А)

Б)

Слайд 10

Точность синтеза фрагментов ДНК с помощью Phusion High-Fidelity DNA Polymerase компании

Точность синтеза фрагментов ДНК с помощью Phusion High-Fidelity DNA Polymerase компании

Thermo Scientific

ТОЧНОСТЬ И ПРОТЯЖЕННОСТЬ СИНТЕЗА ФРАГМЕНТОВ ГЕНОМНОЙ ДНК

Слайд 11

Синтез длинных фрагментов ДНК с помощью DyNAzyme EXT DNA Polymerase ТОЧНОСТЬ

Синтез длинных фрагментов ДНК с помощью DyNAzyme EXT DNA Polymerase

ТОЧНОСТЬ И

ПРОТЯЖЕННОСТЬ СИНТЕЗА ФРАГМЕНТОВ ГЕНОМНОЙ ДНК
Слайд 12

Аминокислотная последовательность одноцепочечного инсулина SCI-57 человека (A) и нуклеотидная последовательность, его

Аминокислотная последовательность одноцепочечного инсулина SCI-57 человека (A) и нуклеотидная последовательность, его

кодирующая (Б)

СОЗДАНИЕ ПОЛНОСТЬЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГЕНОВ

А)

Б)

Слайд 13

Схема синтеза нуклеотидной последовательности гена с помощью перекрывающихся олигонуклеотидов (А) и

Схема синтеза нуклеотидной последовательности гена с помощью перекрывающихся олигонуклеотидов (А) и

результаты использования данной схемы для синтеза гена SCI-57 человека (Б)

СОЗДАНИЕ ПОЛНОСТЬЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГЕНОВ

А)

Б)

Слайд 14

Система индуцибельной экспрессии трансгена, основанная на тетрациклин/доксициклин контролируемом транскрипционном активаторе СИСТЕМЫ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ

Система индуцибельной экспрессии трансгена, основанная на тетрациклин/доксициклин контролируемом транскрипционном активаторе

СИСТЕМЫ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ

ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ
Слайд 15

Система индуцибельной экспрессии трансгена, основанная на рапамицин контролируемом транскрипционном активаторе СИСТЕМЫ

Система индуцибельной экспрессии трансгена, основанная на рапамицин контролируемом транскрипционном активаторе

СИСТЕМЫ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ

ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ

FKBP12: FK506-связывающий белок;
FKB: FKBP-рапамицин связывающий домен белка,
ассоциированного с комплексом FKBP-рапамицин;
VP16: трансактивационный домен белка VP16 герпесвируса;
Gal4: ДНК-связывающий домен трансактиватора GAL4 дрожжей;
UAS: 5’-фланкирующая активирующая последовательность

Слайд 16

Система индуцибельной экспрессии трансгена, основанная на экдизон контролируемом транскрипционном активаторе СИСТЕМЫ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ

Система индуцибельной экспрессии трансгена, основанная на экдизон контролируемом транскрипционном активаторе

СИСТЕМЫ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ

ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ