Физико-химические свойства белков. Электрофоретические и хроматографические методы

Сентябрь 9, 2022

Главная
Химия
Физико-химические свойства белков. Электрофоретические и хроматографические методы

Содержание

2. Хроматография История открытия Хроматография - метод разделения и анализа смесей веществ, а также изучения физико-химических свойств
3. Хроматография История открытия 1872 Асти (Италия) – 1919 Воронеж (Россия) 1893 — бакалавр физических и естественных
4. Хроматография История открытия Работал в Санкт-Петербурге, Варшавском университете, Москве, Нижнем Новгороде, Воронеже 1918 — январь —
5. Первая хроматография проведена в 1900 году. М.Цвет использовал колонку, заполненную карбонатом кальция, для разделения пигментов растительного
6. Хроматография — метод разделения смесей веществ или частиц, основанный на различиях в скоростях их перемещения в
7. Хроматографический процесс – многочисленные циклы сорбции–десорбции
8. Хроматография для анализа аминокислот Бумажная Газовая Ионообменная Смесь из трёх аминокислот покраска: нингидрин и по методу
9. Хроматография для анализа белков Ионообменная Эксклюзионная Афинная
10. Хроматография для анализа белков Ионообменная Эксклюзионная Афинная
11. Vt = общий объём колонки Vo = объём подвижной фазы снаружи от частиц сефадекса Ve =
12. Хроматография для анализа белков Ионообменная Эксклюзионная Афинная
14. Хроматография: детекция и работа с хроматограммой Способы детекции: Спектрофотометрические Визуальная оценка Масс-спектрометрия
15. Разрешение хроматограмы
16. Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей
17. Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей Диализ - очистка коллоидных растворов и субстанций высокомолекулярных веществ
18. Диск-электрофорез ПААГ в присутствии с ДДС-Na.
19. Общие принципы электрофореза Полимеризация геля
21. Скачать презентацию

Слайд 2

Хроматография История открытия
Хроматография - метод разделения и анализа смесей веществ, а также

изучения физико-химических свойств веществ. Основан на распределении веществ между двумя фазами — неподвижной (твердая фаза или жидкость, связанная на инертном носителе) и подвижной (газовая или жидкая фаза, элюент).
Название метода связано с первыми экспериментами по хроматографии, в ходе которых разработчик метода Михаил Цвет разделял ярко окрашенные растительные пигменты.

Слайд 3

Хроматография История открытия
1872 Асти (Италия) – 1919 Воронеж (Россия)
1893 — бакалавр физических и

естественных наук (Женевский университет)
1896 — возвращение в Россию
1901 — защита магистерской диссертации в Казанском университете
1910 — защита диссертации в Варшавском университете «Хромофиллы в растительном и животном мире»

Михаил Семёнович Цвет

Слайд 4

Хроматография История открытия
Работал в Санкт-Петербурге, Варшавском университете, Москве, Нижнем Новгороде, Воронеже
1918 — январь —

выдвижение на Нобелевскую премию (отказ)
1919 — умер от голода (по другим сведениям, от болезни), похоронен в Воронеже на территории монастыря.

Слайд 5

Первая хроматография проведена в 1900 году.
М.Цвет использовал колонку, заполненную карбонатом

кальция, для разделения пигментов растительного происхождения. Первое сообщение о разработке метода хроматографии было сделано Цветом в 1901 году на XI Съезде естествоиспытателей и врачей в С.-Петербурге.
В 1910—1930 годы метод был забыт и не развивался.
В 1941 году А. Дж. П. Мартин и Р. Л. М. Синг разработали новую разновидность хроматографии, в основу которой легло различие в коэффициентах распределения разделяемых веществ между двумя несмешивающимися жидкостями. Метод получил название «распределительная хроматография». Нобелевская премия 1952 года.

Хроматография История открытия

Слайд 6

Хроматография — метод разделения смесей веществ или частиц, основанный на различиях в

скоростях их перемещения в системе несмешивающихся и движущихся относительно друг друга фаз.
Подвижная фаза (элюент): газ, жидкость или (реже) сверхкритический флюид.
Неподвижная фаза — твердая фаза или жидкость, связанная на инертном носителе, в адсорбционной хроматографии — сорбент.
Колонка — содержит хроматографический сорбент, в ней происходит разделения смеси на индивидуальные компоненты.
Хроматограмма – регистрируемый на детекторе результат зависимости концентрации компонентов на выходе из колонки от времени.

Хроматография Общие понятия

Слайд 7

Хроматографический процесс – многочисленные циклы сорбции–десорбции

Слайд 8

Хроматография для анализа аминокислот
Бумажная
Газовая
Ионообменная
Смесь из трёх аминокислот
покраска: нингидрин и по

методу Паули

Слайд 9

Хроматография для анализа белков
Ионообменная
Эксклюзионная
Афинная

Слайд 10

Хроматография для анализа белков
Ионообменная
Эксклюзионная
Афинная

Слайд 11

Vt = общий объём колонки
Vo = объём подвижной фазы снаружи от

частиц сефадекса
Ve = объем, необходимый для элюции компонента
Коэффициент разделения, Kd = (Ve – Vo)/Vt
Kav = (Ve – Vo)/(Vt-Vo)
Kav зависит от гидродинамического радиуса молекулы, который пропорционален молекулярному весу и форме молекулы.

Состав пробы на 1 мл 0.9% NaCl:
Голубой декстран – 1 мг
Цитохром С – 1,5 мг
К2CrO4 – 2 мг
Сахароза – 200 мг (для уплотнения анализируемой пробы)
Параметры колонки и сбора фракций:
h = 32 см (высота столбика геля)
r = 0.5 см (радиус колонки)
mg = 2 г (вес сухого геля)
Vg = 0.61 (парционный удельный объем полимера, образующего гель, в данном случае сефадекса)
V = 20.4 мл/ч (скорость элюции)
Vfr = 3.4 мл (объем фракции)

Слайд 12

Хроматография для анализа белков
Ионообменная
Эксклюзионная
Афинная

Слайд 13

Слайд 14

Хроматография: детекция и работа с хроматограммой
Способы детекции:
Спектрофотометрические
Визуальная оценка
Масс-спектрометрия

Слайд 15

Разрешение хроматограмы

Слайд 16

Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей

Слайд 17

Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей
Диализ - очистка коллоидных растворов

и субстанций высокомолекулярных веществ от растворённых в них низкомолекулярных соединений при помощи полупроницаемой мембраны.
При диализе молекулы растворенного низкомолекулярного вещества проходят через мембрану, а неспособные проходить через мембрану частицы остаются за ней.
Процесс диализа основан на процессах осмоса и диффузии

Слайд 18

Диск-электрофорез ПААГ в присутствии с ДДС-Na.

Слайд 19

Физико-химические свойства белков. Электрофоретические и хроматографические методы

Содержание

Хроматография История открытияХроматография - метод разделения и анализа смесей веществ, а также

Хроматография История открытия1872 Асти (Италия) – 1919 Воронеж (Россия)1893 — бакалавр физических и

Хроматография История открытияРаботал в Санкт-Петербурге, Варшавском университете, Москве, Нижнем Новгороде, Воронеже1918 — январь —

Первая хроматография проведена в 1900 году. М.Цвет использовал колонку, заполненную карбонатом

Хроматография — метод разделения смесей веществ или частиц, основанный на различиях в

Хроматографический процесс – многочисленные циклы сорбции–десорбции

Хроматография для анализа аминокислотБумажнаяГазоваяИонообменная Смесь из трёх аминокислот покраска: нингидрин и по

Хроматография для анализа белковИонообменнаяЭксклюзионнаяАфинная

Хроматография для анализа белковИонообменнаяЭксклюзионнаяАфинная

Vt = общий объём колонкиVo = объём подвижной фазы снаружи от

Хроматография для анализа белковИонообменнаяЭксклюзионнаяАфинная

Хроматография: детекция и работа с хроматограммойСпособы детекции:СпектрофотометрическиеВизуальная оценкаМасс-спектрометрия

Разрешение хроматограмы

Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей

Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесейДиализ - очистка коллоидных растворов

Диск-электрофорез ПААГ в присутствии с ДДС-Na.

Общие принципы электрофореза Полимеризация геля

Похожие презентации

Хроматография История открытия
Хроматография - метод разделения и анализа смесей веществ, а также

Хроматография История открытия
1872 Асти (Италия) – 1919 Воронеж (Россия)
1893 — бакалавр физических и

Хроматография История открытия
Работал в Санкт-Петербурге, Варшавском университете, Москве, Нижнем Новгороде, Воронеже
1918 — январь —

Первая хроматография проведена в 1900 году.
М.Цвет использовал колонку, заполненную карбонатом

Хроматография для анализа аминокислот
Бумажная
Газовая
Ионообменная
Смесь из трёх аминокислот
покраска: нингидрин и по

Хроматография для анализа белков
Ионообменная
Эксклюзионная
Афинная

Хроматография для анализа белков
Ионообменная
Эксклюзионная
Афинная

Vt = общий объём колонки
Vo = объём подвижной фазы снаружи от

Хроматография для анализа белков
Ионообменная
Эксклюзионная
Афинная

Хроматография: детекция и работа с хроматограммой
Способы детекции:
Спектрофотометрические
Визуальная оценка
Масс-спектрометрия

Диализ как метод очистки от низкомолекулярных примесей
Диализ - очистка коллоидных растворов