Лабораторная диагностика туберкулёза

Содержание

Слайд 2

МИКОБАКТЕРИИ ПОРЯДОК Actinomycetales СЕМЕЙСТВО Mycobacteriaceae РОД Mycobacterium (греч. myces – гриб,

МИКОБАКТЕРИИ

ПОРЯДОК Actinomycetales
СЕМЕЙСТВО Mycobacteriaceae
РОД Mycobacterium
(греч. myces – гриб, bacteria – палочка)

более 160 видов
ВИДЫ M. tuberculosis
M. bovis
M. аfricanum
Слайд 3

Слайд 4

M.tuberculosis в мазке из мокроты. Окраска по Ziehl-Neelsen .

M.tuberculosis в мазке из мокроты. Окраска по Ziehl-Neelsen .

Слайд 5

Среда Левенштейна-Йенсена Среда Финн-II Калий однозамещенный фосфорнокислый Магний сернокислый Магний лимоннокислый

Среда Левенштейна-Йенсена Среда Финн-II

Калий однозамещенный фосфорнокислый
Магний сернокислый Магний лимоннокислый

L-аспарагин Глицерин
Малахитовый зеленый
Яичная масса Вода дистиллированна
рН = 7,2–7,4

Калий однозамещенный
фосфорнокислый
Магний сернокислый
Натрий лимоннокислый
Квасцы железоаммонийные
Аммоний лимоннокислый
однозамещенный
Натрий глутаминовокислый
однозамещенный
Глицерин
Малахитовый зеленый
Яичная масса
Вода дистиллированная
pH = 6,3 - 6,8

Слайд 6

Среда Школьниковой Калий однозамещенный фосфорнокислый Натрий двузамещенный фосфорнокислый Магний сернокислый Натрий

Среда Школьниковой
Калий однозамещенный фосфорнокислый
Натрий двузамещенный фосфорнокислый
Магний сернокислый
Натрий лимоннокислый


Лимоннокислое аммиачное железо
L-аспарагин
Глицерин
Вода дистиллированная
Слайд 7

Микобактерии на среде Левенштейна-Йенсена

Микобактерии на среде Левенштейна-Йенсена

Слайд 8

Микобактерии на среде Левенштейна-Йенсена

Микобактерии на среде Левенштейна-Йенсена

Слайд 9

ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ МИКРОКАПСУЛА (АДГЕЗИВНЫЙ, АНТИФАГОЦИТАРНЫЙ ФАКТОР) ТУБЕРКУЛОПРОТЕИНЫ (ИНИЦИАЦИЯ ГЗТ) ЛИПИДЫ: -

ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ
МИКРОКАПСУЛА (АДГЕЗИВНЫЙ, АНТИФАГОЦИТАРНЫЙ ФАКТОР)
ТУБЕРКУЛОПРОТЕИНЫ (ИНИЦИАЦИЯ ГЗТ)
ЛИПИДЫ:
- КОРД-ФАКТОР (ТРЕГАЛОЗА-6,6-ДИМИКОЛАТ) (ТОКСИЧЕСКОЕ

ДЕЙСТВИЕ, ПОВРЕЖДЕНИЕ МЕМБРАН МИТОХОНДРИЙ, ТОРМОЖЕНИЕ МИГРАЦИИ ФАГОЦИТОВ)
- СУЛЬФАТИДЫ (СЕРОСОДЕРЖАЩИЕ ГЛИКОЛИПИДЫ)
- ВЖК: миколовая, фтионовая, туберкулостеариновая
- ВОСКА: Д, фтион, миколь
ФЕРМЕНТЫ АГРЕССИИ: ФИБРИНОЛИЗИН, ЛЕЦИТИНАЗА, НЕЙРАМИНИДАЗА, ГИАЛУРОНИДАЗА И ДР.

(УСИЛЕНИЕ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ КОРД-ФАКТОРА, СНИЖЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ И ФАГОСОМО-ЛИЗОСОМАЛЬНОГО СЛИЯНИЯ, АЛЛЕРГИЗАЦИЯ)

Слайд 10

Корд-фактор.

Корд-фактор.

Слайд 11

РЕЗИСТЕНТНОСТЬ УЛИЧНАЯ ПЫЛЬ - 10 ДНЕЙ КНИГИ – 3 МЕСЯЦА ВОДА

РЕЗИСТЕНТНОСТЬ
УЛИЧНАЯ ПЫЛЬ - 10 ДНЕЙ
КНИГИ – 3 МЕСЯЦА
ВОДА – 5 МЕСЯЦЕВ
СОЛНЕЧНЫЙ

СВЕТ – 90 МИНУТ
УЛЬТРАФИОЛЕТ – 2-3 МИНУТЫ
ВЛАЖНАЯ МОКРОТА – 100˚С – 5 МИНУТ
СУХАЯ МОКРОТА – 100 ˚С – 45 МИНУТ
МОЛОКО – 60 ˚С – 20 МИНУТ
ДЕЗИНФЕКТАНТЫ – 3-6 ЧАСОВ
СПИРТО-, ЩЕЛОЧЕ-, КИСЛОТОУСТОЙЧИВОСТЬ
Слайд 12

Слайд 13

Слайд 14

ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЕ ПРЕПАРАТЫ Препараты основного ряда Стрептомицин Изониазид Рифампицин Этамбутол Препараты резервного

ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

Препараты основного ряда
Стрептомицин
Изониазид
Рифампицин
Этамбутол
Препараты резервного ряда
Канамицин
Протионамид
Циклосерин
Капреомицин
Офлоксацин
ПАСК
Пиразинамид

Слайд 15

Специфическая профилактика Camille Guerin Albert Calmette Вакцина ВCG– живая аттенуированная из

Специфическая профилактика

Camille Guerin Albert Calmette

Вакцина ВCG– живая аттенуированная из


штамма M. bovis, 1921 г.
С 1925 г. – в СССР
Вакцинация –
3-7 день жизни
Ревакцинация –
7, 14 лет
(по результатам
пробы Манту)
Слайд 16

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА

МЕТОДЫ
ДИАГНОСТИКИ
ТУБЕРКУЛЕЗА

Слайд 17

Деконтаминация материала. Трехзамещенный фосфорнокислый натрий (Na3PO4) нейтрализация - кислота соляная (HCl)

Деконтаминация материала.
Трехзамещенный фосфорнокислый натрий (Na3PO4) нейтрализация - кислота соляная (HCl)

концентрированная, промывка дистиллированной водой.
или
Метод с использованием N-ацетил-L-цистеина и гидроокиси натрия
(NALC-NaOH)
Слайд 18

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД Окраска по методу Циля - Нильсена карболовый фуксин Циля

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД

Окраска по методу Циля - Нильсена

карболовый фуксин Циля
подогреть 2-3 раза


дать остыть, промыть
серная кислота 5%
промыть водой
метиленовая синька 3-5 мин.
Люминесцентная микроскопия
аурамин-родамин
Слайд 19

Микобактерии туберкулеза в препарате мокроты (люминесцентная микрофотограмма)

Микобактерии туберкулеза в препарате мокроты (люминесцентная микрофотограмма)

Слайд 20

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД Выделение чистой культуры (среды Левенштейна-Йенсена, Финн-II и др) Идентификация

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Выделение чистой культуры
(среды Левенштейна-Йенсена, Финн-II и др)
Идентификация
морфология

культуральные свойства
биохимические свойства
Определение чувствительности к противотуберкулезным препаратам
Слайд 21

Среда Сотона

Среда Сотона

Слайд 22

Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса

Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса

Слайд 23

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ ТУБЕРКУЛИН 1890 - получен Робертом Кохом 1908 – предложена внутрикожная проба Шарлем Манту

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ

ТУБЕРКУЛИН
1890 - получен Робертом Кохом
1908 – предложена внутрикожная проба Шарлем

Манту
Слайд 24

Очищенный туберкулин представляет собой очищенную смесь фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий

Очищенный туберкулин представляет собой очищенную смесь фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий

туберкулёза человеческого и бычьего видов.
Активное вещество препарата — аллерген туберкулопротеин — вызывает при постановке внутрикожной туберкулиновой пробы у инфицированных или вакцинированных лиц специфическую реакцию гиперчувствительности замедленного типа в виде местной реакции — гиперемии и инфильтрата (папулы).
Препарат предназначен для массовой туберкулинодиагностики с целью:
- отбора контингента для ревакцинации БЦЖ, а также перед первичной вакцинацией детей в возрасте 2 месяца и более;
- диагностики туберкулеза, в том числе для раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и подростков;
- определения инфицирования микобактериями туберкулеза.

Реакцию оценивают по следующим критериям:
- отрицательная — отсутствие инфильтрата и гиперемии;
- сомнительная — инфильтрат диаметром 2—4 мм или только гиперемия любого размера;
- положительная — наличие инфильтрата диаметром 5 мм и более;
- гиперергическая (резко положительная) — инфильтрат диаметром 17 мм и более у детей и подростков и 21 мм и более у взрослых, а также при появлении везикулы, лимфангита или регионарного лимфаденита независимо от размера инфильтрата.

Слайд 25

Слайд 26

ТУБЕРКУЛИНОВАЯ ПРОБА МАНТУ

ТУБЕРКУЛИНОВАЯ ПРОБА МАНТУ

Слайд 27

Слайд 28

ДИАСКИНТЕСТ Аллерген туберкулезный для внутрикожного введения. Представляет собой рекомбинантный белок, который

ДИАСКИНТЕСТ

Аллерген туберкулезный для внутрикожного введения.
Представляет собой рекомбинантный белок, который продуцируют генетически

модифицированные культуры Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT, - содержит два антигена, которые присутствуют в вирулентных штаммах Mycobacterium tuberculosis и отсутствуют в вакцинном штамме БЦЖ.

Показания
Предназначен для постановки внутрикожной пробы во всех возрастных группах с целью:
— диагностики туберкулеза, оценки активности процесса и выявления лиц с высоким риском развития активного туберкулеза;
— дифференциальной диагностики туберкулеза;
— дифференциальной диагностики поствакцинальной и инфекционной аллергии (гиперчувствительности замедленного типа);
— оценки эффективности противотуберкулезного лечения в комплексе с другими методами.

В связи с тем, что препарат не вызывает реакцию гиперчувствительности замедленного типа, связанную с вакцинацией БЦЖ, проба с препаратом Диаскинтест не может быть использована вместо туберкулинового теста для отбора лиц на первичную вакцинацию и ревакцинацию БЦЖ.

Слайд 29

Учет результатов Ответная реакция на пробу считается: отрицательной - при полном

Учет результатов
Ответная реакция на пробу считается:
отрицательной - при полном отсутствии инфильтрата

и гиперемии или при наличии "уколочной реакции" до 2 мм;
сомнительной - при наличии гиперемии без инфильтрата;
положительной - при наличии инфильтрата (папулы) любого размера.
Положительные реакции на Диаскинтест условно различаются по степени выраженности:
слабо выраженная реакция - при наличии инфильтрата размером до 5 мм;
умеренно выраженная реакция - при размере инфильтрата 5-9 мм;
выраженная реакция - при размере инфильтрата 10-14 мм;
гиперергическая реакция - при размере инфильтрата 15 мм и более, при везикуло-некротических изменениях и (или) лимфангоите, лимфадените независимо от размера инфильтрата.
Лица с сомнительной и положительной реакцией на Диаскинтест обследуются на туберкулез.
Реакция на Диаскинтест, как правило, отсутствует:
— у лиц, не инфицированных Mycobacterium tuberculosis;
— у лиц, ранее инфицированных Mycobacterium tuberculosis с неактивной туберкулезной инфекцией;
— у больных туберкулезом в период завершения инволюции туберкулезных изменений при отсутствии клинических, рентгено-томографических, инструментальных и лабораторных признаков активности процесса;
— у лиц, излечившихся от туберкулеза.
Проба с препаратом Диаскинтест может быть отрицательной у больных туберкулезом с выраженными иммунопатологическими нарушениями.
Слайд 30

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ реакция агглютинации, РСК, ИФА, РНГА, реакция преципитации в геле БИОЛОГИЧЕСКИЙ

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ
реакция агглютинации, РСК, ИФА, РНГА, реакция преципитации в геле

БИОЛОГИЧЕСКИЙ
морские свинки

– M. tuberculosis
кролики – M. bovis
Слайд 31

МЕСТО ГЕННОДИАГНОСТИКИ В ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКОБАКТЕРИЙ

МЕСТО ГЕННОДИАГНОСТИКИ В ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКОБАКТЕРИЙ

Слайд 32

Дифференцировать виды внутри комплекса M.tuberculosis Определить устойчивость комплекса M.tuberculosis к антибиотикам

Дифференцировать виды внутри комплекса M.tuberculosis
Определить устойчивость комплекса M.tuberculosis к

антибиотикам
Идентифицировать виды нетуберкулезных микобактерий

ПЦР позволяет:

Слайд 33

СХЕМА УСКОРЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ДЕКОНТАМИНАЦИЯ МАТЕРИАЛА БАКТЕРИОСКОПИЯ , ПОСЕВ НА ЖИДКУЮ

СХЕМА УСКОРЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
ДЕКОНТАМИНАЦИЯ МАТЕРИАЛА
БАКТЕРИОСКОПИЯ , ПОСЕВ НА ЖИДКУЮ И 2

ПЛОТНЫЕ СРЕДЫ
РОСТ НА СРЕДАХ
БАКТЕРИОСКОПИЯ (+/- КОРД-ФАКТОР)
ИММУНОХРОМОТОГРАФИЯ (+/- ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ К MTBC)
ПЦР
Слайд 34

Автоматизированная система BACTEC MGIT 960 Флуоресценция пробирок MGIT

Автоматизированная система
BACTEC MGIT 960

Флуоресценция пробирок MGIT

Слайд 35

Для определения роста микобактерий в системе MB/BacT используется технология колориметрического СО2-детектирования.

Для определения роста микобактерий в системе MB/BacT используется технология колориметрического СО2-детектирования.

Уникальные MB/BacT-флаконы со штрих-кодом содержат придонный сенсор, изменение цвета которого наблюдается при закислении среды вследствие микробного метаболизма, что регистрируется компьютером, который анализирует и интерпретирует данные.

Сканирование штрих-кода

Слайд 36

Одностадийный иммунохроматографический тест для качественного определения антигена MPT64 Mycobacterium tuberculosis после культивирования на питательных средах.

Одностадийный иммунохроматографический тест для качественного определения
антигена MPT64 Mycobacterium tuberculosis
после

культивирования на питательных средах.
Слайд 37

Слайд 38

Отрицательный результат Присутствие только одной контрольной полосы (С) указывает на отрицательный

Отрицательный результат
Присутствие только одной контрольной полосы (С) указывает на отрицательный результат.

Положительный

результат
Присутствие двух окрашенных полос (Т и С) в окне результатов указывает на положительный результат, независимо от того, какая полоса появилась первой.