Клиническая оценка пролиферативного потенциала клеток при комплексной диагностике опухолей слюнных желез

Содержание

Слайд 2

Болезни слюнных желез 3–24 % от всех заболеваний челюстно-лицевой области (Кобликов

Болезни слюнных желез 3–24 % от всех заболеваний
челюстно-лицевой области (Кобликов

В. В. с соавт., 2011)
Ошибочный диагноз при заболеваниях слюнных желез в 7–46 % случаев (Быкова А. А., с соавт., 2011)
Опухоли составляют 60 % случаев патологии слюнных желез среди пациентов, находящихся на стационарном лечении (Капленко М. Е., 2015)
75–80 % опухолей доброкачественные (Israel Y. et al.,
Sando Z. et al.; Taghavi N. et al., 2016)
Заболеваемость злокачественными опухолями больших слюнных желез в разных странах:
0,6–0,9 на 100 тыс. мужчин; 0,4–0,9 на 100 тыс. женщин
(Мерабишвили В. М. с соавт., 2016)
Большое разнообразие гистологических типов (МКБ-10)
Слайд 3

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ Врачебный осмотр (опрос, осмотр) Сиалосонография Компьютерная

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ
Врачебный осмотр (опрос, осмотр)
Сиалосонография
Компьютерная томография
Сиалография
Аспирацинная пункция

тонкой иглой
Магнитно-резонансная томография
Патогистологическое исследование
Слайд 4

МЕТОДЫ ОЦЕНКИ КЛЕТОЧНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ Радиоавтография Иммунофлуоресцентный метод, в том числе экспресс-метод

МЕТОДЫ ОЦЕНКИ КЛЕТОЧНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ

Радиоавтография
Иммунофлуоресцентный метод, в том числе экспресс-метод с

использованием поликлональных антител к тимидину
Серебрение белка, ассоциированного с ядрышковым организатором
Проточная цитометрия и лазерная ДНК-проточная цитометрия
Иммуногисто(цито)химические методы
(Ki-67, PCNA)
Слайд 5

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Разработка методики повышения качества комплексной дифференциальной диагностики доброкачественных и

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Разработка методики повышения качества комплексной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных

опухолей слюнных желез на основе клинической оценки пролиферативного потенциала неопластических клеток.
Слайд 6

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ Провести сравнительный анализ клинических проявлений новообразований слюнных желез и

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Провести сравнительный анализ клинических проявлений новообразований слюнных желез и результатов

лучевых методов обследования.
Оценить точность, чувствительность и специфичность аспирационной пункции тонкой иглой с последующим цитологическим исследованием для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных желез.
Сравнить пролиферативную активность клеток доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных желез путем иммуноцитохимического определения экспрессии белка Ki-67 и установить ее связь с клиническими симптомами и гистологическими вариантами новообразований слюнных желез.
Разработать алгоритм комплексной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных желез, включающий в себя оценку пролиферативной активности клеток иммуноцитохимическим методом определения индекса Ki-67, и оценить ее точность, чувствительность и специфичность.
Слайд 7

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Впервые для определения степени злокачественности опухолей слюнных желез проведено

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые для определения степени злокачественности опухолей слюнных желез проведено изучение

пролиферативного потенциала неопластических клеток методом иммуноцитохимического определения индекса Ki-67.
Впервые изучена эффективность комплексной диагностики опухолей слюнных желез с включением клинической оценки пролиферативного потенциала клеток.
Слайд 8

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Обследование пациентов с новообразованиями слюнных желез: общие - опрос,

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обследование пациентов с новообразованиями слюнных желез:
общие - опрос,

осмотр;
частные - зондирование протоков, сиалогафия;
специальные - сиалосонография, МСКТ, АПТИ,
иммуноцитохимическое определение экспрессии белка Ki-67, патогистологическое исследование.
Статистическая обработка результатов с использованием описательной статистики и дискриминантного анализа.
Слайд 9

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ Клинические и лучевые методы обследования на ранних

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Клинические и лучевые методы обследования на ранних стадиях канцерогенеза

не позволяют в большинстве случаев проводить дифференциальную диагностику доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных желез.
Пролиферативная активность неопластических клеток, выявляемая путем оценки экспрессии белка Ki-67 с помощью иммуноцитохимического метода, как правило, достоверно выше в злокачественных опухолях слюнных желез, чем в доброкачественных.
Включение в комплексное обследование иммуноцитохимического метода определения значения пролиферативного индекса Ki-67 позволяет повысить точность, чувствительность и специфичность дифференциальной клинико-морфологической диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных желез, в том числе на ранней стадии малигнизации.
Слайд 10

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ ПО ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЕ

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ ПО ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЕ

Слайд 11

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ ПО ЛОКАЛИЗАЦИИ Достоверность различий по критерию χ2 – p > 0,05

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ ПО ЛОКАЛИЗАЦИИ

Достоверность различий по критерию χ2 – p

> 0,05
Слайд 12

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ ПО ПОЛУ И ВОЗРАСТУ

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ ПО ПОЛУ И ВОЗРАСТУ

Слайд 13

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ Примечание: n – количество наблюдений; * – статистическая значимость

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

Примечание: n – количество наблюдений; * – статистическая значимость различий по

U-критерию Манна–Уитни;
** – статистическая значимость различий по критерию Z.
Слайд 14

УЛЬТРАЗВУКОВОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

УЛЬТРАЗВУКОВОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Слайд 15

СИАЛОГРАФИЯ Пациент И., 60 лет Плоскоклеточный рак Пациентка Б., 42 года Плеоморфная аденома

СИАЛОГРАФИЯ

Пациент И., 60 лет Плоскоклеточный рак
Пациентка Б., 42 года
Плеоморфная аденома

Слайд 16

МСКТ-ПРИЗНАКИ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ

МСКТ-ПРИЗНАКИ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ

Слайд 17

АСПИРАЦИОННАЯ ПУНКЦИЯ ТОНКОЙ ИГЛОЙ Примечание: * – нет признаков клеточной атипии;

АСПИРАЦИОННАЯ ПУНКЦИЯ ТОНКОЙ ИГЛОЙ

Примечание: * – нет признаков клеточной атипии; ** –

есть признаки клеточной атипии; *** – наряду с клетками плеоморфной аденомы небольшой участок, напоминавший цитологическую картину злокачественной опухоли.
Слайд 18

Плеоморфная аденома. АПТИ. Азур-эозин. Об. 40×. Пласты клеток опухоли, среди которых

Плеоморфная аденома. АПТИ.
Азур-эозин. Об. 40×.
Пласты клеток опухоли, среди
которых

виден оксифильный
внеклеточный матрикс.

Аденокистозный рак. АПТИ.
Азур-эозин. Об. 20×.
Клетки опухоли окружают внеклеточный матрикс.

Аденолимфома. АПТИ
Азур-эозин. Об. 40×
«Грязный» фон мазка; множество
онкоцитов, зрелые лимфоциты;
клетки фолликулов; макрофаги

Слайд 19

ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА ПРОЛИФЕРАЦИИ Ki-67 г. Киль, лунка планшета №

ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА ПРОЛИФЕРАЦИИ Ki-67

г. Киль, лунка планшета № 67,

1983 г.
10-я хромосома 10q25ter
Все фазы клеточного цикла, кроме фазы G0
Используется в большинстве исследований [Mercel D. E., McGuier W. L., 1990]
Моноклональные мышиные антитела Ki-67 (DAKO, Дания)
Слайд 20

ПОДГОТОВКА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Шприц с иглой 22 G, мазки

ПОДГОТОВКА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Шприц с иглой 22 G, мазки для

иммунофенотипирования и окраски, микропробирка Эппендорф со средой накопления (10%-й раствор альбумина, реополигюкин, раствор Хэнкса - 1:1:1)

Цитоцентрифуга Shandon  Cytospin 4 - (1000 об./мин в течение 5 мин) для получения монослойных мазков в очерченном поле диаметром 6 мм

Слайд 21

МИТОТИЧЕСКИЙ ИНДЕКС – процент позитивных клеток, ядра которых окрашивались в коричневый

МИТОТИЧЕСКИЙ ИНДЕКС – процент позитивных клеток, ядра которых окрашивались в коричневый

цвет, в случайно выбранных полях зрения
Слайд 22

ПРОЛИФЕРАТИВНЫЙ ИНДЕКС KI-67 В ОПУХОЛЯХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ *ДОСТОВЕРНОСТЬ РАЗЛИЧИЙ ПО U

ПРОЛИФЕРАТИВНЫЙ ИНДЕКС KI-67 В ОПУХОЛЯХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ

*ДОСТОВЕРНОСТЬ РАЗЛИЧИЙ ПО U

КРИТЕРИЮ МАННА-УИТНИ p < 0,05

Антиген Ki-67 в клетке мономорфной
аденомы, БДУ 8140/0 добавочной доли
левой околоушной слюнной железы.
АПТИ. Иммуноцитохимический метод. Об. 63×.

Слайд 23

ЭКСПРЕССИЯ KI-67 В КЛЕТКАХ ОПУХОЛЕЙ Пациентка О., 75 лет. Плеоморфная аденома

ЭКСПРЕССИЯ KI-67 В КЛЕТКАХ ОПУХОЛЕЙ
Пациентка О., 75 лет.
Плеоморфная аденома
Об. 40х

Пациентка

Д., 58 лет.
Аденокистозный рак
Об. 40х
Слайд 24

ЭКСПРЕССИЯ Ki-67 В ОПУХОЛИ УОРТИНА Пролиферативный индекс Ki-67: в клетках эпителия

ЭКСПРЕССИЯ Ki-67 В ОПУХОЛИ УОРТИНА

Пролиферативный индекс Ki-67:
в клетках эпителия
в

среднем составил 2,1 % (95 % ДИ = от 1 до 3,2 %);
в лимфоцитах -
от 0 до 30 %.

Антиген Ki-67 в клетках аденолимфомы околоушной слюнной железы.
АПТИ. Иммуноцитохимический метод. Об. 40×.

Слайд 25

ПРОЛИФЕРАТИВНЫЙ ИНДЕКС KI-67 В ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЯХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ

ПРОЛИФЕРАТИВНЫЙ ИНДЕКС KI-67 В ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЯХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ

Слайд 26

КОРРЕЛЯЦИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК С КЛИНИЧЕСКИМИ И МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ПРИЗНАКАМИ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ

КОРРЕЛЯЦИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК С КЛИНИЧЕСКИМИ И МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ПРИЗНАКАМИ ОПУХОЛЕЙ СЛЮННЫХ

ЖЕЛЕЗ

*Метод ранговой корреляции Пирсона
**Метод ранговой корреляции Спирмена

Слайд 27

Дискриминантный анализ – статистический метод, позволяющий с помощью решения уравнений линейных

Дискриминантный анализ – статистический метод, позволяющий с помощью решения уравнений линейных

классификационных функций отнести объект с определенным набором признаков (симптомов) к одному из известных классов [Михалевич И. М., Юрьева Т. Н., 2015]

Задачи:
оценить информативность различных признаков (симптомов), включенных и не включенных в линейные дискриминантные функции (уровень значимости по F-критерию соответствовал p < 0,05);
найти коэффициенты линейных классификационных функций (ЛКФ);
определить классификационную матрицу с оценками точности диагностики новообразований слюнных желез;
сравнить классификационные матрицы при включении в признаки пролиферативного индекса Ki-67 и без него.

Слайд 28

МАТЕМАТИКО-СТАТИСТИЧЕСКИЕ МОДЕЛИ МОДЕЛЬ № 1 (без включения индекса Ki-67) x1 –

МАТЕМАТИКО-СТАТИСТИЧЕСКИЕ МОДЕЛИ
МОДЕЛЬ № 1
(без включения индекса Ki-67)

x1 – длительность заболевания;


x2 – боль;
x3 – инфильтрация окружающих органов и тканей;
x4 – поражение нервов;
x5 – метастазы
x6 - возраст больного
x7 - рецидив опухоли

МОДЕЛЬ № 1
(с включением индекса Ki-67)

x1 – длительность заболевания;
x2 – боль;
x3 – инфильтрация окружающих органов и тканей;
x4 – поражение нервов;
x5 – метастазы;
x6 – результаты цитологического исследования;
x7 – пролиферативный индекс Ki-67.

Слайд 29

УРАВНЕНИЯ ДИСКРИМНАНТНЫХ ФУНКЦИЙ Модель № 1 F1 = –0,48 – 0,27

УРАВНЕНИЯ ДИСКРИМНАНТНЫХ ФУНКЦИЙ

Модель № 1
F1 = –0,48 – 0,27 × x1 – 0,72 × x2 – 0,77 × x3 – 0,53 × x4 + 0,52 × x5
–0,22 × x6 –0,23 × x7
F2 = –4,59 + 0,96 × x1 + 2,59 × x2 + 2,76 × x3 + 1,9 × x4 – 1,88 × x5
+0,8 × x6 +

0,83 × x7
Модель № 2
F1 = –0,77 – 0,52 × x1 – 0,49 × x2 – 0,44 × x3 – 0,85 × x4 +0,72 × x5 – 0,53 × x6 – 1,4 × x7
F2 = –7,5 + 1,87 × x1 + 1,84 × x2 + 1,67 × x3 + 2,95 × x4 –  2,48 × x5 + 1,73  × x6 + 4,6 × x7.
F1 > F2 опухоль доброкачественная
F2 > F1– опухоль злокачественная
Слайд 30

Точность дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных опухолей слюнных желез с применением

Точность дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных опухолей слюнных желез с применением

комплексной оценки симптомов

При отсутствии признаков инфильтрирующего роста и метастазирования - * 66,7 %; **- 88,9 %.

Слайд 31

Слайд 32

ВЫВОДЫ Характерные клинические и/или лучевые признаки злокачественных опухолей выявлены у 40

ВЫВОДЫ

Характерные клинические и/или лучевые признаки злокачественных опухолей выявлены у 40 % пациентов

с карциномами слюнных желез. При злокачественных новообразованиях длительность заболевания 10 лет и более отмечена в 47 % случаев, боль – в 27 %, при доброкачественных в 15 и в 2 % соответственно (p < 0,05). В группе пациентов со злокачественными опухолями слюнных желез с течением болезни 10 лет и более преобладали рак в плеоморфной аденоме и аденокарцинома, БДУ; в 71,4 % симптомы инфильтрирующего роста и метастазы не наблюдались. Отсутствие на ранних стадиях злокачественной трансформации клинических и лучевых признаков малигнизации требует применения дополнительных морфологических методов исследования.
Слайд 33

ВЫВОДЫ 2. Диагностическая точность аспирационной пункции тонкой иглой с последующим цитологическим

ВЫВОДЫ

2. Диагностическая точность аспирационной пункции тонкой иглой с последующим цитологическим исследованием

для определения доброкачественного или злокачественного характера новообразования слюнной железы была равна 85,5 %; правильная верификация морфологического типа – 76,8 %. Точность дифференциальной диагностики плеоморфной аденомы составила 84 %. Высокая чувствительность метода (98,5 %) сочеталась с низкой специфичностью (40 %), что обусловлено большим разнообразием гистологических вариантов злокачественных опухолей и развитием их путем малигнизации доброкачественных.
Слайд 34

ВЫВОДЫ 3. Пролиферативная активность клеток, определяемая иммуноцитохимическим методом, в большинстве наблюдений

ВЫВОДЫ

3. Пролиферативная активность клеток, определяемая иммуноцитохимическим методом, в большинстве наблюдений значительно

выше в злокачественных новообразованиях слюнных желез по сравнению с доброкачественными (p < 0,05). Пролиферативный индекс Ki-67 (медиана и интерквартильная широта) в доброкачественных опухолях равен 3 % (от 2 до 5), в злокачественных – 20 % (от 12 до 32). В плеоморфных аденомах, как наиболее часто встречающихся доброкачественных опухолях слюнных желез, вне зависимости от особенностей их гистологического строения, установлена корреляция между пролиферативным индексом Ki-67, размером новообразования (r = 0,441; p < 0,05) и рецидивом (ρ = 0,356; p < 0,05).
Слайд 35

ВЫВОДЫ 4. Метод комплексной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных

ВЫВОДЫ

4. Метод комплексной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей слюнных желез

с применением разработанного алгоритма, включающего в себя результаты клинического обследования, лучевого и цитологического исследования в сочетании с оценкой пролиферативного индекса Ki-67, обладает высокой точностью (97,1 %), чувствительностью (100 %) и специфичностью (86,7 %). Предложенный диагностический алгоритм позволяет выявить раннюю стадию малигнизации в отсутствии клинических и лучевых признаков злокачественности.
Слайд 36

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Определение индекса пролиферации Ki-67 необходимо проводить в первую очередь

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Определение индекса пролиферации Ki-67 необходимо проводить в первую очередь в

случае наличия боли, длительного течения заболевания (10 лет и более), неясной цитологической картины мазков пунктата.
Оптимальный срок после забора материала путем АПТИ должен быть не позднее 1 недели.
При отсутствии клинических, лучевых и цитологических признаков злокачественности, а также при индексе Ki-67 менее 10–12 % опухоль предварительно верифицируется как доброкачественная, и лечение в зависимости от локализации и размеров новообразования проводится в стоматологической поликлинике или отделении челюстно-лицевой хирургии.
При высоком индексе пролиферации (более 10–12 %) необходимо направление больного к онкологу с целью повторной АПТИ или инцизионной биопсии либо срочного интраоперационного цитологического исследования.